乳腺癌組織中miR218-5p、IGF-1的表達(dá)水平及其臨床意義

黃方杰，黃波，張藝超，許酼敏

中國(guó)科學(xué)院大學(xué)深圳醫(yī)院(光明)甲乳外科，廣東 深圳 518106

乳腺癌是臨床上常見(jiàn)的惡性腫瘤，也是女性的高發(fā)腫瘤之一，根據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，我國(guó)每年由于乳腺癌致死的婦女約有1.3萬(wàn)人，且有著逐年增長(zhǎng)的趨勢(shì)[1-2]。該病常發(fā)生于乳腺上皮，當(dāng)乳房某些細(xì)胞發(fā)生致病性基因突變時(shí)，細(xì)胞會(huì)不受控地增殖并導(dǎo)致腫瘤的形成[3-4]。細(xì)胞因子的作用在乳腺癌患者中的意義近年來(lái)也備受學(xué)者關(guān)注。目前的研究已證實(shí)，微小RNA-218-5p(miR218-5p)均參與諸多惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中，其高表達(dá)可促進(jìn)細(xì)胞增殖、分化、轉(zhuǎn)移等。胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(IGF-1)的結(jié)構(gòu)和胰島素類似，近年來(lái)也有研究發(fā)現(xiàn)，在胃癌等較多惡性腫瘤中可檢測(cè)出IGF-1的表達(dá)，與疾病的進(jìn)展密切相關(guān)[5-6]，但目前關(guān)于miR218-5p、IGF-1在乳腺癌組織中的臨床機(jī)制和臨床意義研究較少。本文旨在探討乳腺癌組織中miR218-5p、IGF-1表達(dá)水平的變化及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年6月至2019年8月在中國(guó)科學(xué)院大學(xué)深圳醫(yī)院(光明)甲乳外科接受手術(shù)切除的120例乳腺癌組織蠟塊標(biāo)本作為乳腺癌組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均符合乳腺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)病理組織學(xué)檢查明確證實(shí)[7]，國(guó)際抗癌聯(lián)盟的TNΜ分期結(jié)果為Ⅰ～Ⅳ期患者；②所有患者術(shù)前均沒(méi)有接受過(guò)放化療等治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其余惡性腫瘤；②合并其余重要器官功能障礙者；③合并心、腦血管系統(tǒng)性疾病。選擇乳腺癌旁組織60例作為癌旁組，良性乳腺纖維瘤90例作為良性病變組。三組患者的基線資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性，見(jiàn)表1。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員批準(zhǔn)。

表1 三組一般資料比較(±s)

表1 三組一般資料比較(±s)

注：BΜI為體質(zhì)量指數(shù)。

組別癌旁組良性病變組乳腺癌組F/t值P值例數(shù)60 90 120 BΜI(kg/㎡)25.70±2.16 25.68±2.50 26.40±2.13 3.019＞0.05年齡(年)45.51±3.24 46.40±3.18 45.45±3.30 2.468＞0.05病程(年)3.17±1.03 3.20±1.05 0.207＞0.05

1.2 方法

1.2.1 試劑及廠家 鼠抗人miR218-5p單克隆抗體、鼠抗人IGF-1單克隆抗體，均由于北京華夏遠(yuǎn)洋科技有限公司所提供，DAB顯色試劑盒由武漢博士德生物工程有限公司所提供。

1.2.2 檢測(cè)方法 選擇10%中性福爾馬林溶液將所有的組織標(biāo)本予以固定，常規(guī)進(jìn)行石蠟、包埋、切片等處理，依次順序編碼；對(duì)所有組織切片采用免疫組織化學(xué)染色法予以染色處理，將PB作為陽(yáng)性對(duì)照；miR218-5p、IGF-1陽(yáng)性表達(dá)判定方法：主要表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜中出現(xiàn)棕褐色、黃色著色現(xiàn)象，選擇400倍的光鏡、隨機(jī)5個(gè)視野，并對(duì)1 000個(gè)細(xì)胞里存在陽(yáng)性染色情況的結(jié)果予以記錄，陽(yáng)性細(xì)胞率=(陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)/1 000)×100%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，多組比較采用單因素方差分析，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，采用Spearman相關(guān)性分析法分析miR218-5p、IGF-1與TNΜ分期的相關(guān)性，以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組標(biāo)本組織中的miR218-5p、IGF-1陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率比較 乳腺癌組織中miR218-5p的陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率明顯低于良性病變組和癌旁組，IGF-1的陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率明顯高于良性病變組和癌旁組，良性病變組組織中miR218-5p陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率明顯低于癌旁組，IGF-1的陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率明顯高于癌旁組，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表2。

表2 三組標(biāo)本組織的miR218-5p、IGF-1陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率比較(±s，%)

表2 三組標(biāo)本組織的miR218-5p、IGF-1陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率比較(±s，%)

注：與癌旁組比較，a P＜0.05；與良性病變組比較，b P＜0.05。

組別癌旁組良性病變組乳腺癌組F值P值例數(shù)60 90 120 miR218-5p 1.21±0.28 0.70±0.11a 0.44±0.09ab 474.945＜0.05 IGF-1 2.63±0.20 3.80±0.55a 6.51±1.10 a 556.731＜0.05 b

2.2 不同TNΜ分期患者中miR218-5p、IGF-1陽(yáng)性細(xì)胞率比較 Ⅲ級(jí)和Ⅳ級(jí)乳腺癌患者miR218-5p陽(yáng)性細(xì)胞率明顯低于Ⅰ級(jí)和Ⅱ級(jí)乳腺癌患者，IGF-1陽(yáng)性細(xì)胞率明顯高于Ⅰ級(jí)和Ⅱ級(jí)乳腺癌患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表3。

表3不同TNM分期患者中miR218-5p、IGF-1陽(yáng)性細(xì)胞率比較(±s，%)

表3不同TNM分期患者中miR218-5p、IGF-1陽(yáng)性細(xì)胞率比較(±s，%)

TNΜ分期Ⅰ級(jí)和Ⅱ級(jí)Ⅲ級(jí)和Ⅳ級(jí)t值P值例數(shù)78 42 miR218-5p 0.35±0.03 0.23±0.01 25.139＜0.05 IGF-1 6.90±1.34 11.85±2.12 15.644＜0.05

2.3 乳腺癌組織中miR218-5p、IGF-1與TNΜ分期的相關(guān)性 將TNΜ分期作為因變量，miR218-5p、IGF-1指標(biāo)作為自變量，經(jīng)Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，miR218-5p與TNΜ分期呈負(fù)相關(guān)(r＝-0.385，P＜0.05)，IGF-1與TNΜ分期呈正相關(guān)(r＝0.693，P＜0.05)。

2.4 miR218-5p與IGF-1表達(dá)的相關(guān)性 經(jīng)Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，乳腺癌組織中miR218-5p與IGF-1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r＝-0.326，P＜0.05)。

3 討論

乳腺癌大多來(lái)自乳腺腺體小葉或?qū)Ч艿纳掀ぜ?xì)胞，主要表現(xiàn)類型分為四類，包括早期浸潤(rùn)性癌、非浸潤(rùn)性癌、特殊及非特殊型浸潤(rùn)性癌[8]。當(dāng)乳腺癌出現(xiàn)后，會(huì)逐漸向周?chē)鷶U(kuò)散，并對(duì)上皮膚和深部組織造成侵襲[9-10]。上皮膚侵襲可導(dǎo)致乳房皮膚發(fā)生凹陷、水腫，出現(xiàn)桔皮樣改變，向深部組織侵襲后，可對(duì)肋骨、胸肌等造成侵犯，從而加重病情[11]。

目前的研究發(fā)現(xiàn)，miRNA異常表達(dá)參與著諸多惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，約有50%發(fā)生注解的miRNAs基因組可在腫瘤相關(guān)的脆性位點(diǎn)中發(fā)生定位，并可發(fā)揮抑癌基因和癌基因的功效[12]。miR218-5p是miRNA的常見(jiàn)表現(xiàn)形式，其對(duì)蛋白質(zhì)的合成、細(xì)胞的生成、發(fā)育及凋亡等過(guò)程可發(fā)揮調(diào)控作用，其在惡性腫瘤中的表現(xiàn)形式可分為兩種，不僅可作為抑癌基因，對(duì)惡性腫瘤的形成發(fā)揮控制效果，又可作為誘癌基因，促使惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。IGF-1的主要組成包括70個(gè)氨基酸，和胰島素具有較高的同源性，主要的合成和分泌來(lái)自于肝臟細(xì)胞。臨床上的IGF-1具有廣泛的生物學(xué)活性，不僅具有類似胰島素的代謝活性及免疫調(diào)節(jié)作用，且有助于促進(jìn)細(xì)胞增殖及分化，還對(duì)細(xì)胞凋亡具有抑制作用。近年來(lái)有研究表明，早期乳腺癌患者中IGF-1指標(biāo)水平呈現(xiàn)升高的趨勢(shì)，IGF-1的表達(dá)情況與乳腺癌惡性表型密切相關(guān)。因此，IGF-1在臨床中逐漸成為預(yù)測(cè)乳腺癌發(fā)生情況的生物標(biāo)志物[13]。

本研究通過(guò)觀察顯示，和癌旁組織和良性病變組相比，乳腺癌組織中IGF-1陽(yáng)性率表達(dá)情況明顯更高，而miR218-5p陽(yáng)性表達(dá)明顯更低，通過(guò)分析是由于在乳腺癌中，①I(mǎi)GF-1作為生長(zhǎng)因子可作為促細(xì)胞分裂劑，能通過(guò)調(diào)控ΜAPK和PI3K/AKT信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞增殖和凋亡，轉(zhuǎn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生[14]；②而miR218-5p在腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)化過(guò)程中具有著關(guān)鍵調(diào)控作用，有助于對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用，抑制細(xì)胞凋亡，當(dāng)miR218-5p表達(dá)的降低，其抑制細(xì)胞凋亡的能力也隨之減弱，從而誘導(dǎo)了腫瘤的發(fā)生。在SHI等[15]試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，miR218-5p通過(guò)靶向TFF1以Erk1/2依賴的方式，對(duì)胃癌患者的增殖、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移等過(guò)程發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，通過(guò)提高其表達(dá)可能有助于抑制腫瘤進(jìn)展。此外，本研究中的Spearman相關(guān)性分析結(jié)果也顯示，miR218-5p、IGF-1和乳腺癌患者的腫瘤大小、分化程度、TNΜ分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)程度之間均有著密切聯(lián)系，且miR218-5p和IGF-1兩者之間也呈現(xiàn)者負(fù)相關(guān)的表達(dá)結(jié)果，也進(jìn)一步顯示了miR218-5p、IGF-1參與了乳腺癌患者病情的發(fā)生和發(fā)展，但miR218-5p和IGF-1兩者之間具體的生物學(xué)關(guān)系仍需持續(xù)探討。

綜上所述，乳腺癌患者組織中，miR218-5p表達(dá)較低，IGF-1有明顯高表達(dá)，miR218-5p、IGF-1水平變化和臨床病理特征有明顯相關(guān)性，本研究能為乳腺癌診斷、篩查等提供了一定依據(jù)。