金錢草莖、葉中槲皮素、山柰素及其重金屬含量測定對比研究

韓麗麗，孫俊英，李 飛

(1 濰坊市檢驗檢測中心，濰坊 261100；2 東營市食品藥品檢驗中心，東營 207091；3 山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院，濰坊 261061)

金錢草為報春花科植物過路黃LysimachiachristinaeHance的干燥全草，別名大金錢草、對座草、路邊黃、遍地黃[1]；味甘、咸，微寒；歸肝、膽、腎、膀胱經(jīng)；具有利濕退黃、利尿通淋、解毒消腫之效；用于濕熱黃疸、膽脹脅痛、石淋、熱淋、小便澀痛等[2]。金錢草主要含有酚酸類、黃酮類、苷類、揮發(fā)油、鞣質(zhì)及氨基酸等化學(xué)成分，其中酚酸類和黃酮類是其主要活性成分[3-5]，《中國藥典》2020年版一部對槲皮素和山柰素含量進(jìn)行了控制。筆者在檢驗工作過程中發(fā)現(xiàn)，同一批次金錢草含量測定結(jié)果不一致，究其原因是所抽樣品中莖葉比例不一致。另外，目前對金錢草重金屬含量測定尚無報道。本研究將金錢草莖、葉分開，分別測定莖、葉中槲皮素、山柰素以及鉛、鎘、銅、汞、砷5種重金屬的含量，為金錢草質(zhì)量控制以及安全評價提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

LC-20A高效液相色譜儀(日本島津公司)；MARS 6 CLASSIC微波消解儀(美國培安公司)；Agilent Technology 7900 ICP-MS(美國安捷倫公司)；XSE-204電子天平(瑞士梅特勒公司)；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司)；102電熱恒溫干燥箱(濰坊精鷹醫(yī)療器械有限公司)。

1.2 試藥

山柰素對照品(批號110861-201611，含量93.8%)、槲皮素對照品(批號100081-201610，含量99.1%)，均購自中國食品藥品檢定研究院；鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液(批號177011-1，含量1000 μg/ml)、砷標(biāo)準(zhǔn)溶液(批號163080-3，含量1000 μg/ml)、鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液(批號165017-1，含量1000 μg/ml)、汞標(biāo)準(zhǔn)溶液(批號16C043-1，含量1000 μg/ml)、銅標(biāo)準(zhǔn)溶液(批號16C060-1，含量1000 μg/ml)、金標(biāo)準(zhǔn)溶液(批號171042-2，含量1000 μg/ml)，均購自國家有色金屬及電子材料分析測試中心；內(nèi)標(biāo)(混合)標(biāo)準(zhǔn)溶液(批號5190-8593-1，含量100 μg/ml)，購自安捷倫科技有限公司。實驗用水為超純水；甲醇、硝酸為色譜純；其他試劑均為分析純。

1.3 樣品

經(jīng)鑒定均為金錢草(即報春花科植物過路黃LysimachiachristinaeHance的干燥全草)，信息見表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 槲皮素、山柰素含量測定[2]

2.1.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-0.4%磷酸溶液(55∶45)為流動相，檢測波長360 nm，流速1.0 ml/min，柱溫25 ℃，進(jìn)樣量10 μl，理論板數(shù)按槲皮素峰計算應(yīng)不低于2500。

2.1.2對照品溶液的制備

取槲皮素對照品、山柰素對照品適量，精密稱定，加80%甲醇制成每1 ml各含槲皮素4 μg、山柰素20 μg的溶液，即得。

2.1.3供試品溶液的制備

取各樣品全草、莖、葉粉碎，過三號篩，分別取約1.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50 ml，密塞，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液25 ml，精密加入鹽酸5 ml，置90 ℃水浴中加熱水解1 h，取出，迅速冷卻，轉(zhuǎn)移至50 ml量瓶中，用80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 測定方法

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μl，注入高效液相色譜儀，按照“2.1.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，即得。色譜圖見圖1、測定結(jié)果見表2。

圖1 金錢草HPLC色譜圖

表2 金錢草全草、莖、葉中槲皮素、山柰素含量測定結(jié)果

2.2 重金屬含量測定

2.2.1標(biāo)準(zhǔn)品貯備溶液、標(biāo)準(zhǔn)品溶液、內(nèi)標(biāo)溶液、空白溶液的制備

參考《中國藥典》2020年版四部通則2321。

2.2.2供試品溶液的制備

取槲皮素、山柰素含量測定項下的金錢草全草、莖、葉粉末，于60 ℃干燥2 h，取約0.25 g，精密稱定；置微波消解罐中，加硝酸10 ml，過氧化氫3 ml，密閉、消解；按表3消解程序消解2次，消解液冷卻至60 ℃以下，取出消解罐，放冷；將消解液轉(zhuǎn)入50 ml量瓶中，用少量水洗滌消解罐3次，洗液合并于量瓶中，加入金單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 μg/ml)200 μl，用水稀釋至刻度，搖勻，過濾，即得。

表3 消解程序

2.2.3測定方法[2]

測定時選取的同位素為63Cu、75As、114Cd、202Hg和208Pb，其中63Cu、75As以72Ge作為內(nèi)標(biāo)，114Cd以115In 作為內(nèi)標(biāo)，202Hg、208Pb以209Bi作為內(nèi)標(biāo)；以測量值(3次讀數(shù)的平均值)為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。測定供試品溶液，取3次讀數(shù)的平均值。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計算得相應(yīng)的濃度。在同樣的分析條件下進(jìn)行空白試驗。ICP-MS工作參數(shù)見表4、標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2、測定結(jié)果見表5。

表4 ICP-MS工作參數(shù)

表5 金錢草重金屬含量測定結(jié)果

圖2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

3 討論

筆者在檢驗工作中發(fā)現(xiàn)，不同使用單位同一來源(同一生產(chǎn)廠家同一批次)的金錢草，槲皮素、山柰素含量測定結(jié)果差異較大，出現(xiàn)了合格與不合格兩種結(jié)論。經(jīng)過對比樣品發(fā)現(xiàn)，二者莖葉比例不同，其中葉子少者含量低，導(dǎo)致不合格。本研究將金錢草莖、葉分開，分別進(jìn)行測定。結(jié)果顯示，莖、葉中槲皮素、山柰素含量差別較大，葉的含量較高，為莖的3～8倍。提示在飲片生產(chǎn)過程中，應(yīng)充分混合均勻，否則會導(dǎo)致同一生產(chǎn)廠家同一批次樣品，在不同使用單位，按照同一標(biāo)準(zhǔn)檢驗，出現(xiàn)不同結(jié)論；在抽樣和檢測過程中，取樣亦應(yīng)嚴(yán)格按照四分法取樣，保證取樣的均一性，才能保證實驗結(jié)果的重現(xiàn)性。

《中國藥典》2020年版一部收載的金錢草沒有重金屬測定項目，為考察其重金屬含量情況，本研究隨機(jī)對4批金錢草的全草、莖、葉進(jìn)行了測定。結(jié)果顯示，葉中5種重金屬元素鉛、鎘、銅、汞、砷的含量均高于莖。說明葉的重金屬富集較多，如果樣品中莖葉比例不一致，亦會出現(xiàn)不同測定結(jié)果，為金錢草安全評價提供了科學(xué)依據(jù)。

金錢草同名異物現(xiàn)象嚴(yán)重，偽品較多，摻偽率高達(dá)68.6%，而且多已破碎，真假難辨[6-10]。鑒于金錢草莖、葉中槲皮素、山柰素以及鉛、鎘、銅、汞、砷的含量差別較大，可以考慮將莖葉比例訂入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以提高金錢草的質(zhì)量控制，確保用藥安全。