一例雞大腸桿菌病的病原分離鑒定與治療

黃寶學(xué)，黃小玲

(1. 廣西田東縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西 田東 531500； 2. 廣西田東縣印茶鎮(zhèn)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)站，廣西 田東 531500)

2020年6月，田東縣某雞場的2 200只20日齡雛雞出現(xiàn)呼吸困難、腹瀉、排白色糞便、精神萎靡不振、少食或不食、縮頸、羽毛松亂、擠堆、跛行等癥狀。5 d共發(fā)病360羽，死亡91羽，發(fā)病率16.36%，病死率25.28%。雞場使用阿莫西林、氟苯尼考、硫酸粘菌素拌料、飲水治療4 d無效，前來求診。筆者通過對病死雞進(jìn)行剖檢，采集病料進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)鑒定，確診為大腸桿菌病，現(xiàn)將診治情況報(bào)道如下，供臨床參考。

1 材料與方法

1.1 檢測病料剖檢4只病死雞，觀察病理變化，并無菌采集肝臟、脾臟作為檢測病料。

1.2 主要試劑麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、普通肉湯培養(yǎng)基、微量生化鑒定管、藥敏紙片(泰妙菌素、硫酸粘菌素、丁胺卡那、安普霉素、阿莫西林、磺胺間甲氧嘧啶、諾氟沙星、恩諾沙星、氟苯尼考、大觀霉素)，均購自杭州微生物試劑有限公司。

1.3 致病性試驗(yàn)動(dòng)物7日齡健康雛雞30只，購自廣西富鳳農(nóng)牧集團(tuán)。

1.4 細(xì)菌分離培養(yǎng)無菌取病死雞的肝臟、脾臟劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察菌落形態(tài)特征并劃線傳代培養(yǎng)純化3 代后釣取純化的單菌落進(jìn)行革蘭氏染色，顯微鏡觀察細(xì)菌形態(tài)。單個(gè)典型菌落繼續(xù)接種普通肉湯增殖培養(yǎng)。

1.5 生化試驗(yàn)通過糖發(fā)酵試驗(yàn)(葡萄糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇)、尿素酶試驗(yàn)、V-P試驗(yàn)、M.R試驗(yàn)、明膠液化試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)檢測分離菌的生化特性。

1.6 致病性試驗(yàn)取健康雛雞20只，隨機(jī)分成2組，每組10 只。試驗(yàn)組用分離純化細(xì)菌的肉湯培養(yǎng)物(大腸桿菌濃度為3×109CFU/mL)皮下注射，每只0.2 mL；對照組皮下注射生理鹽水，每只 0.2 mL。各組雞隔離飼養(yǎng)，觀察發(fā)病死亡情況。對死亡雛雞剖檢，無菌取脾臟、肝臟組織，用相同方法進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)鑒定。

1.7 藥敏試驗(yàn)采用Kirby-Bauer紙片擴(kuò)散法，用10種藥物進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)：將純化細(xì)菌接種于普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，然后將各藥敏紙片貼于培養(yǎng)基表面，37 ℃培養(yǎng)16～24 h，測量抑菌圈直徑，記錄菌株的敏感程度：抑菌圈直徑小于10 mm為低度敏感，11～15 mm之間為中度敏感，大于15 mm為高度敏感。

2 結(jié)果

2.1 病理變化病死雞剖檢可見肝周炎、心包炎，心外膜水腫，心包囊混濁，囊內(nèi)充滿淡黃色的纖維素性滲出物，為典型的大腸桿菌病病變特征。

2.2 細(xì)菌分離培養(yǎng)及染色鏡檢在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上形成光滑濕潤、邊緣整齊、稍隆起的紅色菌落；在伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上形成圓形、稍隆起、表面光滑、紫黑色帶金屬光澤的菌落，直徑2.0 mm左右。釣取菌落革蘭氏染色，顯微鏡下觀察呈粉紅色、短小桿狀、兩端鈍圓、散在或成對的革蘭氏陰性桿菌(見圖1)。

圖1 分離菌形態(tài)特征(1 000×)

2.3 生化試驗(yàn)結(jié)果分離菌能發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇，且產(chǎn)酸產(chǎn)氣；蔗糖發(fā)酵試驗(yàn)產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；不液化明膠；吲哚試驗(yàn)和M.R試驗(yàn)均為陽性；尿素酶試驗(yàn)陰性；V-P試驗(yàn)陰性(見表1)。結(jié)合革蘭氏染色鏡檢與生化特性，確定分離菌為大腸桿菌。

表1 分離菌生化特征

2.4 致病性試驗(yàn)結(jié)果對照組全部雞無發(fā)病死亡，正常存活。試驗(yàn)組雞接種菌液后12 h開始發(fā)病，臨床表現(xiàn)為精神萎靡、腹瀉、少食或廢食，24～48 h陸續(xù)死亡，發(fā)病率、死亡率均達(dá)100%。剖檢病死雞可見心包炎、肝周炎、氣囊炎。采集肝、脾組織涂片鏡檢，可回收到致病菌，生化試驗(yàn)結(jié)果與接種菌一致，表明分離菌為致病性大腸桿菌。確診本次發(fā)病為大腸桿菌病。

2.5 藥敏試驗(yàn)結(jié)果分離的大腸桿菌對安普霉素、丁胺卡那、恩諾沙星高度敏感，對其他藥物敏感性較差(見表2)。

表2 分離菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果

3 防治措施

根據(jù)診斷及藥敏試驗(yàn)結(jié)果，采取以下防治方案：(1)用10%安普霉素2 g/kg拌料，10%恩諾沙星1 g/kg 兌水，隔天交叉輪換用藥，連用6 d。(2)對病情嚴(yán)重雞及病死雞作深埋無害化處理。(3)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理及做好衛(wèi)生清潔消毒，注意通風(fēng)換氣，減少雞群應(yīng)激反應(yīng)。用藥第7 d后再無雞發(fā)病死亡，疫情得到有效控制。

4 討論

4.1雞大腸桿菌病是由致病性大腸桿菌(Escherichiacoli)引起的細(xì)菌性傳染病，對養(yǎng)雞業(yè)危害較大[1]。不同品種及日齡的雞一年四季均可感染，以2～3 周齡雛雞多發(fā)，發(fā)病率和死亡率較高[2]。本病可通過水平傳播和垂直傳播，可單純感染但更多的是繼發(fā)和混合感染[3，4]。大腸桿菌病是環(huán)境性和條件性疾病，環(huán)境衛(wèi)生條件差、各種應(yīng)激、飼養(yǎng)管理不當(dāng)?shù)瓤烧T發(fā)本病發(fā)生。在生產(chǎn)上雞場一方面要防止外源性致病菌的侵入，嚴(yán)格檢疫購入雛雞；另一方面要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和環(huán)境衛(wèi)生消毒，推行全進(jìn)全出制飼養(yǎng)模式，保持合理的飼養(yǎng)密度。在冬春寒冷和氣溫多變季節(jié)要做好雞舍的通風(fēng)防寒保暖，防止惡劣環(huán)境給雞造成的不良應(yīng)激。提供全價(jià)營養(yǎng)飼料，保證雞充足的營養(yǎng)供給，提高雞群抵抗力。及時(shí)清除舍內(nèi)糞污，加大消毒力度，減少大腸桿菌及其他病原生長繁殖。

4.2雞大腸桿菌病的臨床癥狀表現(xiàn)多樣，因菌株侵入的數(shù)量和毒力、感染途徑、應(yīng)激因素、雞的不同生長期等有很大差別，常見有敗血癥、腸炎、眼炎、關(guān)節(jié)炎、氣囊炎、臍炎等癥狀[5]。臨床上與雞沙門氏菌病、滑液囊支原體病、傳染性法氏囊病等癥狀相似，加上近年來混合感染病例增多，只有通過實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)確定感染病原才能作出準(zhǔn)確診斷，采取針對性的防控措施控制疫情蔓延。

4.3本次采用10種抗菌藥物對分離的大腸桿菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果只對3種藥物高度敏感，表明該菌已產(chǎn)生了廣泛的耐藥性。因此，雞場在平時(shí)的飼養(yǎng)中不要盲目、超量、濫用和添加抗生素藥物，發(fā)生大腸桿菌病(或其他疫病)時(shí)最好進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，選擇敏感藥物治療，療程、劑量要足夠，用法要恰當(dāng)，并將幾種藥物交替穿梭使用[7]。