多重耐藥鮑曼不動桿菌耐藥性及耐藥基因檢測研究

吳園園

菏澤市立醫(yī)院檢驗科，山東菏澤 274000

鮑曼不動桿菌是臨床常見病原菌， 也是醫(yī)院獲得性感染的常見細(xì)菌類型。 近年來，鮑曼不動桿菌感染的發(fā)生率持續(xù)上升，成為非發(fā)酵菌感染的主要類型，臨床防控形勢嚴(yán)峻，需積極分析、處理[1]。 鮑曼不動桿菌的進(jìn)化能力較強(qiáng)，因而極易發(fā)展為多重耐藥菌，醫(yī)院內(nèi)侵入性操作等治療， 為鮑曼不動桿菌傳播和耐藥性形成創(chuàng)造了條件，多重耐藥鮑曼不動桿菌感染率進(jìn)一步提升[2]。為進(jìn)一步提升多重耐藥鮑曼不動桿菌防控效果， 應(yīng)積極分析其耐藥性情況，并探明流行耐藥基因型，從而為耐藥性防控與阻斷提供一定參考資料， 為此該次研究收集2019 年1 月—2020 年1 月期間該院臨床病例標(biāo)本96 例分離出的96 株的鮑曼不動桿菌作為研究菌株，分析其對常用抗菌藥物耐藥性和耐藥基因情況，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集菏澤市立醫(yī)院臨床病例標(biāo)本96 例分離出的96 株的鮑曼不動桿菌作為研究菌株。 臨床病例標(biāo)本來源為 70 例痰液，11 例拭子，6 例傷口分泌物，4 例引流液，3 例血液，2 例其他。

1.2 細(xì)菌培養(yǎng)鑒定及藥敏試驗

質(zhì)控菌株 （室內(nèi)質(zhì)控） 采用鮑曼不動桿菌(ATCC 19606)。所有臨床病例標(biāo)本均進(jìn)行細(xì)菌菌株分離、培養(yǎng)，經(jīng)微生物細(xì)菌鑒定/藥敏系統(tǒng) （BD PhoenixTM 100，美國），依照《上海市醫(yī)療機(jī)構(gòu)耐藥性病原菌哨點(diǎn)監(jiān)測方案》進(jìn)行菌株鑒定，并行藥敏試驗[3]。

1.3 耐藥基因檢測

PCR 引物、陽性對照試劑盒和陰性對照試劑盒等，均由無錫市克隆遺傳技術(shù)研究所提供。

挑純培養(yǎng)菌落制作基因檢測模板液，- 20℃保存待用；基因檢測采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）法，PCR 引物、陽性對照等均來源于無錫市克隆遺傳技術(shù)研究所；檢測β-內(nèi)酰胺類耐藥相關(guān)基因(OXA-23 群、OXA-51 群，TEM、ADC) ,氨基糖苷類耐藥基因[aac(6") -Ib、aph (3")–I]，喹諾酮類耐藥基因(gyrA)，外膜蛋白基因(carO)，外排泵基因(adeB)等耐藥相關(guān)性基因，出現(xiàn)與陽性對照分子相當(dāng)?shù)哪康臈l帶為陽性。經(jīng)PCR 擴(kuò)增體系處理后，產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳，出現(xiàn)與陽性對照分子相當(dāng)?shù)哪康臈l帶為陽性。

1.4 觀察指標(biāo)

統(tǒng)計臨床標(biāo)本分離的鮑曼不動桿菌株對頭孢菌素、喹諾酮類、碳青霉烯類等常用抗菌藥物耐藥性，并分析鮑曼不動桿菌株對常用抗菌藥物的耐藥基因情況。

1.5 統(tǒng)計方法

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計學(xué)軟件予以數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料以頻數(shù)和百分比(%)表示，組間差異比較采用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床標(biāo)本分離菌株對常用抗菌藥物耐藥統(tǒng)計

臨床標(biāo)本分離的鮑曼不動桿菌株對頭孢他定、頭孢吡肟、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、亞胺培南、美羅培南、慶大霉素耐藥率均高達(dá)93%以上，顯著高于氨芐西林-舒巴坦、替加環(huán)素、復(fù)方新諾明耐藥率，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。 見表 1。

表1 臨床標(biāo)本分離菌株（鮑曼不動桿菌）對常用抗菌藥物耐藥統(tǒng)計

2.2 耐藥基因檢測結(jié)果分析

耐藥基因檢測顯示， 臨床標(biāo)本分離的鮑曼不動桿菌株 OXA-51 群、ADC、aac(6")-Ib、aph(3")-I、gyrA 突變、carO 缺失等基因陽性率較高， 均超過80%， 顯著高于OXA-23 群、TEM 和 adeB 耐藥基因陽性率， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。 見表 2。

表2 耐藥基因檢測結(jié)果統(tǒng)計

3 討論

鮑曼不動桿菌具有較強(qiáng)的自身生存能力， 且進(jìn)化能力較強(qiáng)，因而極易出現(xiàn)傳播和耐藥問題，尤其是綜合性醫(yī)院多重耐藥鮑曼不動桿菌感染率較高[4]。 重癥監(jiān)護(hù)病房、外科病房、呼吸科病房等科室是多重耐藥鮑曼不動桿菌的高發(fā)科室，一旦出現(xiàn)感染，治療難度較大，嚴(yán)重威脅患者生命安全，必須積極防控其增加與播散[5]。

鮑曼不動桿菌耐藥性研究顯示[6-7]，醫(yī)院重癥監(jiān)護(hù)室(ICU)及其他住院科室，鮑曼不動桿菌耐藥性較高，對頭孢菌素、喹諾酮類抗生素等耐藥性較為嚴(yán)重，頭孢他定耐藥率高達(dá)90%~98%， 頭孢吡肟耐藥率高達(dá)92%~97%、環(huán)丙沙星耐藥率高達(dá)91%~95%、左氧氟沙星耐藥率約為91%~97%,耐藥率均達(dá)到了90%以上。該次研究對臨床病例分離的鮑曼不動桿菌株進(jìn)行藥敏試驗也發(fā)現(xiàn)，對頭孢他定（95.83%）、頭孢吡肟（96.88%）、環(huán)丙沙星（93.75%）、左氧氟沙星（95.83%）較高，耐藥率較高，與上述文獻(xiàn)研究一致， 可知該院分離的菌株對頭孢菌素、喹諾酮類抗生素普遍耐藥。 此外，該次研究還發(fā)現(xiàn)，亞胺培南（94.79%）、美羅培南（93.75%）、慶大霉素耐藥率（98.96%）均高達(dá)93%以上，顯著高于氨芐西林-舒巴坦（65.63%）、替加環(huán)素（61.46%）、復(fù)方新諾明耐藥率（64.58%）（P＜0.05），可知該院分離的菌株對氨基糖苷類和碳青霉烯類抗生素也普遍耐藥， 同時需注意氨基糖苷類、 磺胺類及甘氨酰四環(huán)素類抗生素雖然耐藥性低于頭孢菌素等抗菌藥，但是耐藥性也已經(jīng)超過60%，耐藥率也較高， 提示該院臨床標(biāo)本分離出的鮑曼不動桿菌對常用抗菌藥物耐藥性較高，具有多重耐藥特征。 但是， 目前尚未完全探明多重耐藥鮑曼不動桿菌的耐藥機(jī)制，但是臨床研究對其基因序列比對發(fā)現(xiàn)，其耐藥機(jī)制可能與β-內(nèi)酰胺類耐藥相關(guān)基因 (OXA-23 群、ADC等),喹諾酮類耐藥基因(gyrA)，氨基糖苷類耐藥基因[aph(3")–I]，外排泵基因(adeB)等耐藥基因形成或攜帶密切相關(guān)[8-9]。 鮑曼不動桿菌的進(jìn)化能力較強(qiáng)，臨床實(shí)驗室研究相關(guān)文獻(xiàn)報道顯示[10-11]，其基因突變風(fēng)險較高，在抗生素使用后，易出現(xiàn)OXA-51 群（陽性率70%~80%）、aac(6")-Ib（陽性率 65%~85%）、aac(6")-Ib（陽性率 70%~92%）、carO 缺失（陽性率 72%~86%）、aph (3")-I（陽性率69%~86%）、gyrA 突變（陽性率62%~89%）等耐藥基因，陽性率均高達(dá)60%~90%，且較多菌株攜帶多種耐藥基因，較容易出現(xiàn)新耐藥基因的亞型。 該次研究對該院臨床標(biāo)本分離出的， 具有多重耐藥特征的鮑曼不動桿菌進(jìn)行了基因分析，耐藥基因檢測顯示，臨床標(biāo)本分離的鮑曼不動桿菌株 OXA-51 群（81.25%）、ADC（88.54%）、aac (6")-Ib （87.50%）、aph (3")-I （86.46%）、gyrA 突變（84.38%）、carO 缺失（81.25%）等基因陽性率較高，均超過 80%，顯著高于 OXA-23 群（60.42%）、TEM（59.38%）和 adeB 耐藥基因陽性率（41.67%）（P＜0.05），提示具有多重耐藥特征的鮑曼不動桿菌攜帶耐藥基因的百分比較高，因而易出現(xiàn)頭孢菌素、喹諾酮類、氨基糖苷類和碳青霉烯類抗生素耐藥問題， 可為鮑曼不動桿菌流行耐藥基因型別特征分析提供一定參考， 密切監(jiān)測其耐藥性；對于醫(yī)內(nèi)出現(xiàn)多重耐藥的鮑曼不動桿菌，應(yīng)積極進(jìn)行藥敏試驗，同進(jìn)行基因檢測，及時分析β-內(nèi)酰胺類耐藥、喹諾酮類耐藥和氨基糖苷類耐藥等相關(guān)基因型，總結(jié)其流行特征[12]。ICU、外科病房等醫(yī)院獲得性感染高發(fā)科室，應(yīng)加強(qiáng)環(huán)境消毒，做好消毒、通風(fēng)措施，有效隔離感染者，嚴(yán)格執(zhí)行接觸隔離措施，降低鮑曼不動桿菌的播散風(fēng)險。

綜上所述， 臨床標(biāo)本分離的鮑曼不動桿菌株對常用抗生素存在多重耐藥性，且多數(shù)攜帶耐藥基因，應(yīng)注意鑒別與防控各類基因特征， 積極探明鮑曼不動桿菌的耐藥特征與耐藥基因型的傳播途徑， 為多重耐藥鮑曼不動桿菌防控與阻斷提供客觀的理論數(shù)據(jù)。