液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定果蔬中的涕滅威及其代謝物

趙海濤 王磊 王帥 劉會(huì)會(huì) 戚繼存 王雅靜 張亮 鄭百芹 劉洋

摘要 [目的]建立液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC/MS）測(cè)定果蔬（番茄、黃瓜、韭菜、馬鈴薯、西瓜、蘋果和橙子）中涕滅威及其代謝物的分析方法。[方法]樣品經(jīng)組織搗碎，乙腈提取，經(jīng)氨基柱和二氯甲烷+甲醇（95∶5）凈化洗脫處理，2 mL甲醇定容，采用Phenomenex H18色譜柱分離。[結(jié)果]涕滅威及其代謝物在0.01和0.02 mg/kg 2個(gè)添加水平下回收率均為84.667%～104.333%，RSD均為0～5.37%，試驗(yàn)方法檢出限為0.01 mg/kg，相關(guān)系數(shù)均大于0.999 3。[結(jié)論]該方法操作簡(jiǎn)便、快捷，安全性高，只通過一種檢測(cè)方法便可同時(shí)測(cè)定果蔬中涕滅威及其代謝物的殘留量，準(zhǔn)確度和靈敏度高，定量下限低于或等于國(guó)家農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜;涕滅威及其代謝物;果蔬

中圖分類號(hào) TS.207.5+3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A文章編號(hào) 0517-6611（2021）02-0196-05

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.02.053

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Determination of Aldicarb and Its Metabolites in Fruits and Vegetables by Liquid ChromatographyTandem Mass Spectrometry

ZHAO Haitao1，2，3， WANG Lei1，2，3，WANG Shuai1，2，3 et al

（1.Tangshan Food and Drug Comprehensive Testing Center， Tangshan，Hebei 063000;2. Hebei Agricultural Products Quality and Safety Testing Innovation Center， Tangshan，Hebei 063000;3. Tangshan Institute of Industrial Technology for Functional Agricultural Products， Tangshan，Hebei 063000）

Abstract [Objective]To establish a method for the aldicarb and its metabolites detection of 7 vegetables and fruits （tomato， cucumber， leek， potato， watermelon， apple， and orange） by liquid chromatographytandem mass spectrometry. [Method]The samples were mashed， and then extracted with acetonitrile， the extraction was purified by the amino column and dichloromethane + methanol （95∶5）. After constant volume with 2 mL methanol， the target analytes were separated on a Phenomenex H18 column. [Result]The recovery rates of aldicarb and its metabolites were 84.667%-104.333%， RSD were 0-5.37% at two added levels of 0.01 and 0.02 mg/kg. The detection limit of the experimental method was 0.01 mg/kg. The correlation coefficients were all greater than 0.999 3. [Conclusion]The method is simple， fast and safe. It can simultaneously determine aldicarb and its metabolites in vegetables and fruits with only one detection method. The accuracy and sensitivity are high， and the lower limit of quantification is less than or equal to national pesticide residue limit standards.

Key words Liquid chromatographytandem mass spectrometry;Aldicarb and its metabolites;Fruits and vegetables

涕滅威（C7H14N2O2S）具有觸殺、胃毒和內(nèi)吸作用，能被植物根系吸收，傳導(dǎo)到植物地上部各組織器官，速效性好，持效期長(zhǎng)。然而農(nóng)藥檢測(cè)已經(jīng)不僅僅局限于農(nóng)藥本體，其代謝物產(chǎn)生的毒性作用逐漸成為熱點(diǎn)[1-8]。通常可通過超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測(cè)蔬菜中涕滅威及其代謝物[9]，也可通過固相萃取液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定生姜中涕滅威及其代謝物[10]。

《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》中涉及到涕滅威及其代謝物的測(cè)定方法是將試樣中氨基甲酸酯類農(nóng)藥及其代謝物用乙腈提取，經(jīng)過濾、濃縮后，采用固相萃取技術(shù)分離、凈化、濃縮后，使用帶熒光檢測(cè)器和柱后衍生系統(tǒng)的高效液相色譜進(jìn)行檢測(cè)，保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量[11]。該方法操作步驟繁瑣、耗時(shí)耗力?！端褪卟酥?50種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》中涕滅威砜測(cè)定方法是將試樣用乙腈勻漿提取，鹽析離心，Sep-Pak Vac柱凈化，用乙腈+甲苯（3+1）洗脫農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定，外標(biāo)法定量[12]。上述方法雖能準(zhǔn)確地測(cè)出蔬菜、水果中殘留的涕滅威砜，但未提及本體。

近年來隨著質(zhì)譜儀器的發(fā)展，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法能夠?qū)?fù)雜體系或混合物中多種物質(zhì)進(jìn)行鑒別和測(cè)定，被廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥檢測(cè)中，易推廣。陳紅平等[13]利用超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)茶葉中包括涕滅威及其代謝物在內(nèi)的10種農(nóng)藥進(jìn)行了檢測(cè)，該方法在7.5、15.0、30.0 μg/kg添加水平上回收率達(dá)到72.2%～92.5%，RSD≤9.2%。趙肖華等[14]利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蔬菜水果中5種阿維菌素類藥物的殘留量，檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定可靠，可以滿足實(shí)際需要。梅麗蕓等[15]利用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定土壤和甘藍(lán)中的甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和虱螨脲，經(jīng)試驗(yàn)測(cè)定回收率在74.63%～106.60%，RSD為0.44%～8.56%，該方法靈敏度高、準(zhǔn)確性好，能快速檢測(cè)土壤和甘藍(lán)中的甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和虱螨脲。

該研究通過優(yōu)化前處理操作，利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)蔬菜、水果中涕滅威及其代謝物殘留量進(jìn)行測(cè)定，達(dá)到用同一種方法檢測(cè)本體和代謝物的目的。

1 材料與方法

1.1 儀器

LCMS-8040液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜，配有電噴霧離子源（ESI），日本島津公司;氨基固相萃取柱，北京迪馬科技有限公司;T25均質(zhì)器，IKA公司;TTL-DC Ⅱ型氮吹儀，北京同泰聯(lián)科技發(fā)展有限公司;SZ13022-NY 0.2 μm有機(jī)濾膜，天津市領(lǐng)航實(shí)驗(yàn)設(shè)備股份有限公司;GM-K06格明加熱破壁料理機(jī)，格明電器實(shí)業(yè)有限公司;T-200電子天平，常熟雙杰儀器制造廠;PDI超純水器，上海和泰儀器有限公司。

1.2 試材

標(biāo)準(zhǔn)品涕滅威、涕滅威亞砜、涕滅威砜購(gòu)于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所;乙腈、二氯甲烷、甲醇均為色譜純，購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司;氯化鈉為分析純，購(gòu)于MREDA公司;0.05%甲酸溶液、5 mmol/L甲酸銨溶液，購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司;試驗(yàn)用水為蒸餾水（屈臣氏）。果蔬樣品：番茄、黃瓜、韭菜、馬鈴薯、西瓜、蘋果和橙子，購(gòu)于唐山市批發(fā)市場(chǎng)。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。

1.3.1.1

混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。分別吸取濃度為1 000 μg/mL的涕滅威、涕滅威砜和涕滅威亞砜標(biāo)準(zhǔn)品100 μL，用甲醇定容至10 mL，得到濃度為10 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，于4 ℃冰箱內(nèi)保存。

1.3.1.2

混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。用甲醇逐級(jí)稀釋成濃度分別為0.01、0.02、0.04、0.08、0.12、0.16、0.32 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，于4 ℃冰箱內(nèi)保存。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。

每個(gè)濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液均進(jìn)樣2 μL，獲得相應(yīng)濃度（x，mg/L）對(duì)應(yīng)的色譜峰面積（y），將這些數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，可獲得各供試農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)曲線及其線性響應(yīng)情況和相關(guān)系數(shù)。

1.3.3 精密度試驗(yàn)。

取空白蔬菜、水果樣品，添加農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，加標(biāo)量0.01和0.02 mg/kg，每個(gè)濃度做3個(gè)平行，根據(jù)精密度公式

RSD=sx×100%=ni=1（xi-）2n-1x×100%

可計(jì)算樣品精密度。

1.3.4 檢出限的測(cè)定。以基線噪聲（S = 3N）確定方法的檢出限（LOD）。

1.3.5

回收率試驗(yàn)。在樣品中分別添加涕滅威及其代謝物，添加濃度分別為0.01和0.02 mg/kg，每個(gè)添加水平重復(fù)3次。根據(jù)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品回收率計(jì)算公式：回收率=（回收濃度/添加回收濃度）×100%，進(jìn)而得出平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

1.3.6 樣品前處理。

樣品取可食部分，經(jīng)切割后采用四分法取樣放入攪拌機(jī)內(nèi)打碎，用天平準(zhǔn)確稱取25.0 g樣品，加入乙腈50 mL，放于高速勻漿機(jī)內(nèi)，勻漿提取2 min，轉(zhuǎn)入到100 mL 的裝有6.0 g氯化鈉的具塞量筒中（氯化鈉量以足量飽和即可），劇烈振蕩約30 s，在室溫下靜置30 min，使乙腈相和水相分層。

凈化：從乙腈層中吸取10.0 mL溶液放入10 mL試管中，在80 ℃的氮吹儀上緩慢吹至近干，加2 mL二氯甲烷+甲醇（95+5）定容，在漩渦振蕩儀上振蕩30 s，取氨基固相萃取柱，用3 mL淋洗液淋洗柱子，加2 mL樣品于柱內(nèi)，用12 mL二氯甲烷+甲醇（95+5）分3次洗脫試管，收集洗液，在50 ℃的氮吹儀上緩慢吹到近干，用2 mL甲醇定容，定容后液體過0.22 μm 的有機(jī)濾膜，裝入進(jìn)樣小瓶待測(cè)。

1.4 色譜條件

1.4.1 色譜條件。

色譜柱：Phenomenex H18（50 mm×3.00 mm，2.60 μm）;柱溫：40 ℃;流速：0.40 mL/min;進(jìn)樣量：2 μL;流動(dòng)相：甲醇、5 mmol甲酸銨+0.05%甲酸水溶液;洗脫程序：梯度洗脫見表1。

1.4.2 質(zhì)譜條件。

電噴霧離子源（ESI）;霧化氣流量3.00 L/min;干燥氣流量15.00 L/min;DL管溫度為250 ℃;涕滅威采用正電離模式，其他質(zhì)譜條件見表2。

2 結(jié)果與分析

2.1 液相色譜條件的優(yōu)化

試驗(yàn)對(duì)比了溶劑及流動(dòng)相的情況，分別是流動(dòng)相為甲醇時(shí)，溶劑為甲醇、乙腈;流動(dòng)相為乙腈時(shí)，溶劑為甲醇、乙腈。結(jié)果見圖1～4。對(duì)比圖1、2可知，當(dāng)流動(dòng)相為甲醇、溶劑為甲醇時(shí)涕滅威及其代謝物的峰形對(duì)稱好、基線平穩(wěn)，響應(yīng)值高。對(duì)比圖3、4可知，當(dāng)流動(dòng)相為乙腈時(shí)，涕滅威及其代謝物的峰形對(duì)稱性較差、基線穩(wěn)定性差，響應(yīng)值較流動(dòng)相為甲醇時(shí)低。因此，流動(dòng)相為甲醇時(shí)，涕滅威及其代謝物的峰形對(duì)稱好、基線平穩(wěn)，響應(yīng)值高。故該試驗(yàn)確定用甲醇為流動(dòng)相。

2.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

由圖5可知，涕滅威及其代謝物響應(yīng)值較高且峰形很好，故未調(diào)整質(zhì)譜參數(shù)。

2.3 方法的線性關(guān)系、回收率、精密度及檢出限

2.3.1 方法的線性關(guān)系。

從圖6可以看出，在0.01、0.02、0.04、0.08、0.12、0.16和0.32 μg/mL 7個(gè)濃度梯度下，涕滅威標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=1.413 82E+006X-1 022.43（R2=0.999 364 4），涕滅威砜標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=2.600 02E+007X+31 964.7（R2=0.999 585 6），涕滅威亞砜標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=737 606X+1 629.88（R2=0.999 633 9），可見在質(zhì)量濃度0.01～0.32 μg/mL各組分線性關(guān)系較好。

2.3.2 樣品回收率、精密度和檢出限。

取空白蔬菜、水果樣品，添加農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，加標(biāo)量0.01和0.02 mg/kg，每個(gè)濃度重復(fù)3次，根據(jù)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品回收率計(jì)算公式，進(jìn)而得出平均回收率和RSD，結(jié)果見表3、4。從表3、4可以看出，涕滅威及其代謝物在樣品中回收率均在84.667%～104.333%，RSD均在0～5.37%。

2.4 方法應(yīng)用

2017—2019年從市場(chǎng)采集果蔬樣品283份進(jìn)行了涕滅威及其代謝物的添加回收試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)RSD值均小于10%，回收率均在70%～120%，符合檢測(cè)要求。

3 結(jié)論

該研究建立了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蔬菜、水果中涕滅威及其代謝物的方法。該方法樣品前處理操作簡(jiǎn)便、快速，提高了檢測(cè)工作的效率，保證了定性和定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。結(jié)果經(jīng)多次驗(yàn)證，方法精密度、準(zhǔn)確度高、線性關(guān)系好，定量下限低于或等于國(guó)家農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)，能夠滿足國(guó)家對(duì)蔬菜、水果中涕滅威及其代謝物的檢測(cè)要求。

參考文獻(xiàn)

[1] WANG X，MARTNEZ M A，WU Q H，et al.Fipronil insecticide toxicology：Oxidative stress and metabolism [J].Crit Rev Toxicol，2016，46（10）：876-899.

[2] 胡驍飛，魏鳳仙，李向力，等.氟蟲腈的危害及檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2018，9（6）：1226-1233.

[3] 中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)，中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 水果和蔬菜中500種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定 氣相色譜-質(zhì)譜法：GB/T 23200.8—2016[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2017.

[4] 俞婧，劉茁，馬俊美，等.超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法快速定量檢測(cè)雞蛋中的氟蟲腈及其三種代謝物[J].河北省科學(xué)院學(xué)報(bào)，2019，36（1）：66-73.

[5] 肖國(guó)軍，蔡超海，王生，等.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蔬菜中氟蟲腈及其代謝物殘留[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2019，46（7）：1260-1263.

[6] 寧霄，金紹明，高文超，等.QuEChERS-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物源性食品中氟蟲腈及其代謝物殘留[J].分析化學(xué)，2018，46（8）：1297-1305.

[7] 郭紅勤，詹磊，宋耀英，等.氣相色譜法與氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定卷心菜粉中聯(lián)苯菊酯、溴蟲腈和氟蟲腈[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2018，28（4）：409-411.

[8] 胡貴祥，夏祥，朱惠芳.QuChERS在線凝膠色譜-氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定水果蔬菜中氟蟲腈農(nóng)藥殘留[J].化學(xué)試劑，2017，39（5）：509-512.

[9] 李敏，尹浩，伊淑平，等.超高效液相串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測(cè)蔬菜中涕滅威及其代謝物的方法研究與探討[J].河北農(nóng)業(yè)，2017（7）：30-33.

[10] 劉謙，劉麗麗，周楊，等.固相萃取液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定生姜中涕滅威及其代謝產(chǎn)物[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理，2013，34（12）：43-47.

[11] 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定：NY/T 761—2008[S].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2008.

[12] 中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).水果和蔬菜中450種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法：GB/T 20769—2008[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2009.

[13] 陳紅平，劉新，王川丕，等.超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定茶葉中10種極性農(nóng)藥殘留[J].分析試驗(yàn)室，2011，30（8）：48-53.

[14] 趙肖華，曹趙云，牟仁祥，等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蔬菜、水果中5種阿維菌素類藥物殘留量[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2012，31（10）：1266-1271.

[15] 梅麗蕓，陳蔚林，陳楓，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)檢測(cè)土壤和甘藍(lán)中的甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和虱螨脲[J].安徽化工，2017，43（4）：102-105，107.