• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    瓊脂對(duì)Komagataeibacter xylinus自發(fā)變異的控制

    2021-06-16 13:22:54王志國(guó)鐘春燕張偉敏
    食品工業(yè)科技 2021年4期
    關(guān)鍵詞:結(jié)晶度瓊脂培養(yǎng)液

    王志國(guó),鐘春燕,張偉敏,*

    (1.海南大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,海南???570228; 2.海南椰國(guó)食品有限公司,海南???570311)

    木駒形桿菌Komagataeibacterxylinus(或稱(chēng)Acetobacterxylinum,Gluconacebacterxylinus)[1-2],產(chǎn)生的纖維素稱(chēng)為細(xì)菌纖維素(Bacterial Cellulose,BC),具有純度、結(jié)晶度、持水力、楊氏模量高及生物相容性好等獨(dú)特性能[3-5],廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域[6-9]。我國(guó)海南從1996年開(kāi)始利用椰子水生產(chǎn)細(xì)菌纖維素(椰纖果),目前全省該類(lèi)廠(chǎng)80多家,年產(chǎn)量約18萬(wàn)噸,年產(chǎn)值近3億元。但椰纖果生產(chǎn)中一個(gè)較為突出的技術(shù)問(wèn)題尚未能解決,即K.xylinus種子液制備時(shí)易變異,導(dǎo)致BC產(chǎn)量降低,甚至絕收,此外大量發(fā)酵廢液的排放,既造成一一經(jīng)濟(jì)損失又嚴(yán)重污染環(huán)境。

    Schramm等首次報(bào)道了K.xylinus變異現(xiàn)象。在搖瓶培養(yǎng)時(shí),K.xylinus菌體會(huì)發(fā)生變異,從而形成具有中度缺陷和嚴(yán)重缺陷的突變體,相較野生型菌株,突變體在菌落特征及產(chǎn)BC能力方面都有顯著差異,后來(lái)陸續(xù)有學(xué)者就K. sp.變異現(xiàn)象進(jìn)行了報(bào)道[10-12]。前期研究發(fā)現(xiàn),該菌在靜態(tài)淺層培養(yǎng)中很穩(wěn)定,在深層靜態(tài)培養(yǎng)及攪拌培養(yǎng)中易產(chǎn)生變異菌株[13-14]。此外,瓊脂對(duì)K.xylinus在不同培養(yǎng)方法下BC產(chǎn)量及結(jié)晶度具有較大影響。李少慧及Chao等認(rèn)為,瓊脂使K.xylinus靜態(tài)培養(yǎng)中BC產(chǎn)量降低[15-16];但在搖瓶或攪拌培養(yǎng)中,因?yàn)榄傊档土思羟辛15],增加了游離細(xì)胞數(shù)量[15-16],降低了BC結(jié)晶度,從而提高了產(chǎn)量[17]。

    本實(shí)驗(yàn)在靜態(tài)和動(dòng)態(tài)培養(yǎng)中,研究培養(yǎng)基中添加瓊脂對(duì)K.xylinus自發(fā)變異的影響,采用涂布法對(duì)變異菌的數(shù)量進(jìn)行測(cè)定,稱(chēng)重法對(duì)BC的產(chǎn)量測(cè)定,同時(shí)運(yùn)用粘度法和傅里葉變換紅外光譜法分別對(duì)BC的聚合度和結(jié)晶度進(jìn)行分析,采用分光光度法測(cè)定發(fā)酵液中纖維素酶活力,以期探尋瓊脂對(duì)K.xylinus自發(fā)變異的控制及原因探索。

    1 材料與方法

    1.1 材料與儀器

    木駒形桿菌(Komagataeibacterxylinus) 本室分離保存;SH液體培養(yǎng)基1000 mL:葡萄糖20 g、蛋白胨5 g、酵母膏 5 g、檸檬酸1.15 g、Na2HPO42.7 g,121 ℃,滅菌20 min,其中加入20 g瓊脂成為固體培養(yǎng)基[18];種子液制備:固體培養(yǎng)基上(30 ℃,10 d)挑取5個(gè)菌落加入50 mL液體培養(yǎng)基中,30 ℃,靜態(tài)培養(yǎng)3 d;銅乙二胺溶液 中國(guó)紙漿造紙研究院。

    SW-CJ-1F單人雙面凈化工作臺(tái) 蘇州凈化設(shè)備有限公司;YX280A手提式不銹鋼蒸汽消毒器 上海三申醫(yī)療器械有限公司;SHP-1500生化培養(yǎng)箱 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;SHZ-82氣浴恒溫振蕩器 常州市華普達(dá)教學(xué)儀器有限公司;UV-3200紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì) 上海美譜達(dá)儀器有限公司;1-14高速離心機(jī) 德國(guó)Sigma;T27傅里葉紅外光譜儀 德國(guó)Bruker。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 培養(yǎng)方法 含瓊脂培養(yǎng)液:種子液按5%(v/v)接種量接種至250 mL三角瓶中的150 mL液體SH培養(yǎng)液中(不添加或添加瓊脂0.05%和0.10%,以w/v計(jì)),30 ℃,靜態(tài)培養(yǎng)4 d或者120 r/min搖瓶培養(yǎng)4 d。

    含泡沫塑料顆粒培養(yǎng)液:靜態(tài)培養(yǎng)中,防止攜帶BC的菌體下沉,培養(yǎng)液加入泡沫塑料顆粒(3 mm× 3 mm× 3 mm)。在超凈工作臺(tái)上,泡沫顆粒經(jīng)紫外燈照射30 min后,直接無(wú)菌操作投入至已滅菌的液體SH培養(yǎng)液中,培養(yǎng)基的體積和接種方法同上,30 ℃,靜態(tài)培養(yǎng)4 d。

    轉(zhuǎn)接培養(yǎng):為了考察K.xylinus在添加瓊脂的培養(yǎng)液中,靜態(tài)和動(dòng)態(tài)轉(zhuǎn)接培養(yǎng)中的自發(fā)變異,按5%(v/v)接種量接種至相對(duì)應(yīng)的相同培養(yǎng)基組成和體積的培養(yǎng)液中,并按相對(duì)應(yīng)的相同培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)。

    上述培養(yǎng)中,以靜態(tài)培養(yǎng)(不添加瓊脂)的為對(duì)照組,每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。

    1.2.2 變異菌計(jì)數(shù) 將30 ℃靜態(tài)或搖瓶4 d的發(fā)酵液經(jīng)過(guò)無(wú)菌水10~104梯度稀釋,取0.1 mL稀釋液涂布于固體培養(yǎng)基上,30 ℃,培養(yǎng)7 d,變異菌與正常菌的菌落外觀差異明顯,正常菌的菌落小而凸起,表面干燥,變異菌的菌落大而扁平,表面濕潤(rùn)[13]。

    1.2.3 BC量測(cè)定 從發(fā)酵液中直接收集膜狀BC,而絮狀或顆粒狀BC經(jīng)4000 r/m,20 min離心獲得,再將BC置于80 ℃,0.1 mol/L NaOH溶液中,維持2 h,冷卻后用0.1 mol/L HCl中和,自來(lái)水充分洗滌,在80 ℃下干燥至恒重后稱(chēng)重。

    1.2.4 BC聚合度及結(jié)晶度測(cè)定 銅乙二胺溶液法測(cè)定BC聚合度(Degree of Polymerization,DP):準(zhǔn)確稱(chēng)取經(jīng)除雜冷凍干燥的BC 0.05 g,加入幾小塊銅片,用20 mL銅乙二胺溶液,在氮?dú)獗Wo(hù)下攪拌溶解,使用烏氏粘度計(jì)(內(nèi)徑0.5~0.6 mm)測(cè)定其流出時(shí)間,按下式計(jì)算其聚合度[19]。

    式中:ηsp:增比粘度;t:試樣流出時(shí)間,單位s;t0:銅乙二胺溶液流出時(shí)間,單位s;[η]:特性粘度;c:纖維素濃度,單位g/mL。

    BC結(jié)晶度測(cè)定:將除雜冷凍干燥的BC,剪刀剪碎,稱(chēng)取2 mg,用300 mg KBr(光譜級(jí),阿拉丁)充分研磨后壓片,使用T27型傅里葉變換紅外光譜儀測(cè)定樣品在4000~400 cm-1范圍內(nèi)的吸光度[20],用基線(xiàn)量取法得到1428及897 cm-1的峰高,根據(jù)下列公式計(jì)算其結(jié)晶度[21-22]。

    1.2.5 纖維素酶活力測(cè)定 發(fā)酵液在4000 r/min離心10 min,取上清液20 mL,加入硫酸銨達(dá)到60%(w/w),4 ℃,12 h后,4000 r/min離心10 min,收集沉淀,加入0.1 mol/L,pH5.0的乙酸鈉緩沖溶液3 mL,轉(zhuǎn)移至透析袋中透析至無(wú)銨離子,經(jīng)PEG-20000濃縮后,加入0.1 mol/L,pH5.0乙酸鈉緩沖溶液,使其總體積為1 mL,成為粗酶液,取0.5 mL加入至1 mL乙酸鈉緩沖溶液配制的0.2%(w/v)CMC-Na中,37 ℃水浴,60 min,加入DNS試劑3 mL,沸水浴5 min,冷卻后再加入8 mL蒸餾水,540 nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度。

    表1 瓊脂對(duì)K. xylinus靜態(tài)培養(yǎng)中自發(fā)變異及BC產(chǎn)量的影響Table 1 Effects of agar on spontaneous mutation and BC weights of K. xylinus

    纖維素酶活力單位為μ mol G/20 mL培養(yǎng)液60 min,其含義:20 mL培養(yǎng)液中的纖維素酶在37 ℃條件下,以CMC-Na為底物,水解60 min,生成的葡萄糖量。

    1.3 數(shù)據(jù)處理

    每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。Excel軟件中輸入數(shù)據(jù),進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)偏差計(jì)算、方差分析和Q檢驗(yàn)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 瓊脂對(duì)K. xylinus自發(fā)變異及BC產(chǎn)量的影響

    靜態(tài)培養(yǎng),對(duì)照實(shí)驗(yàn)中,在氣-液界面處,收集到的BC膜不完整(圖1A),而添加0.05%瓊脂或泡沫塑料小顆粒中則形成完整BC膜(圖1B和圖1C),添加0.10%瓊脂中也形成完整的BC膜。

    圖1 添加瓊脂或泡沫塑料顆粒對(duì) K. xylinus靜態(tài)培養(yǎng)中BC膜形成的影響Fig.1 Effects of agar or foamed plastic particles on BC pellicles in static culture 注:A.對(duì)照;B.0.05%瓊脂;C.泡沫塑料顆粒。

    表1所示:K.xylinus靜態(tài)培養(yǎng)時(shí),對(duì)照實(shí)驗(yàn)(未添加瓊脂的靜態(tài)培養(yǎng))中,變異菌數(shù)達(dá)4.63×105,占總菌數(shù)的38.33%,而添加0.05%和0.10%瓊脂的培養(yǎng)液,以及加入泡沫顆粒的培養(yǎng)液中沒(méi)有出現(xiàn)變異菌。

    對(duì)照中,BC產(chǎn)量為0.16 g/L,氣-液界面是菌體生長(zhǎng)繁殖及產(chǎn)BC的活躍層,變異菌在空間及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)方面與野生型競(jìng)爭(zhēng),導(dǎo)致BC產(chǎn)量最低;當(dāng)瓊脂添加量為0.05%時(shí),由于變異菌沒(méi)有出現(xiàn),BC產(chǎn)量增加至0.38 g/L;當(dāng)瓊脂添加量為0.10%時(shí),BC含量反而下降,其原因在于盡管變異沒(méi)有發(fā)生,但瓊脂使發(fā)酵液粘度過(guò)大,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不易滲透至BC膜表面,從而B(niǎo)C產(chǎn)量(0.28 g/L)降低,但仍較對(duì)照中的BC產(chǎn)量高。李少慧及Chao等人靜態(tài)培養(yǎng)時(shí),瓊脂使BC產(chǎn)量降低[15-16],可能是因?yàn)樗麄兊木暝陟o態(tài)培養(yǎng)時(shí)沒(méi)有發(fā)生變異的緣故。

    靜態(tài)培養(yǎng)是制備K.xylinus種子液的主要方式,但由于培養(yǎng)容器裝液量多,液體的深度較大,種子液經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)接后往往發(fā)生自發(fā)變異,導(dǎo)致其接種至生產(chǎn)培養(yǎng)基中時(shí)BC產(chǎn)量大幅下降[13]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),靜態(tài)方式制備種子液時(shí),培養(yǎng)基中添加0.05%的瓊脂,即使連續(xù)轉(zhuǎn)接9次,種子液中也未曾出現(xiàn)變異菌,且培養(yǎng)液中菌體濃度保持在106CFU/mL以上(見(jiàn)圖2)。

    K.xylinus動(dòng)態(tài)培養(yǎng)時(shí),變異菌數(shù)量高達(dá)1.32×107CFU/mL,占總菌數(shù)的88.60%,因而B(niǎo)C產(chǎn)量?jī)H為0.09 g/L;0.05%瓊脂使變異菌的數(shù)量減少,變異菌率下降至66.39%,BC量提高至0.15 g/L;瓊脂量增加至0.10%時(shí),變異菌沒(méi)有出現(xiàn),此時(shí)BC產(chǎn)量達(dá)到最高,為0.34 g/L,與靜態(tài)培養(yǎng)中添加0.05%瓊脂的培養(yǎng)液中產(chǎn)量(0.38 g/L)相當(dāng)。另外,因?yàn)榄傊黾恿伺囵B(yǎng)液粘度,從而削弱剪切力對(duì)菌體產(chǎn)BC的不利影響[15-17]。但盡管培養(yǎng)液中添加0.10%瓊脂阻止了變異菌的出現(xiàn),但如果連續(xù)轉(zhuǎn)接至第2次時(shí),變異菌也會(huì)產(chǎn)生,往往經(jīng)3~4次轉(zhuǎn)接后,培養(yǎng)液中幾乎都是變異菌(見(jiàn)圖2)。

    圖2 K. xylinus轉(zhuǎn)接培養(yǎng)中的正常菌和變異菌的數(shù)量變化Fig.2 Changes in numbers of wild type and mutants during series of transfer passage cultures of K. xylinus

    靜態(tài)和動(dòng)態(tài)培養(yǎng)方式中,添加適量瓊脂阻止K.xylinus的自發(fā)變異,因而增加了BC產(chǎn)量。靜態(tài)培養(yǎng)中,0.05%瓊脂培養(yǎng)液連續(xù)轉(zhuǎn)接9次也沒(méi)有出現(xiàn)變異菌株。動(dòng)態(tài)培養(yǎng)中,0.05%瓊脂培養(yǎng)液轉(zhuǎn)接過(guò)程中變異菌株易出現(xiàn),瓊脂的添加量增加至0.10%時(shí),初次培養(yǎng)和轉(zhuǎn)接第一次時(shí),變異菌不會(huì)出現(xiàn),但繼續(xù)增加轉(zhuǎn)接次數(shù),變異仍會(huì)發(fā)生。繼續(xù)提高瓊脂的量,培養(yǎng)液粘度過(guò)大而無(wú)法進(jìn)行動(dòng)態(tài)培養(yǎng)。

    2.2 瓊脂對(duì)BC的DP及結(jié)晶度的影響

    圖3顯示:靜態(tài)培養(yǎng)中,BC的聚合度(DP)為5.03×103,瓊脂添加量為0.05%和0.10%的培養(yǎng)基中則分別為4.83×103和4.96×103,由此可見(jiàn),靜態(tài)培養(yǎng)中,瓊脂對(duì)BC的DP影響不大(減小幅度皆小于4%);動(dòng)態(tài)培養(yǎng)中,BC的DP為3.92×103,0.05%及0.10%瓊脂中BC的DP分別為3.61×103和2.95×103。由此可見(jiàn),培養(yǎng)方式會(huì)影響B(tài)C的DP,搖瓶生產(chǎn)的BC的DP比靜態(tài)生產(chǎn)的低,降低22.2%,培養(yǎng)基中添加瓊脂,會(huì)加劇DP的下降,當(dāng)瓊脂量為0.05%時(shí),比靜態(tài)的DP下降26.7%,瓊脂量為0.10%時(shí),下降幅度達(dá)42.2%。

    圖3 瓊脂對(duì)BC的DP影響Fig.3 Effects of agar on DP of BC

    靜態(tài)和動(dòng)態(tài)培養(yǎng)中的BC在800~1500 cm-1范圍的的FT-IR圖譜見(jiàn)圖4和圖5,用基線(xiàn)量取峰高法測(cè)定BC的O’KI結(jié)晶指數(shù),結(jié)果如表2所示:對(duì)照(未添加瓊脂的靜態(tài)培養(yǎng))中的BC的結(jié)晶指數(shù)為3.14,這比文獻(xiàn)[21,23]報(bào)道的4.84要低,可能是菌株差異的緣故。

    圖4 K. xylinus靜態(tài)培養(yǎng)中產(chǎn)生BC的FTIR譜圖Fig.4 FTIR spectrum of BC produced by K. xylinus in static culture

    圖5 K. xylinus搖瓶培養(yǎng)中產(chǎn)生BC的FTIR譜圖Fig.5 FT-IR spectrum of BC produced by K. xylinus in shaken culture

    表2 瓊脂對(duì)K. xylinus產(chǎn)BC的結(jié)晶度影響Table 2 Effects of agar on O’KI index of BC produced by K. xylinus

    表2可以看出:以未添加瓊脂的靜態(tài)產(chǎn)生BC的結(jié)晶指數(shù)為基準(zhǔn),靜態(tài)培養(yǎng)中,添加0.05%瓊脂,結(jié)晶指數(shù)降低至2.73,下降13.1%,當(dāng)瓊脂量增至0.10%時(shí),結(jié)晶指數(shù)為2.85,下降9.2%,其原因可能是高濃度的瓊脂,因粘度過(guò)大,不易滲透至氣-液界面的BC中,因而對(duì)纖維素的結(jié)晶過(guò)程干擾有限,從而與0.05%的瓊脂中的BC的結(jié)晶度相較而言,下降幅度略低(前者下降幅度13.1%,后者9.2%)。

    動(dòng)態(tài)培養(yǎng)中,未添加瓊脂中的結(jié)晶指數(shù)為2.54,下降19.1%,表明搖瓶培養(yǎng)降低了BC的結(jié)晶度。培養(yǎng)液中添加0.05%瓊脂,結(jié)晶指數(shù)下降至2.23,下降28.9%,當(dāng)瓊脂增加為0.10%時(shí),結(jié)晶指數(shù)為1.53,下降幅度達(dá)到最高51.3%??梢?jiàn),搖瓶培養(yǎng)時(shí),添加瓊脂大大降低了BC的結(jié)晶指數(shù),其原因可能是搖瓶培養(yǎng)時(shí),瓊脂能更好地吸附于BC上從而嚴(yán)重干擾BC的結(jié)晶。

    瓊脂對(duì)BC的結(jié)構(gòu)影響與培養(yǎng)方式有關(guān):從對(duì)DP影響的角度看:瓊脂在靜態(tài)培養(yǎng)中的影響較小(<4%),但在動(dòng)態(tài)培養(yǎng)中卻加劇DP下降;從對(duì)結(jié)晶度影響的角度看:瓊脂在兩種培養(yǎng)方式中都導(dǎo)致BC結(jié)晶度極顯著下降(P<0.01),只是相較靜態(tài)培養(yǎng),動(dòng)態(tài)培養(yǎng)中下降的幅度更大。

    2.3 瓊脂對(duì)培養(yǎng)液中K. xylinus的纖維素酶活力影響

    靜態(tài)及搖瓶培養(yǎng)中皆檢測(cè)到纖維素酶活力(見(jiàn)圖6),這與Kenji等[24]的結(jié)論一致,兩種培養(yǎng)方式中,纖維素酶活力沒(méi)有差異,而瓊脂的添加對(duì)纖維素酶活力也沒(méi)有影響。

    圖6 K. xylinus培養(yǎng)液中纖維素酶活力Fig.6 Activities of cellulase in K. xylinus culture

    3 結(jié)論與討論

    K.xylinus靜態(tài)和動(dòng)態(tài)培養(yǎng)中,培養(yǎng)液中添加瓊脂阻止其發(fā)生自發(fā)變異,從而提高了BC產(chǎn)量,由于瓊脂靜態(tài)培養(yǎng)液連續(xù)轉(zhuǎn)接過(guò)程很穩(wěn)定,適合于制備種子液。結(jié)構(gòu)方面來(lái)說(shuō),瓊脂對(duì)靜態(tài)培養(yǎng)產(chǎn)生的BC的DP影響較小,但極顯著(P<0.01)下降BC的結(jié)晶度;對(duì)動(dòng)態(tài)培養(yǎng)中的BC的DP和結(jié)晶度都極顯著(P<0.01)下降。

    Coucheron[25]發(fā)現(xiàn)G.xylinusATCC 23769(或K.xylinusATCC 23769)中具有插入序列IS1031,該序列的存在導(dǎo)致K.xylinus易變異,當(dāng)培養(yǎng)條件改變時(shí),產(chǎn)BC的正常菌(Cellulose+,Cel+)或不產(chǎn)BC的變異菌(Cellulose-,Cel-)具有生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì):a.靜態(tài)培養(yǎng)時(shí),BC膜使Cel+漂浮在氧氣充足的氣-液界面,而Cel-則處于液體中,因缺氧而漸亡[26]。本實(shí)驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn),靜態(tài)培養(yǎng)中,氣-液界面有完整BC膜(0.05%和0.10%瓊脂及泡沫顆粒培養(yǎng)液)的培養(yǎng)液中沒(méi)有出現(xiàn)變異菌,而無(wú)完整BC膜(對(duì)照)的培養(yǎng)液中分離到變異菌株,但對(duì)于為何對(duì)照實(shí)驗(yàn)中會(huì)產(chǎn)生不完整的BC膜尚無(wú)定論;b.動(dòng)態(tài)培養(yǎng)時(shí),充足的氧氣使Cel+過(guò)度生長(zhǎng),Cel-產(chǎn)生的概率增加,同時(shí)Cel+被所形成的BC包裹,而Cel-呈游離狀態(tài),轉(zhuǎn)接時(shí)吸取的液體中,Cel-占有數(shù)量?jī)?yōu)勢(shì),所以多次轉(zhuǎn)接后只剩下Cel-[27]。本實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn),動(dòng)態(tài)培養(yǎng)中易出現(xiàn)變異菌株,培養(yǎng)液中變異菌的百分含量隨轉(zhuǎn)接次數(shù)的增加而增加直至全部為變異菌,但0.10%瓊脂加入至培養(yǎng)液中時(shí),盡管瓊脂干擾了BC球的形成,使BC呈粉狀,按上述觀點(diǎn),轉(zhuǎn)接過(guò)程中Cel+和Cel-應(yīng)共存,但實(shí)驗(yàn)結(jié)果卻顯示轉(zhuǎn)接至第四次時(shí),培養(yǎng)液中只有Cel-;Jung等通過(guò)透射電鏡證明,Cel-比Cel+有更完整的雙層膜結(jié)構(gòu),動(dòng)態(tài)培養(yǎng)時(shí),Cel-能承受剪切力而得以富集[28]。本實(shí)驗(yàn)中培養(yǎng)液添加0.10%瓊脂在初次培養(yǎng)時(shí)只有Cel+,轉(zhuǎn)接一次時(shí),也只有Cel+,且總量與初次培養(yǎng)時(shí)相近,說(shuō)明0.10%瓊脂足以消除剪切力對(duì)Cel+破壞,但隨后的轉(zhuǎn)接過(guò)程中Cel+卻逐漸消失。

    瓊脂對(duì)K.xylinus自發(fā)變異的控制的可能原因在于瓊脂消除了BC對(duì)細(xì)胞的脅迫:靜態(tài)培養(yǎng)時(shí),一方面,氣-液界面層是菌體生長(zhǎng)繁殖最活躍層,菌體分泌出BC后,BC仍附著在細(xì)胞膜上[1],而B(niǎo)C的密度(3.2 g/L)促使攜帶BC的細(xì)胞沉降,另一方面,K.xylinus是嚴(yán)格好氧菌[6],有向氣-液界面上浮的趨勢(shì),于是攜帶BC的菌體處于反復(fù)的沉-浮運(yùn)動(dòng)狀態(tài),BC就成為細(xì)胞的負(fù)擔(dān)或脅迫,該脅迫促使相關(guān)的維素合成酶的基因序列或表達(dá)向著不產(chǎn)BC方向變異。靜態(tài)培養(yǎng)中,培養(yǎng)液在培養(yǎng)容器中的高度是導(dǎo)致變異發(fā)生的關(guān)鍵因素:淺層培養(yǎng)時(shí),BC的產(chǎn)生及膜的形成縮小甚至消除了細(xì)胞沉-浮運(yùn)動(dòng)的空間,因而消除了BC脅迫;深層培養(yǎng)時(shí),細(xì)胞沉-浮運(yùn)動(dòng)有足夠的空間,長(zhǎng)時(shí)間的BC脅迫導(dǎo)致變異發(fā)生,Cel-一旦產(chǎn)生,便占據(jù)氣-液界面,與正常菌在營(yíng)養(yǎng)和空間上競(jìng)爭(zhēng),致BC膜不能完整形成。吳謙等[13]的實(shí)驗(yàn)也表面靜態(tài)培養(yǎng)中的變異與培養(yǎng)液在培養(yǎng)容器中的高度緊密相關(guān)。瓊脂增加液體的粘度而抑制細(xì)胞的沉-浮行為,泡沫顆粒使菌體被固定在氣-液界面而消除細(xì)胞的沉-浮行為,因此靜態(tài)培養(yǎng)中,培養(yǎng)液中添加瓊脂或者泡沫顆粒就能控制K.xylinus自發(fā)變異;動(dòng)態(tài)培養(yǎng)時(shí),一方面,0.10%瓊脂使BC的結(jié)晶度極顯著(P<0.01)下降,同時(shí),纖維素酶更易和BC接觸,這兩個(gè)因素使BC極易被纖維素酶水解,從而使BC的聚合度極顯著下降。低聚合度意味著低BC脅迫,從而抑制K.xylinus在動(dòng)態(tài)培養(yǎng)中的變異,但轉(zhuǎn)接培養(yǎng)導(dǎo)致低BC脅迫長(zhǎng)時(shí)間存在,故變異發(fā)生。

    猜你喜歡
    結(jié)晶度瓊脂培養(yǎng)液
    從一道試題再說(shuō)血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的使用
    馬傳染性貧血瓊擴(kuò)試驗(yàn)中瓊脂配比濃度及溫度因素對(duì)瓊脂板制作的影響
    調(diào)整蔗糖、硼酸和pH值可優(yōu)化甜櫻桃花粉萌發(fā)培養(yǎng)液
    不同培養(yǎng)液對(duì)大草履蟲(chóng)生長(zhǎng)與形態(tài)的影響研究
    結(jié)晶度對(duì)高密度聚乙烯光氧老化的影響
    歐盟食品安全局重新評(píng)估瓊脂作為食品添加劑的安全性
    γ射線(xiàn)輻照對(duì)超高分子量聚乙烯片材機(jī)械性能和結(jié)晶度的影響
    核技術(shù)(2016年4期)2016-08-22 09:05:24
    建構(gòu)數(shù)學(xué)模型領(lǐng)悟細(xì)胞大小與物質(zhì)運(yùn)輸?shù)年P(guān)系
    熱處理對(duì)高密度聚乙烯結(jié)晶度及力學(xué)性能的影響
    塑料制造(2016年5期)2016-06-15 20:27:39
    超級(jí)培養(yǎng)液
    国产又黄又爽又无遮挡在线| 色播亚洲综合网| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 少妇的逼好多水| 亚洲av成人精品一二三区| 免费看a级黄色片| ponron亚洲| 国语自产精品视频在线第100页| 国产精品国产高清国产av| 午夜免费男女啪啪视频观看| 久热久热在线精品观看| 国产视频内射| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产精品女同一区二区软件| 嫩草影院精品99| 国产一区二区在线av高清观看| 亚洲自偷自拍三级| 国产精品人妻久久久影院| 黑人高潮一二区| 亚洲av.av天堂| 精品一区二区免费观看| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产真实伦视频高清在线观看| 久久欧美精品欧美久久欧美| 精品人妻偷拍中文字幕| 人妻夜夜爽99麻豆av| 全区人妻精品视频| 看十八女毛片水多多多| 免费av观看视频| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 人人妻人人看人人澡| 久久久精品大字幕| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 午夜激情欧美在线| 亚洲成人久久爱视频| 精品一区二区三区视频在线| 男人的好看免费观看在线视频| 丰满少妇做爰视频| 久久午夜福利片| 久久午夜福利片| 亚洲国产最新在线播放| videossex国产| 美女cb高潮喷水在线观看| 性插视频无遮挡在线免费观看| 日本免费a在线| 免费大片18禁| 亚洲av一区综合| 久久久精品欧美日韩精品| 91久久精品国产一区二区三区| 成年女人永久免费观看视频| 亚洲精品色激情综合| 国产精品久久久久久精品电影| 免费av毛片视频| 99热网站在线观看| 亚洲欧洲国产日韩| 91av网一区二区| 永久免费av网站大全| 亚洲在线自拍视频| 国产在视频线在精品| 久久久精品大字幕| 国产精品国产三级国产专区5o | 亚洲欧美日韩高清专用| 天美传媒精品一区二区| 丰满乱子伦码专区| 亚洲av免费在线观看| 久久久久久伊人网av| 在线观看一区二区三区| 亚洲精品成人久久久久久| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 成人毛片60女人毛片免费| 我的老师免费观看完整版| 人体艺术视频欧美日本| h日本视频在线播放| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产色婷婷99| 亚洲图色成人| 亚洲av电影不卡..在线观看| 男人狂女人下面高潮的视频| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产人妻一区二区三区在| 一区二区三区乱码不卡18| 丝袜美腿在线中文| 久久精品久久精品一区二区三区| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 中文字幕熟女人妻在线| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 日韩av在线免费看完整版不卡| 久久久久久久久久成人| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 国产又色又爽无遮挡免| 国产伦精品一区二区三区四那| 成人综合一区亚洲| 免费观看精品视频网站| 国产免费又黄又爽又色| 国产色爽女视频免费观看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 欧美成人午夜免费资源| 国产一级毛片在线| 晚上一个人看的免费电影| 麻豆av噜噜一区二区三区| 春色校园在线视频观看| 丰满少妇做爰视频| 只有这里有精品99| 日本黄大片高清| av.在线天堂| 亚洲中文字幕日韩| 日本免费在线观看一区| 在线观看66精品国产| 亚洲成人av在线免费| 国产精品一区二区在线观看99 | 最近手机中文字幕大全| 亚洲成人久久爱视频| 麻豆av噜噜一区二区三区| 日韩 亚洲 欧美在线| 一级黄片播放器| 免费在线观看成人毛片| 国产亚洲一区二区精品| 久热久热在线精品观看| 亚洲精品456在线播放app| 国产单亲对白刺激| 久久人人爽人人片av| 色视频www国产| 18禁动态无遮挡网站| 高清在线视频一区二区三区 | 一级黄色大片毛片| 日韩欧美 国产精品| 村上凉子中文字幕在线| 国内揄拍国产精品人妻在线| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 久久韩国三级中文字幕| 一个人观看的视频www高清免费观看| 亚洲五月天丁香| 久久久国产成人免费| 国产69精品久久久久777片| 中文字幕免费在线视频6| 国产综合懂色| 99久久成人亚洲精品观看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 中文字幕久久专区| 亚洲,欧美,日韩| 亚洲中文字幕日韩| 午夜福利在线在线| 精品一区二区免费观看| 97在线视频观看| 国产精品久久视频播放| 99热这里只有精品一区| 丝袜喷水一区| 97超碰精品成人国产| 亚洲成人av在线免费| 欧美又色又爽又黄视频| 亚洲综合色惰| 久久久精品94久久精品| 亚洲av一区综合| 毛片女人毛片| 少妇人妻精品综合一区二区| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产色爽女视频免费观看| 免费av观看视频| 一级黄色大片毛片| 国产乱人视频| 色噜噜av男人的天堂激情| 亚洲av成人av| 九九热线精品视视频播放| 欧美zozozo另类| 最后的刺客免费高清国语| 99久久人妻综合| 久久久精品大字幕| 国内精品一区二区在线观看| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 黄片无遮挡物在线观看| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产亚洲最大av| 日韩高清综合在线| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲人成网站在线播| 日韩视频在线欧美| 国产精品国产高清国产av| 国产爱豆传媒在线观看| 成人国产麻豆网| 久久综合国产亚洲精品| 久久精品夜色国产| 日本三级黄在线观看| 天堂网av新在线| 国内精品一区二区在线观看| av在线蜜桃| 婷婷六月久久综合丁香| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 午夜精品在线福利| 99热这里只有精品一区| 成年版毛片免费区| 男的添女的下面高潮视频| 亚洲av成人精品一二三区| 男女国产视频网站| 午夜免费激情av| 亚洲精品456在线播放app| 青春草视频在线免费观看| 一个人看视频在线观看www免费| 国产乱人视频| 99热网站在线观看| 一级毛片久久久久久久久女| 亚洲国产精品成人综合色| 成年免费大片在线观看| 真实男女啪啪啪动态图| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 天堂中文最新版在线下载 | 久久99热这里只频精品6学生 | 色尼玛亚洲综合影院| 久久亚洲国产成人精品v| 全区人妻精品视频| 黄片wwwwww| 国产亚洲最大av| 2021少妇久久久久久久久久久| a级毛色黄片| 欧美97在线视频| 成人综合一区亚洲| kizo精华| 国产高潮美女av| 日韩欧美三级三区| av卡一久久| 国产单亲对白刺激| 国产激情偷乱视频一区二区| 日本黄色视频三级网站网址| 精品久久久久久久久亚洲| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 能在线免费看毛片的网站| 18禁动态无遮挡网站| 久久久欧美国产精品| 日本免费在线观看一区| 最近最新中文字幕免费大全7| 国产黄色小视频在线观看| 最近的中文字幕免费完整| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 1000部很黄的大片| 七月丁香在线播放| 色播亚洲综合网| 干丝袜人妻中文字幕| 99热精品在线国产| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲真实伦在线观看| 国产黄a三级三级三级人| 午夜免费激情av| 精品人妻一区二区三区麻豆| 99久久九九国产精品国产免费| 免费看a级黄色片| 国产一区二区在线av高清观看| 男插女下体视频免费在线播放| 成人亚洲精品av一区二区| 欧美+日韩+精品| 久久久午夜欧美精品| 麻豆国产97在线/欧美| 色视频www国产| 国产精品电影一区二区三区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 久久久成人免费电影| 日韩av在线大香蕉| 18禁动态无遮挡网站| 一个人看视频在线观看www免费| 只有这里有精品99| 精品久久国产蜜桃| 一边亲一边摸免费视频| 午夜福利在线观看吧| 内地一区二区视频在线| 国内精品一区二区在线观看| 国产一区二区三区av在线| 国产黄色小视频在线观看| 国产精品一二三区在线看| 免费一级毛片在线播放高清视频| 精品一区二区三区人妻视频| 七月丁香在线播放| 亚洲高清免费不卡视频| 国产av一区在线观看免费| av在线蜜桃| 亚洲欧洲日产国产| 精品欧美国产一区二区三| 级片在线观看| 岛国毛片在线播放| 亚洲精品成人久久久久久| 亚洲av一区综合| 干丝袜人妻中文字幕| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲人成网站在线观看播放| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 午夜精品在线福利| 1024手机看黄色片| 美女被艹到高潮喷水动态| 一区二区三区高清视频在线| 亚洲av免费在线观看| 禁无遮挡网站| 国产在视频线在精品| 白带黄色成豆腐渣| 免费播放大片免费观看视频在线观看 | 亚洲18禁久久av| 欧美成人一区二区免费高清观看| 欧美成人免费av一区二区三区| 在线播放无遮挡| 波多野结衣高清无吗| 久久久精品94久久精品| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 免费一级毛片在线播放高清视频| 麻豆久久精品国产亚洲av| 久久精品影院6| 在现免费观看毛片| 国产一区有黄有色的免费视频 | 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 伦理电影大哥的女人| 日韩精品有码人妻一区| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 国产视频内射| 天天一区二区日本电影三级| 日韩精品青青久久久久久| 一边亲一边摸免费视频| 久久精品国产亚洲网站| 91精品一卡2卡3卡4卡| av在线蜜桃| 色吧在线观看| 亚洲最大成人手机在线| 天堂影院成人在线观看| 亚洲成人av在线免费| 亚洲综合色惰| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 精品久久久久久久久久久久久| 91久久精品电影网| 国产精品av视频在线免费观看| 嫩草影院新地址| 成人鲁丝片一二三区免费| 99久久精品一区二区三区| 亚洲精品aⅴ在线观看| 久久精品影院6| 久久国内精品自在自线图片| 国产综合懂色| 国产一级毛片七仙女欲春2| 国产精品av视频在线免费观看| 最近中文字幕高清免费大全6| 免费黄色在线免费观看| 91精品一卡2卡3卡4卡| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 九九热线精品视视频播放| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 看黄色毛片网站| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 最近最新中文字幕免费大全7| 午夜福利视频1000在线观看| 别揉我奶头 嗯啊视频| 成人亚洲欧美一区二区av| 久久亚洲精品不卡| 一夜夜www| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 秋霞伦理黄片| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 男女视频在线观看网站免费| 午夜精品国产一区二区电影 | 村上凉子中文字幕在线| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产一级毛片在线| 三级经典国产精品| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产精品蜜桃在线观看| 亚洲成人av在线免费| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产精品久久电影中文字幕| 日本一本二区三区精品| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 国产成人免费观看mmmm| 国产av不卡久久| 两个人视频免费观看高清| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲国产精品成人久久小说| 99久国产av精品| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 日韩成人伦理影院| 最近中文字幕2019免费版| 国产高潮美女av| 午夜日本视频在线| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 男女边吃奶边做爰视频| 一区二区三区免费毛片| 免费黄色在线免费观看| 联通29元200g的流量卡| 久久99精品国语久久久| 日日干狠狠操夜夜爽| 精品久久久久久久久久久久久| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 色视频www国产| 女人久久www免费人成看片 | 午夜福利成人在线免费观看| 老司机影院毛片| 亚洲av成人av| 午夜激情福利司机影院| 欧美最新免费一区二区三区| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 国产麻豆成人av免费视频| 内射极品少妇av片p| 日韩制服骚丝袜av| 国产真实乱freesex| 特级一级黄色大片| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 老司机影院毛片| 国产高清视频在线观看网站| 欧美xxxx性猛交bbbb| 精品酒店卫生间| 国产精品一区二区三区四区久久| 久久精品久久久久久久性| 国产精品国产高清国产av| 亚洲av男天堂| 简卡轻食公司| 一个人看视频在线观看www免费| 国产精品av视频在线免费观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产伦精品一区二区三区四那| 成人三级黄色视频| 亚洲精品影视一区二区三区av| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产极品天堂在线| 一区二区三区四区激情视频| 天堂影院成人在线观看| 永久免费av网站大全| 色播亚洲综合网| 国产色婷婷99| 美女大奶头视频| 精品一区二区三区视频在线| 国产免费男女视频| 亚洲国产精品专区欧美| 精品一区二区三区视频在线| 麻豆成人av视频| 亚洲av免费在线观看| 麻豆av噜噜一区二区三区| 99视频精品全部免费 在线| or卡值多少钱| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 久久热精品热| 日日摸夜夜添夜夜爱| 精品国内亚洲2022精品成人| 少妇人妻一区二区三区视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 秋霞伦理黄片| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产老妇伦熟女老妇高清| 天天一区二区日本电影三级| 国产亚洲91精品色在线| 中文字幕制服av| 欧美一区二区精品小视频在线| 狠狠狠狠99中文字幕| 中文字幕久久专区| 亚洲精品日韩av片在线观看| 亚洲欧美清纯卡通| 国产伦理片在线播放av一区| 久久久久久久久大av| 国产精华一区二区三区| 看免费成人av毛片| 18禁在线播放成人免费| av黄色大香蕉| 2021天堂中文幕一二区在线观| 99久久精品一区二区三区| 国产一级毛片七仙女欲春2| 日本爱情动作片www.在线观看| av线在线观看网站| 国产亚洲5aaaaa淫片| 午夜免费激情av| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 久久99热这里只有精品18| 能在线免费观看的黄片| 看免费成人av毛片| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 亚洲精品456在线播放app| 天堂中文最新版在线下载 | 国产精品国产三级国产专区5o | 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 18+在线观看网站| 亚洲精品色激情综合| 亚洲av电影不卡..在线观看| 神马国产精品三级电影在线观看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 亚洲性久久影院| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 老司机福利观看| 成人毛片60女人毛片免费| 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产午夜精品一二区理论片| 色综合亚洲欧美另类图片| 色视频www国产| 男的添女的下面高潮视频| 一本久久精品| 国产精品国产高清国产av| 舔av片在线| 青春草视频在线免费观看| 日韩制服骚丝袜av| 国产69精品久久久久777片| 国内精品美女久久久久久| 久久韩国三级中文字幕| 欧美+日韩+精品| 日韩强制内射视频| 丝袜喷水一区| 亚洲伊人久久精品综合 | 国产又黄又爽又无遮挡在线| 91aial.com中文字幕在线观看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 国产精品野战在线观看| 色吧在线观看| 婷婷色av中文字幕| 欧美一区二区精品小视频在线| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 国产在线一区二区三区精 | 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 男女下面进入的视频免费午夜| 精品人妻熟女av久视频| 高清午夜精品一区二区三区| 国产精品久久久久久av不卡| 久久鲁丝午夜福利片| 综合色丁香网| 亚洲在线自拍视频| 国产精品久久久久久精品电影| 亚洲精品456在线播放app| 久久久亚洲精品成人影院| 日韩亚洲欧美综合| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲五月天丁香| 亚洲色图av天堂| 国产黄片视频在线免费观看| 中文资源天堂在线| or卡值多少钱| 久久久久久久久中文| 国产精品日韩av在线免费观看| 亚洲三级黄色毛片| 亚洲av成人av| 成人美女网站在线观看视频| 亚洲av男天堂| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产成人91sexporn| 精品久久久久久久久久久久久| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 欧美成人精品欧美一级黄| 日本色播在线视频| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲乱码一区二区免费版| 日韩一区二区三区影片| 波多野结衣高清无吗| 麻豆乱淫一区二区| 久久久午夜欧美精品| 三级国产精品片| 国产av在哪里看| 久久久久性生活片| 亚洲真实伦在线观看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 村上凉子中文字幕在线| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 变态另类丝袜制服| 一级爰片在线观看| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 亚洲人成网站高清观看| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 黄色欧美视频在线观看| 99在线人妻在线中文字幕| 久久这里有精品视频免费| 成年女人永久免费观看视频| 国产伦精品一区二区三区四那| 色综合站精品国产| 国产精品不卡视频一区二区| 偷拍熟女少妇极品色| 国内精品一区二区在线观看| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 看十八女毛片水多多多| 日韩欧美精品免费久久| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 赤兔流量卡办理| a级毛片免费高清观看在线播放| 亚洲av中文字字幕乱码综合| or卡值多少钱| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 免费观看人在逋| 欧美+日韩+精品| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲成色77777| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产精品久久久久久久电影| 99久国产av精品国产电影| 日韩欧美 国产精品| 99热6这里只有精品| 日韩欧美精品v在线| 如何舔出高潮| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 热99在线观看视频| 亚洲在线观看片| 久久久久久国产a免费观看| 成人午夜精彩视频在线观看| 青春草亚洲视频在线观看| 伦精品一区二区三区| 国产黄片视频在线免费观看| 亚洲色图av天堂| 亚洲欧美清纯卡通| 永久免费av网站大全| 韩国av在线不卡| 哪个播放器可以免费观看大片| 中文字幕制服av| 免费av毛片视频| 欧美97在线视频| 久久久久久大精品| 国产免费男女视频| 99久久无色码亚洲精品果冻| 成人亚洲欧美一区二区av| 久久久色成人| 国产极品天堂在线| 特大巨黑吊av在线直播|