基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探究健心膠囊治療心律失常的作用

浦 強(qiáng)唐海軍徐蕾蕾王婧偉王麗曉沈安明

（如皋市中醫(yī)院，江蘇 如皋226500）

心律失常是心臟科高發(fā)病和常見病，可單獨(dú)發(fā)病，亦可與其他心血管疾病伴發(fā)，是臨床上常見而極具危險(xiǎn)性的心血管疾?。?］。心律失常常因冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病、高血壓心肌病、心肌炎、風(fēng)濕性心臟病、甲狀腺功能亢進(jìn)等器質(zhì)性心臟病引起，主要發(fā)病機(jī)制為心臟活動(dòng)的起源和傳導(dǎo)障礙導(dǎo)致心臟搏動(dòng)的頻率或節(jié)律異常，臨床表現(xiàn)有心悸、心慌、胸悶、疲乏氣短，常伴有頭暈、出汗、呼吸困難等癥狀，嚴(yán)重者可出現(xiàn)暈厥，甚至猝死［2?3］。臨床治療有藥物治療、射頻消融、植入性心律轉(zhuǎn)復(fù)除顫器、心臟再同步化及心臟復(fù)律除顫器等，主要仍以抗心律失常藥物治療為主，但抗心律失常藥物治療效果不顯著，副作用大，有致心律失常作用，容易造成二次傷害，且存在改善癥狀不理想、耐藥及減藥后反復(fù)發(fā)作等問題。因此，越來越多的人尋求中醫(yī)中藥的治療，對(duì)緩解癥狀、提高生活質(zhì)量、降低毒副作用，減少疾病反復(fù)發(fā)作具有重要作用。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為心律失常按臨床表現(xiàn)屬于“心悸、怔忡”等范疇?！端貑枴ぶ琳嬉笳摗芳啊鹅`樞·本神》就有“心澹澹大動(dòng)”“心怵惕”惕惕然而驚，心欲動(dòng)”的記載。這些記載與心律失常的表現(xiàn)基本吻合。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為該病發(fā)病虛實(shí)夾雜，虛者氣血陰陽虧虛，心失濡養(yǎng)；實(shí)者痰飲、瘀血、濕熱、火邪上擾，心神不寧，正虛邪戀，互累發(fā)病。病機(jī)關(guān)鍵為陰陽失調(diào)，氣血失和，心神失養(yǎng)。治療以益氣和血，寧心安神，調(diào)理陰陽為主［4?5］。

健心膠囊（黃芪、苦參）由江蘇省如皋市中醫(yī)院基于中醫(yī)經(jīng)典理論、采用傳統(tǒng)工藝研發(fā)的院內(nèi)制劑（蘇藥制字Z04001612），方中黃芪味甘，微溫，補(bǔ)虛，補(bǔ)氣要藥；苦參味苦，寒，主心腹結(jié)氣，補(bǔ)中，能安五臟，定志，黃芪、苦參相配，祛邪扶正，具有益氣寧心作用，用于治療良性心律失常（室性早搏、房性早搏等）、病毒性心肌炎、心臟神經(jīng)官能癥等，臨床療效滿意［6?7］。前期實(shí)驗(yàn)研究也表明，健心膠囊能改善氯仿誘發(fā)的小鼠室顫，氯化鋇和腎上腺素致大鼠的心律失常作用，其作用機(jī)理可能是多通道阻滯和β 受體阻斷的多重作用，亦可能與影響植物神經(jīng)及其遞質(zhì)，或者改變膜對(duì)Na＋、Ca2＋、K＋等離子的轉(zhuǎn)運(yùn)，從而影響膜的電生理特性有關(guān)［8］。但由于中藥化學(xué)成分復(fù)雜多樣，作用機(jī)制具有多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)等特點(diǎn)。健心膠囊治療心律失常具體作用機(jī)制尚未完全明確。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究方法采用分析藥物、基因、蛋白、疾病等數(shù)據(jù)庫與實(shí)驗(yàn)室所得數(shù)據(jù)，融合多學(xué)科的技術(shù)和內(nèi)容，從系統(tǒng)、整體的水平構(gòu)建多層次網(wǎng)絡(luò)，去分析藥物作用機(jī)制［9］。利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)來預(yù)測(cè)多成分、多途徑、多靶點(diǎn)、協(xié)同作用的中藥復(fù)方及配伍作用機(jī)制具有顯著的優(yōu)勢(shì)。本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究方法研究健心膠囊治療心律失常藥效物質(zhì)及作用靶點(diǎn)，以期為進(jìn)一步研究健心膠囊提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 健心膠囊主要候選化合物收集和篩選 根據(jù)健心膠囊中2 味中藥黃芪（Astragali Radix）、苦參（Sophorae Flaves?centis Radix）在2015 年版《中國藥典》 中的規(guī)范名稱，使用中藥系統(tǒng)藥理學(xué) 數(shù)據(jù)庫 和分析平臺(tái)［10］（TCMSP）（http：／ ／lsp.nwu.edu.cn／tcmsp.php）收集健心膠囊的所有生物活性化合物。以口服生物利用度（oral bioavail?ability，OB）≥30%、類藥性（Drug?likeness，DL）≥0.18為限制條件進(jìn)行篩選［11］，得到健心膠囊的主要候選活性化合物。并結(jié)合中國知網(wǎng)、Pubmed 數(shù)據(jù)庫等文獻(xiàn)對(duì)于未能入選的化學(xué)成分，但報(bào)道其有生物活性和藥理作用的也納入候選活性化學(xué)成分，建立藥物?化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)集。

1.2 健心膠囊主要候選化合物潛在作用靶點(diǎn)收集 采用TCMSP 數(shù)據(jù)庫檢索健心膠囊主要候選化學(xué)成分相關(guān)的潛在作用靶點(diǎn)，進(jìn)而使 用UniProKB（https：／ ／www.uniprot.org／），剔除非人源靶點(diǎn)，將查詢得到的所有蛋白名稱校正為官方名稱（Official symbol）?；衔锿ㄟ^檢索Puchem 數(shù)據(jù)庫［12］（https：／ ／pubchem.ncbi.nlm.nih.gov／）查詢結(jié)構(gòu)，生物活性等詳細(xì)信息。采用網(wǎng)絡(luò)圖像化軟件Cytoscape 3.7.2 軟件構(gòu)建“中藥?化合物?作用靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖，以探究健心膠囊的藥理學(xué)作用機(jī)制。

1.3 心律失常相關(guān)疾病靶點(diǎn)收集 采用PharmGkb 數(shù)據(jù)庫［13］、NCBI Gene 數(shù)據(jù)庫［14］、OMIM 數(shù)據(jù)庫［15］、TTD 數(shù)據(jù)庫［16］、Drugbank 數(shù)據(jù)庫［17］、DisGeNET 數(shù)據(jù)庫［18］。在數(shù)據(jù)庫中通過檢索關(guān)鍵詞“cardiac arrhythmia；arrhythmia”收集與心律失常相關(guān)靶點(diǎn)基因，整理后建立心律失常相關(guān)靶點(diǎn)數(shù)據(jù)集。

1.4 “中藥?化合物?作用靶點(diǎn)?疾病”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建和分析 將健心膠囊主要候選化合物作用靶點(diǎn)與心律失常靶點(diǎn)數(shù)據(jù)集進(jìn)行韋恩（Venn）分析，得到共同的基因集，初步挖掘健心膠囊治療心律失常的作用靶點(diǎn)。進(jìn)而構(gòu)建“中藥?化合物?作用靶點(diǎn)?疾病”網(wǎng)絡(luò)圖，節(jié)點(diǎn)（node）代表健心膠囊單味中藥、化合物與作用疾病靶點(diǎn)，邊（edge）用來連接中藥與化學(xué)成分、化學(xué)成分與作用疾病靶點(diǎn)，顯示中藥?化學(xué)活性成分?心律失常疾病靶蛋白的靶向關(guān)系，以探究健心膠囊治療心律失常的藥理學(xué)作用機(jī)制。

1.5 靶點(diǎn)類 型歸屬 DisGeNET［18］（http：／ ／www.disgenet.org／，Version 6.0，2019 年1 月更新）數(shù)據(jù)庫是一個(gè)包含與人類疾病相關(guān)的基因和變體集合的公開數(shù)據(jù)庫，將“1.4”項(xiàng)下潛在靶點(diǎn)輸入DisGeNET，得到靶點(diǎn)的類型（Protein Class）。

1.6 蛋白質(zhì)?蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將“1.4”項(xiàng)下得到的交集靶蛋白基因在線上傳String 數(shù)據(jù)庫（https：／ ／string?db.org／），限定物種人，得到蛋白互作信息，構(gòu)建蛋白質(zhì)?蛋白質(zhì)相互作用關(guān)系（Protein?Protein Interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)圖，尋找靶點(diǎn)和靶點(diǎn)間作用關(guān)系［19］，利用Cytoscape 3.7.2軟件中的cytoNCA 插件功能，進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析選出核心靶點(diǎn)，其在網(wǎng)絡(luò)中信息傳遞效率高，能更多地影響其他節(jié)點(diǎn)，在網(wǎng)絡(luò)中作用顯著。分析內(nèi)容選取度（Degree cen?trality，DC）值，介度中心性（Betweenness centrality，BC）值，接近中心性（Closeness centrality，CC）值等［20］。

1.7 富集分析 利用DAVID 工具（https：／ ／david.ncifcrf.gov／，David 6.8），將“1.4”項(xiàng)下共同靶點(diǎn)基因?qū)牍δ茏⑨尮ぞ?，進(jìn)行Gene Ontology（GO）、KEGG 功能注釋富集分析。Gene Ontology 富集分析包括生物過程（Biological Process）、細(xì)胞組 成（Cellular Component）、分子功 能（Moleular Function），與KEGG Pathway 富集分析共同尋找活性成分作用靶點(diǎn)顯著富集的功能注釋與通路，以預(yù)測(cè)健心膠囊治療心律失常的可能機(jī)制。以P＜0.05 為篩選條件。

2 結(jié)果

2.1 健心膠囊候選化學(xué)成分信息及篩選結(jié)果 本研究通過TCMSP 數(shù)據(jù)庫對(duì)健心膠囊中黃芪、苦參所含生物成分進(jìn)行檢索，以O(shè)B≥30%和DL≥0.18 為限制條件對(duì)健心膠囊活性生物成分進(jìn)行初步篩選，并結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道，對(duì)沒有入選但明確有心血管獲益的活性的成分，如黃芪甲苷（astraga?loside Ⅳ）、黃芪皂苷（astragaloside Ⅰ?Ⅲ）、氧化苦參堿（oxymatrine）等［21?22］，也納入后續(xù)的研究中，去掉重復(fù)化合物，得到活性生物成分結(jié)果為黃芪26 種、苦參46 種，見表1。

表1 健心膠囊中68 個(gè)候選化合物

續(xù)表1

2.2 健心膠囊主要化學(xué)成分潛在作用靶點(diǎn)收集結(jié)果 檢索70 個(gè)候選化合物相關(guān)的潛在靶點(diǎn)，其中有MOL006571 等27 個(gè)化合物在數(shù)據(jù)庫中未找到相關(guān)靶點(diǎn)，故予剔除。剩余化合物，共得到232 個(gè)作用靶點(diǎn)，其中黃芪214 個(gè)，苦參207 個(gè)。采用Cytoscape3.7.2 軟件構(gòu)建“中藥?化學(xué)成分?作用靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖（圖1），網(wǎng)絡(luò)圖中包括275 個(gè)節(jié)點(diǎn)（2 個(gè)中藥節(jié)點(diǎn)，41 個(gè)化合物節(jié)點(diǎn)，232 個(gè)作用靶點(diǎn)節(jié)點(diǎn)）和813 條邊。其中綠色節(jié)點(diǎn)代表中藥，黃色和粉紅色節(jié)點(diǎn)代表化合物，藍(lán)色節(jié)點(diǎn)代表化合物對(duì)應(yīng)的潛在靶點(diǎn)，每條邊則代表化合物分子與靶點(diǎn)之間的作用關(guān)系。其中槲皮素（quercetin）、芒柄花黃素（formononetin）為黃芪、苦參共有化合物。一個(gè)節(jié)點(diǎn)的度值（degree）表示網(wǎng)絡(luò)中和節(jié)點(diǎn)相連路線的數(shù)目。分析網(wǎng)路圖degree 值前5 位化合物依次為槲皮素quercetin（149），山柰酚kaempferol（63），木犀草素luteolin（57），7?O?甲基異 丙醇胺7?O?methylisomu?cronulatol（46），芒柄花黃素formononetin（40）。這些數(shù)據(jù)表明，這些degree 值高的化合物有可能在健心膠囊的藥理功能中發(fā)揮著較為重要的作用。

圖1 中藥?化學(xué)成分?作用靶點(diǎn)相互作用網(wǎng)絡(luò)圖

2.3 心律失常相關(guān)疾病靶點(diǎn)的收集 采用OMIM 數(shù)據(jù)庫、PharmGkb 數(shù)據(jù)庫、Drugbank 數(shù)據(jù)庫、TTD 數(shù)據(jù)庫、DisGeNET 數(shù)據(jù)庫及NCBI Gene 數(shù)據(jù)庫，通過檢索關(guān)鍵詞“cardiac arrhythmia；arrhythmia”收集心律失常相關(guān)靶點(diǎn)基因，分別收集到56、4、55、19、131、173 個(gè)，剔除重復(fù)，共收集到274 個(gè)心律失常相關(guān)疾病靶點(diǎn)。

2.4 健心膠囊潛在作用心律失常靶點(diǎn)信息、靶點(diǎn)類型歸屬健心膠囊潛在作用靶點(diǎn)和心律失常疾病靶點(diǎn)Venn 分析，得到22 個(gè)共同的靶點(diǎn)基因（圖2）。并且將交集靶點(diǎn)集導(dǎo)入DAVID 數(shù)據(jù)庫，限定物種人，將所有靶基因名稱校正為其官方名稱（official gene symbol），得到22 個(gè)共同靶點(diǎn)（表2）。其中，黃芪對(duì)應(yīng)21 個(gè)靶點(diǎn)，苦參對(duì)應(yīng)19 個(gè)靶點(diǎn)，多數(shù)靶點(diǎn)2 種藥物都同時(shí)具有。將這22 個(gè)靶點(diǎn)輸入Dis?GeNET 數(shù)據(jù)庫，得到靶點(diǎn)類型的信息，包括酶（水解酶、氧化還原酶、轉(zhuǎn)移酶、連接酶、激酶、細(xì)胞連接蛋白酶等）、轉(zhuǎn)運(yùn)體、轉(zhuǎn)錄因子、受體、核酸受體等（表2），表明健心膠囊通過不同靶點(diǎn)類型發(fā)揮藥效，且這些作用靶點(diǎn)共同作用、互相調(diào)節(jié)可能增強(qiáng)了健心膠囊治療作用。

表2 健心膠囊潛在抗心律失常靶點(diǎn)

圖2 健心膠囊潛在作用靶點(diǎn)?心律失常疾病靶點(diǎn)Venn 圖

2.5 “中藥?化學(xué)成分?作用靶點(diǎn)?疾病”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建和分析結(jié)果 利用Cytoscape 3.7.2 軟件構(gòu)建“中藥?化學(xué)成分?作用靶點(diǎn)?疾病”網(wǎng)絡(luò)，分析網(wǎng)絡(luò)：網(wǎng)絡(luò)中有61 個(gè)節(jié)點(diǎn)（其中中藥2 個(gè)，化學(xué)成分節(jié)點(diǎn)35 個(gè)，靶基因節(jié)點(diǎn)23 個(gè)，疾病節(jié)點(diǎn)1 個(gè)）和184 條邊（圖3），根據(jù)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)篩選方法，平均Degree 值為4，篩選所得核心化合物，這些化合物可能是健心膠囊發(fā)揮治療抗心律失常作用的關(guān)鍵（表3）。

圖3 中藥?化學(xué)成分?作用靶點(diǎn)?疾病網(wǎng)絡(luò)圖

表3 健心膠囊治療心律失常核心化合物拓?fù)浞治?/p>

2.6 蛋白質(zhì)?蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及分析 將“2.4”項(xiàng)下得到的22 個(gè)基因檢索String 數(shù)據(jù)庫，得到蛋白與蛋白之間的互相作用信息，蛋白互作關(guān)系，并進(jìn)一步導(dǎo)入Cytoscape軟件，如圖4 所示。該網(wǎng)絡(luò)圖中PDE3A 與其他靶點(diǎn)之間無相互作用，故網(wǎng)絡(luò)圖中未顯示；包含21 個(gè)節(jié)點(diǎn)、46 條邊，代表了蛋白之間相互作用，網(wǎng)絡(luò)中degree 值越大，節(jié)點(diǎn)越大，而Combine score 值越大，邊越粗，各節(jié)點(diǎn)的平均自由度為4，篩選得到NOS3（12）、IL6（10）、SLC6A4（8）、GJA1（7）、PRKCA（6）、PTGS2（6）、ADRA1B（5）、MMP3（5），推測(cè)這些靶點(diǎn)可能是健心膠囊治療心律失常的重要靶點(diǎn)，表明健心膠囊治療心律失?？赡芡ㄟ^多個(gè)靶點(diǎn)聯(lián)合共同發(fā)揮作用。

圖4 潛在核心靶蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖

2.7 GO 注釋及KEGG 通路富集分析

2.7.1 靶點(diǎn)生物學(xué)功能GO 注釋結(jié)果 使用DAVID 工具對(duì)獲得的健心膠囊潛在治療心律失常的22 個(gè)靶標(biāo)基因進(jìn)行GO 富集分析，結(jié)果提示生物過程中主要富集到血管收縮的積極調(diào)節(jié)、腺苷酸環(huán)化酶激活腎上腺素能受體信號(hào)通路、血小板活化、細(xì)胞?細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、積極調(diào)節(jié)平滑肌收縮、去甲腎上腺素?腎上腺素血管收縮參與全身動(dòng)脈血壓的調(diào)節(jié)、細(xì)胞溶質(zhì)鈣離子濃度的正調(diào)節(jié)、對(duì)藥物的反應(yīng)、調(diào)節(jié)心室肌細(xì)胞膜復(fù)極化等，細(xì)胞組成中富集到細(xì)胞質(zhì)膜、細(xì)胞質(zhì)膜的整體成分，分子功能中富集到α1 腎上腺素能受體活性、支架蛋白結(jié)合、酶結(jié)合，可見健心膠囊涉及多個(gè)生物學(xué)過程發(fā)揮作用（表4）。

表4 健心膠囊治療心律失常候選靶點(diǎn)的GO 富集

2.7.2 靶點(diǎn)KEGG 通路富集分析結(jié)果 使用DAVID 工具對(duì)獲得的共同靶標(biāo)基進(jìn)行KEGG 富集分析，以P＜0.05 為基準(zhǔn)篩選，共獲得17 個(gè)通路富集，包括環(huán)鳥苷酸?蛋白激酶G（cGMP?PKG）信號(hào)通 路、血管內(nèi) 皮生長因子（VEGF）信號(hào)通路、心肌細(xì)胞中的腎上腺素能信號(hào)傳導(dǎo)、唾液分泌、鈣離子信號(hào)通路、血管平滑肌收縮、神經(jīng)活性配體?受體相互作用、間隙連接、HIF?1 信號(hào)通路、PI3K?Akt 信號(hào)通路、雌激素信號(hào)通路、阿米巴病、TNF 信號(hào)通路、5?羥色胺能突觸通路、癌癥通路、鞘脂信號(hào)通路、醛固酮調(diào)節(jié)的鈉重吸收等。并通過Omicshare（http：／ ／www.omicshare.com／tools／Home／Soft／search）對(duì)富集分析結(jié)果進(jìn)行可視化處理。其中，Y 軸代表通路名稱；X 軸代表富集因子（RichFactor，即目標(biāo)基因中屬于這個(gè)通路的基因的數(shù)量／背景基因集中這個(gè)pathway 所有基因的數(shù)量）；氣泡面積大小代表目標(biāo)基因集中屬于這個(gè)通路的基因數(shù)量；氣泡顏色代表富集顯著性，即P?value 數(shù)值的大?。▓D5）。

圖5 健心膠囊治療心律失常候選靶點(diǎn)KEGG 富集分析

3 討論

中醫(yī)治療以整體觀念、辨證論治為基本原則，中藥化學(xué)成分復(fù)雜，且復(fù)方作用機(jī)制和配伍機(jī)制較難分析，具有多成分、多靶點(diǎn)、多途徑的特點(diǎn)。而網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)具有整體性和動(dòng)態(tài)性的特點(diǎn)，為我們提供了研究中藥的一種新策略。本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)手段，通過對(duì)健心膠囊進(jìn)行成分，靶點(diǎn)與疾病的生物信息學(xué)綜合網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建，初步探究了該藥治療心律失常的可能作用機(jī)制。

健心膠囊由黃芪和苦參組方而成?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，黃芪具有抗氧化，抗炎，免疫調(diào)節(jié)，抗腫瘤，降血脂，降血糖和利尿作用［21?22］。在心血管系統(tǒng)保護(hù)方面，黃芪具有保護(hù)心肌、改善心肌缺血、抑制心肌肥厚、抑制心肌纖維化、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞、促進(jìn)血管生成、抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖、抑制心肌重構(gòu)及抗心律失常等保護(hù)心臟作用［23?24］?？鄥⒕哂锌共《尽⒖寡?、消腫利尿、抗腫瘤作用，同時(shí)抗心律失常、調(diào)節(jié)免疫作用，廣泛用于心律失常、心力衰竭、病毒性心肌炎、冠心病等作用［25?26］。

本研究篩選得到健心膠囊中41 個(gè)具有治療心律失常靶點(diǎn)的化合物，部分成分的有效性已被證實(shí)。MOL000098 槲皮素是一種具有多種生物活性的化合物，具有抗氧化、抗炎、降糖，保護(hù)心臟等多種作用［27］。槲皮素能降低心肌細(xì)胞的自律性、延長不應(yīng)期、保護(hù)心肌細(xì)胞膜上的Na＋?K＋?ATP 酶、拮抗外鈣內(nèi)流等直接抗心律失常作用［28］。山柰酚屬于黃酮類化合物，具有抗氧化、抗炎、預(yù)防心血管疾病等多種藥理活性［29］。木犀草素是黃酮類化合物，具有抗炎、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、血管生成及神經(jīng)保護(hù)作用等多種作用［30］。在缺血／再灌注損傷的糖尿病大鼠模型中，木犀草素可保留心臟功能，減少梗死面積和心肌細(xì)胞凋亡，降低心律失常的發(fā)生率［31］。芒柄花黃素具有抗氧化應(yīng)激，抗炎作用［32］，并具有調(diào)節(jié)體內(nèi)血脂代謝和預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的作用［33］，發(fā)揮保護(hù)心臟作用。

蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)圖表明健心膠囊治療心律失常的靶蛋白之間存在著相互關(guān)系，是一個(gè)復(fù)雜交錯(cuò)的網(wǎng)絡(luò)，并非單獨(dú)發(fā)揮作用。分析網(wǎng)絡(luò)，篩選得到的NOS3、IL6、SLC6A4、PTGS2、CXCR4、GJA1、PRKCA、ADRA1B、MMP3，這些核心靶點(diǎn)均與心肌細(xì)胞代謝、心電活動(dòng)、血流灌注等顯著相關(guān)，均被大量的實(shí)驗(yàn)研究論證，可能是健心膠囊治療心律失常的重要作用靶點(diǎn)。

一氧化氮合酶（NOS）是唯一能限制左旋精氨酸生成一氧化氮的合成酶，它的變化直接影響著一氧化氮的生成及發(fā)揮的作用。一氧化氮是內(nèi)皮依賴的血管舒張因子，具有舒張血管、調(diào)節(jié)血壓、抑制血小板聚集與黏附、抑制血管平滑肌細(xì)胞增生、防止脂蛋白氧化等生物學(xué)作用［34］，在心律失常中作為內(nèi)源性心臟保護(hù)因子［35］。白細(xì)胞介素6（IL?6）由纖維母細(xì)胞、單核／巨噬細(xì)胞等產(chǎn)生，作用于血管系統(tǒng)，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子和其他炎癥遞質(zhì)，增強(qiáng)局部炎癥反應(yīng)。研究表明，心房顫動(dòng)患者中炎癥介質(zhì)IL?6 水平顯著上升，心房收縮受損可促進(jìn)炎癥前的改變，IL?6 的水平已被認(rèn)為是高危房顫患者中風(fēng)和死亡、異常炎癥與血栓栓塞的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素［36］?？p隙連接蛋白43（CJA1）是相鄰細(xì)胞間形成縫隙連接，允許離子之間跨細(xì)胞互相流動(dòng)，是動(dòng)作電位更加協(xié)調(diào)的基礎(chǔ)，可編碼Cx43 基因，Cx43 功能缺陷是房顫等心律失常發(fā)生的原因之一［37］。α1B?腎上腺素受體（ADRA1B）屬于G 蛋白偶聯(lián)受體超家族成員，是去甲腎上腺素的主要靶受體，能夠激活多項(xiàng)下游的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)起到預(yù)防心力衰竭條件下心臟病理性重塑的作用。并能激活細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑，減少鈣離子流，顯著延長動(dòng)作電位時(shí)間，導(dǎo)致心律失常［38］?；|(zhì)金屬蛋白酶3（MMP3）是一種在細(xì)胞外基質(zhì)降解及再塑中發(fā)揮重要作用的鋅離子依賴的中性蛋白酶，其在動(dòng)脈粥樣硬化、及心肌重構(gòu)過程中發(fā)揮著重要作用［39］。這些進(jìn)一步說明本研究測(cè)得的結(jié)果的可靠性和科學(xué)性。

另外，健心膠囊候選作用心律失常靶基因KEGG 通路的顯著富集通路涉及cGMP?PKG 信號(hào)通路、VEGF 信號(hào)通路、心肌細(xì)胞中的腎上腺素能信號(hào)傳導(dǎo)、唾液分泌、鈣離子信號(hào)通路、血管平滑肌收縮通路。目前研究表明，cGMP?PKG 信號(hào)通路具有增強(qiáng)心臟收縮力，抑制肥大和影響細(xì)胞重塑作用，可通過PDEs 信號(hào)通路調(diào)節(jié)cAMP 信號(hào)通路，發(fā)揮保護(hù)心肌作用［40］。VEGF 由血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌，是最關(guān)鍵的血管生成促進(jìn)因子，在生理性和病理性血管新生過程中發(fā)揮著重要作用，可增加微血管與小靜脈血管的通透性，促進(jìn)血管新生，從而改善心肌缺氧，緩解心絞痛［41］。鈣離子通道是心臟電活動(dòng)、機(jī)械偶聯(lián)調(diào)控及維持心臟正常節(jié)律的中心環(huán)節(jié)，Ca2＋的失調(diào)控是收縮失能和心律失常的主要原因［42］。

通過上述分析，本研究預(yù)測(cè)健心膠囊治療心律失常的作用機(jī)制，可能是通過調(diào)控健心膠囊?心律失常交接靶基因的表達(dá)，改善心肌細(xì)胞代謝、心電活動(dòng)、血流灌注等，調(diào)節(jié)下游cGMP?PKG 信號(hào)、VEGF 信號(hào)、心肌細(xì)胞中的腎上腺素能信號(hào)傳導(dǎo)、鈣離子信號(hào)、血管平滑肌收縮等通路，達(dá)到治療心律失常的目的。

綜上所述，本研究借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的相關(guān)數(shù)據(jù)庫信息，對(duì)健心膠囊治療心律失常作用機(jī)制進(jìn)行了系統(tǒng)分析。結(jié)果證實(shí)了中藥治療疾病的多成分、多靶點(diǎn)、多通路特點(diǎn)，并為健心膠囊的進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究和臨床應(yīng)用提供了新思路和指明了新方向，同時(shí)也為中醫(yī)藥的研究提供了新方法和新思路。但是，由于機(jī)體連續(xù)性和整體性的生物學(xué)特點(diǎn)，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析存在數(shù)據(jù)庫和已有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)構(gòu)成的網(wǎng)絡(luò)模型局限性，其雖能系統(tǒng)地預(yù)測(cè)藥物化學(xué)成分作用的靶點(diǎn)，但無法預(yù)測(cè)靶點(diǎn)的上調(diào)和下調(diào)，從而預(yù)測(cè)功能改變的方向，此外也存在藥物代謝動(dòng)力學(xué)方面的問題，如靶點(diǎn)在細(xì)胞內(nèi)時(shí)空分布的實(shí)際問題等，不能揭示完整的藥理作用。因此，分析結(jié)果需要開展相應(yīng)的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)加以驗(yàn)證，以期更加全面地闡釋中醫(yī)藥治療疾病多成分、多靶點(diǎn)、多通路的機(jī)制。