高危型HPV感染者宮頸免疫狀況及與宮頸癌的關(guān)系

程文俊 申慶文

宮頸癌發(fā)病率高居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之首，嚴(yán)重危害患者生命健康，因此深入研究其發(fā)病機(jī)制，對預(yù)防宮頸癌發(fā)生和進(jìn)展意義重大［1］。王芳等［2］報道，宮頸癌組高危型人乳頭瘤病毒（High risk human papillomavirus，HR-HPV）感染率為77.50%，顯著高于宮頸癌前病變和宮頸癌篩查正常人群患者，提示HR-HPV 感染與宮頸癌的發(fā)病密切相關(guān)，但目前尚未完全闡明其通過何種機(jī)制介導(dǎo)了宮頸癌的發(fā)生。根據(jù)既往資料［3］，HPV 感染可導(dǎo)致CD4+T 細(xì)胞、CD4+/CD8+降低，引起宮頸局部免疫微環(huán)境變化，而這種變化與宮頸癌關(guān)系的報道鮮見，不利于疾病的防治。鑒于此本研究探討HR-HPV 感染者宮頸免疫狀況及與宮頸癌的關(guān)系，旨在為臨床針對性防治宮頸癌提供循證支持，現(xiàn)報告如下。

1 對象和方法

1.1 研究對象

選取2018年6月至2020年10月本院收治的104 例HR-HPV 感染患者，其中宮頸癌篩查正常人群39 例（正常組）、宮頸高級別上皮內(nèi)瘤變36 例（HSIL 組）、宮頸癌29 例（宮頸癌組）。所有患者均知情并同意。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①3 組分別符合宮頸癌篩查正常人群、宮頸高級別上皮內(nèi)瘤變、宮頸癌診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］；②伴有HR-HPV 感染者；③首次確診，無相關(guān)治療史。排除標(biāo)準(zhǔn)：①自身免疫疾病者；②免疫缺陷者；③合并其他急性感染類疾病者；④伴有其他系統(tǒng)原發(fā)性惡性腫瘤者；⑤有宮頸手術(shù)史、子宮切除史者。本實驗經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 資料收集

收集患者年齡、體質(zhì)量指數(shù)、婚姻狀況、生育史、陰道清潔度、血脂異常、糖尿病、心臟病、高血壓分布，所收集數(shù)據(jù)錄入數(shù)據(jù)庫，核實原始資料準(zhǔn)確性和完整性，采用Epi Data 3.02雙人雙錄，進(jìn)行一致性檢驗。

1.2.2 標(biāo)本采集與檢測

于治療前采用陰道窺器暴露宮頸，將宮頸采樣刷刷頭插入宮頸管，中央較長的刷絲對準(zhǔn)病變部位順時針?biāo)? 圈左右，取下刷頭，置入液基細(xì)胞學(xué)保存液中，通過流式細(xì)胞儀（美國Beckman Coul-ter 公司XL 型）檢測CD3+T 細(xì)胞、CD4+T 細(xì)胞、CD8+T 細(xì)胞、Treg 水平，采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法檢測HR-HPV 載量。

1.3 觀察指標(biāo)

①比較3 組年齡、體質(zhì)量指數(shù)、婚姻狀況、生育史、陰道清潔度、血脂異常、糖尿病、心臟病、高血壓分布及HR-HPV 載量。②比較3 組CD3+T 細(xì)胞、CD4+T 細(xì)胞、CD8+T 細(xì)胞、Treg 水平。③分析CD3+T 細(xì)胞、CD4+T 細(xì) 胞、CD8+T 細(xì)胞、Treg 水平與HR-HPV 載量的關(guān)系。④分析宮頸癌相關(guān)影響因素。⑤分析CD3+T 細(xì)胞、CD4+T 細(xì)胞、CD8+T 細(xì)胞、Treg 水平預(yù)測宮頸癌的價值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0 處理數(shù)據(jù)，計量資料以（）表示，多組間比較以單因素方差分析，兩兩比較以t檢驗，計數(shù)資料用n（%）表示、χ2檢驗，采用Pearson 分析宮頸免疫指標(biāo)與HR-HPV 載量相關(guān)性，采用Logistic 回歸方程分析宮頸癌相關(guān)影響因素，采用受試者工作特征曲線（ROC）及ROC 下面積（AUC）分析CD3+T 細(xì)胞、CD4+T 細(xì)胞、CD8+T 細(xì)胞、Treg 預(yù)測宮頸癌的價值。P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3 組一般資料比較

3 組年齡、體質(zhì)量指數(shù)、婚姻狀況、生育史、陰道清潔度、血脂異常、糖尿病、心臟病、高血壓分布比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；宮頸癌組HR-HPV 載量高于HSIL 組、正常組（P<0.05），HSIL 組HR-HPV 載量高于正常組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

表1 3 組一般資料對比［（±s），n（%）］Table 1 Comparison of general data of 3 groups［（±s），n（%）］

表1 3 組一般資料對比［（±s），n（%）］Table 1 Comparison of general data of 3 groups［（±s），n（%）］

注：總膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白有≥1 項異常即為血脂異常

資料F/χ2值P 值年齡(歲)體質(zhì)量指數(shù)（kg/m2）偏瘦正常超重肥胖婚姻狀況已婚未婚生育史正常組（n=39）61.89±9.66 HSIL 組（n=36）65.27±11.30宮頸癌組（n=29）63.58±10.360.144 0.868 6（15.38）18（46.15）11（28.21）4（10.26）5（13.89）20（55.56）9（25.00）2（5.56）2（6.90）17（58.62）9（31.03）1（3.45）3.077 0.799 20（51.28）19（48.72）21（58.33）15（41.67）19（65.52）10（34.48）1.390 0.499有無17（43.59）22（56.41）20（55.56）16（44.44）16（55.17）13（44.83）1.358 0.507陰道清潔度ⅠⅡⅢⅣ3（7.69）8（20.51）23（58.97）5（12.82）2（5.56）7（19.44）21（58.33）6（16.67）1（3.45）5（17.24）19（65.52）4（13.79）0.984 0.986既往史血脂異常糖尿病心臟病高血壓HR-HPV 載量（×104 copies/mL）4（10.26）2（5.13）0（0）3（7.69）3.64±1.05 3（8.33）5（13.89）2（5.56）4（11.11）5.89±2.36 2（6.90）3（10.34）2（6.90）1（3.45）15.66±6.40 0.245 1.678 2.574 1.328 94.808 0.885 0.432 0.276 0.515<0.001

2.2 3 組宮頸免疫狀況比較

宮頸癌組CD3+T 細(xì)胞、CD4+T 細(xì)胞低于HSIL組、正常組，CD8+T 細(xì)胞、Treg 高于HSIL 組、正常組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；HSIL 組CD3+T 細(xì)胞、CD4+T 細(xì)胞低于正常組，（P<0.05），CD8+T 細(xì)胞、Treg 高于正常組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

表2 3 組宮頸免疫狀況比較（±s）Table 2 Comparison of cervical immune status in 3 groups（±s）

表2 3 組宮頸免疫狀況比較（±s）Table 2 Comparison of cervical immune status in 3 groups（±s）

組別正常組HSIL 組宮頸癌組F 值P 值n 39 36 29 CD3+T細(xì)胞（%）43.58±7.06 37.19±5.27 30.91±6.28 34.251<0.001 CD4+T細(xì)胞（%）34.14±6.33 28.68±5.79 22.01±4.15 38.916<0.001 CD8+T細(xì)胞（%）25.17±3.04 27.88±2.97 30.37±3.64 22.311<0.001 Treg（%）5.02±1.36 7.29±1.07 10.04±2.59 71.052<0.001

2.3 宮頸免疫指標(biāo)與HR-HPV 載量相關(guān)性

采用Pearson 進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，CD3+T 細(xì)胞（r=-0.560，P<0.001）、CD4+T 細(xì)胞（r=-0.529，P<0.001）與HR-HPV 載量呈負(fù)相關(guān)，CD8+T細(xì)胞（r=0.552，P<0.001）、Treg（r=0.565，P<0.001）與HR-HPV 載量呈正相關(guān)（P<0.05）。

2.4 宮頸癌影響因素的Logistic 回歸方程分析

以宮頸癌發(fā)生與否為因變量，無=0，有=1，納入各宮頸免疫指標(biāo)作為自變量，以均值為分界，將各宮頸免疫指標(biāo)轉(zhuǎn)化為二分類變量，低于均值賦值為1，高于均值賦值為2，采用Logistic 回歸方程分析，結(jié)果顯示，CD3+T 細(xì)胞、CD4+T 細(xì)胞、CD8+T 細(xì)胞、Treg 高于均值者發(fā)生宮頸癌的風(fēng)險（P<0.05）。見表3。

表3 宮頸癌影響因素分析Table 3 Analysis of factors affecting cervical cancer

2.5 宮頸免疫指標(biāo)預(yù)測宮頸癌的ROC

ROC 結(jié)果顯示，CD3+T 細(xì)胞、CD4+T 細(xì)胞、CD8+T 細(xì)胞、Treg 聯(lián)合預(yù)測值均高于單一預(yù)測值。見表4、圖1。

表4 ROC 分析結(jié)果Table 4 ROC analysis results

圖1 宮頸免疫指標(biāo)預(yù)測宮頸癌的ROCFigure 1 The ROC of cervical cancer predicted by cervical immune indexes

3 討論

女性人群中，HPV 感染普遍存在，大多2年內(nèi)可自行清除，5%～10%進(jìn)展為宮頸癌前病變或?qū)m頸癌，進(jìn)展為宮頸癌患者中，約70%患者伴有HR-HPV 感染，提示HR-HPV 感染與宮頸癌發(fā)病有關(guān)［5］。

HR-HPV 感染后，可激活機(jī)體免疫功能。對宮頸局部免疫微環(huán)境來講，存在各種免疫細(xì)胞，其中T 淋巴細(xì)胞對癌變細(xì)胞起到免疫監(jiān)視和清除作用［6］。武麗蕊等［7］報道，宮頸癌患者CD4+T 細(xì)胞低于HSIL 組和宮頸癌篩查正常人群組患者，本研究觀點(diǎn)與之相似。且本研究在此基礎(chǔ)上還發(fā)現(xiàn)，宮頸癌患者宮頸局部CD3+T 細(xì)胞降低，CD8+T 細(xì)胞升高，伴有顯著的免疫功能紊亂。CD3+T 細(xì)胞存在于所有T 淋巴細(xì)胞表面，可結(jié)合T 細(xì)胞受體，向T 淋巴細(xì)胞內(nèi)傳遞抗原信號，并參與T 細(xì)胞分化、殺傷T 細(xì)胞活化和分化等，是重要的膜抗原［8］。CD4+T 細(xì)胞協(xié)調(diào)B 細(xì)胞分化產(chǎn)生抗體，CD8+T 細(xì)胞則對抗體合成、分泌及T 細(xì)胞增殖起抑制作用［9］。本實驗結(jié)果提示HR-HPV 載量越高，HR-HPV 清除難度越大，傾向于HR-HPV 持續(xù)感染狀態(tài)，不斷刺激宮頸局部組織，引起免疫-炎癥刺激和組織增生，同時HR-HPV 感染導(dǎo)致CD8+T 細(xì)胞增加，使不斷增殖的細(xì)胞逃逸正常的免疫監(jiān)視，出現(xiàn)細(xì)胞周期失控，從而介導(dǎo)宮頸癌的發(fā)生［10-12］。Logistic 回歸方程及ROC 分析結(jié)果可為臨床防治宮頸癌的發(fā)生提供客觀數(shù)據(jù)參考。另從以上結(jié)果和分析可知，靶向T 淋巴細(xì)胞亞群，可能有助于抑制宮頸病變進(jìn)展，從而為臨床防治宮頸癌提供一個新思路。

Treg 是抑制性T 細(xì)胞的一種功能亞群，包括天然Treg 和獲得性Treg，主要來源于胸腺等，天然Treg 通過細(xì)胞接觸機(jī)制發(fā)揮抑制功能，獲得性Treg 是外周成熟T 細(xì)胞在持續(xù)抗原刺激及轉(zhuǎn)化生長因子-β、白介素-10 等細(xì)胞因子誘導(dǎo)下產(chǎn)生，通過可溶性細(xì)胞因子發(fā)揮效應(yīng)［13-14］。與低危HPV 感染患者相比，HR-HPV 感染者Treg 顯著升高，免疫抑制作用增強(qiáng)。本研究結(jié)果表明隨著宮頸病變加重，Treg 逐漸升高，參與宮頸病變的進(jìn)展。Treg 免疫抑制作用在HR-HPV 感染中具有雙向調(diào)節(jié)作用，一方面對HR-HPV 誘導(dǎo)的持續(xù)炎性刺激形成保護(hù)性生理防御反應(yīng)，減輕免疫清除病原體和過強(qiáng)免疫損傷失衡造成的組織損傷，另一方面增強(qiáng)對不斷增生細(xì)胞的免疫逃逸作用，降低機(jī)體對不斷增生細(xì)胞的免疫反應(yīng)，因此Treg 水平增高與宮頸癌發(fā)病風(fēng)險增加有關(guān)［15］。從理論上講，降低宮頸局部Treg 水平，可減弱或避免Treg 免疫抑制作用，增強(qiáng)對HR-HPV 感染免疫清除效應(yīng)，預(yù)防宮頸病變的進(jìn)展，這為臨床防治宮頸癌提供了一個新靶點(diǎn)，但臨床實際是否能取得預(yù)期效果，仍有待后續(xù)研究的進(jìn)一步驗證。

綜上，高危型HPV 感染者宮頸局部CD3+T 細(xì)胞、CD4+T 細(xì)胞降低，CD8+T 細(xì)胞、Treg 升高，存在明顯局部免疫功能異常，并與宮頸癌發(fā)生顯著相關(guān)，有望成為預(yù)測宮頸癌發(fā)生的新型分子標(biāo)志物。