急性冠脈綜合征患者血漿miR-122、miR-29b、miR-30d水平變化及診斷價(jià)值

郝春霞 張小光 李偉 張穎

經(jīng)調(diào)查［1］發(fā)現(xiàn)，急性冠脈綜合征（Acute coro-nary syndrome，ACS）是導(dǎo)致心血管疾病患者死亡的主要原因。同時(shí)也是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病中的急危重癥；若是早期能夠準(zhǔn)確識(shí)別，對控制病情發(fā)展及改善預(yù)后具有重要意義。有研究［2］指出，血脂、高敏C 反應(yīng)蛋白等指標(biāo)在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化心臟病的發(fā)生及發(fā)展中起到重要意義?；诖耍綄ひ环N特異性、敏感度較高的指標(biāo)用于預(yù)測急性冠脈綜合征病情發(fā)展十分重要，也一直是臨床研究的重點(diǎn)。有研究［3］指出，miRNA 異常表達(dá)與急性冠脈綜合征的發(fā)生密切相關(guān)，但臨床上關(guān)于其研究報(bào)道較少，尚不清楚miR-122、miR-29b、miR-30d等作用機(jī)制，故本次旨在探討急性冠脈綜合征患者血漿miR-122、miR-29b、miR-30d 水平變化及診斷價(jià)值?，F(xiàn)將其報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

分析2017年1月至2020年1月診治的102 例急性冠脈綜合征患者（觀察組）和40 例健康體檢人員（對照組）的臨床資料。診斷標(biāo)準(zhǔn)：符合《急性冠脈綜合征急診快速診治指南（2019）》［4］的診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影等技術(shù)確診。納入標(biāo)準(zhǔn)：①首次發(fā)病；②年齡>18 歲；③無腦出血等疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在全身性感染等疾?。虎诎橛邢忍煨孕呐K??；③接受過冠脈支架植入治療。觀察組中男性52 例、女性50 例；年齡平均（51.23±2.45）歲；其中非ST 段抬高型肌梗死51 例、不穩(wěn)定型心絞痛51 例；NYHA 心功能分級(jí)［5］：Ⅰ級(jí)15 例、Ⅱ級(jí)28例、Ⅲ級(jí)35 例、Ⅳ級(jí)24 例；對照組中男性21 例、女性19 例；年齡平均（51.32±2.41）歲；兩組在性別、年齡等資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 試劑與方法

實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測后的血漿miR-122、miR-29b、miR-30d 等資料。操作步驟如下：于空腹?fàn)顟B(tài)下抽取受檢人員外周靜脈血5 mL，5 000 rpm離心20 min，取上清液至干凈離心試管中待檢；采用血液RNA 分離試劑盒（美國賽默飛世爾科技有限公司）提取血漿RNA，將100 ng 總RNA 進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳，以此保證RNA 的完整性，并采用紫外分光光度計(jì)（美國賽默飛世爾科技有限公司）檢測吸光值，確定提取RNA 純度是否合格，其次采用RNA 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（美國Takaya 科技有限公司）對提取RNA 進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，且選擇SYBR-Green 熒光定量PCR 檢測試劑盒（美國賽默飛世爾科技有限公司）對血漿miR-122；miR-29b；miR-30d 進(jìn)行熒光定量PCR 檢測；其中，miR-29b 反應(yīng)體系為SYBR mix12.5 μL，miR-30d 為25 μL，miR-29b 為20 μL。PCR 擴(kuò)增條件為95℃，40 s；96℃，10 s；59℃，50 s，進(jìn)行36 個(gè)循環(huán)。最后根據(jù)2-△△Ct法計(jì)算miR-122、miR-29b、miR-30d 相對表達(dá)量，并以其相對表達(dá)量來表示血漿miR-122、miR-29b、miR-30d 的表達(dá)水平。三項(xiàng)聯(lián)合=miR-122+（β miR-29b/β miR-122）×miR-30d（β miR-30d/β miR-122）×miR-29b，β 以組別為因變量，以miR-122、miR-29b、miR-30d 為自變量進(jìn)行二元logistic 回歸的回歸系數(shù)。miR-29b 上游引物：5′GGCCTTAAGTCAAATGTCGGCT-3′；下游引物：5′-AAAGGATCACTGGAACCTGCC-3′；miR-122 上游引物：5′-GTTCGTGGGAGCTACATCTG-GC-3′；下游引物：5′-GCAGGGTCCGAGGTATTC-3′；miR-30d 上游引物：5′-AACCTGAGTGGAGCA-GA-3′；下游引物：5′-TGTAAACATCCCCGAC-3′。

1.3 觀察指標(biāo)

①評(píng)估觀察組與對照組的血漿miR-122、miR-29b、miR-30d。②分析miR-122、miR-30d、miR-29b及三項(xiàng)聯(lián)合的ROC 曲線，并評(píng)估其敏感度、特異度、約登指數(shù)。③評(píng)估A 組與B 組的血漿miR-122、miR-29b、miR-30d。④分析血漿miR-122、miR-29b、miR-30d與急性冠脈綜合征患者嚴(yán)重程度的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析；計(jì)量資料用（）表示，行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；預(yù)測價(jià)值評(píng)估采用ROC 曲線分析；相關(guān)性采用Spearman 法分析；以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血漿miR-122、miR-29b、miR-30d 比較

觀察組的miR-122、miR-30d 高于對照組，而miR-29b 低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

表1 兩組血漿miR-122、miR-29b、miR-30d 比較（±s）Table 1 Comparison of plasma miR-122，miR-29b，miR-30d between 2 groups（±s）

表1 兩組血漿miR-122、miR-29b、miR-30d 比較（±s）Table 1 Comparison of plasma miR-122，miR-29b，miR-30d between 2 groups（±s）

組別觀察組對照組t 值P 值n 102 40 miR-122 4.83±1.94 1.02±0.14 12.382<0.001 miR-29b 0.70±0.23 1.45±0.49 12.404<0.001 miR-30d 5.01±1.14 1.98±0.32 13.238<0.001

2.2 診斷效能

ROC 曲線分析顯示，miR-122、miR-30d、miR-29b、三項(xiàng)聯(lián)合診斷急性冠脈綜合征的AUC 分別為0.959、0.966、0.936、0.999（P<0.05）。見表2、圖1。

表2 血漿miR-122、miR-29b、miR-30d 及三項(xiàng)聯(lián)合的診斷效能分析Table 2 Analysis of the diagnostic efficacy of plasma miR-122，miR-29b，miR-30d and the combination of three items

圖1 miR-122、miR-29b、miR-30d 及三項(xiàng)聯(lián)合的ROC 曲線分析Figure 1 ROC curve analysis of miR-122，miR-29b，miR-30d and the combination of three

2.3 急性冠脈綜合征患者的血漿miR-122、miR-29b、miR-30d 比較

A 組血漿miR-122、miR-30d 高于B 組，而miR-29b 低于B 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

表3 A、B 組的血漿miR-122、miR-29b、miR-30d 比較（±s）Table 3 Comparison of plasma miR-122，miR-29b，miR-30d between group A and group B（±s）

表3 A、B 組的血漿miR-122、miR-29b、miR-30d 比較（±s）Table 3 Comparison of plasma miR-122，miR-29b，miR-30d between group A and group B（±s）

組別A 組B 組t 值P 值n 51 51 miR-122 6.68±0.69 2.98±0.42 35.775<0.001 miR-29b 0.45±0.10 0.95±0.16 20.697<0.001 miR-30d 7.95±0.75 2.54±0.47 47.739<0.001

2.4 相關(guān)性分析

Spearman 相關(guān)性顯示，miR-122、miR-30d 與急性冠脈綜合征患者病情的嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.937、-0.857，P<0.05），而miR-29b 與急性冠脈綜合征患者病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)（r=0.854，P<0.05）。

3 討論

流行病學(xué)［6］調(diào)查發(fā)現(xiàn)，急性冠脈綜合征在臨床上具有較高的發(fā)病率和死亡率。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)，該病的發(fā)生與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂、血小板聚集、血栓形成、血管痙攣等病因具有直接關(guān)系，均是導(dǎo)致急性冠脈綜合征患者冠狀動(dòng)脈管腔出現(xiàn)完全或不完全閉塞的重要原因，最終引起心肌急性缺血或壞死［7］。有研究［8］指出，miRNA 的異常表達(dá)與心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。也有研究表示，miRNA 參與血管脂質(zhì)斑塊形成、斑塊破裂、糜爛、血小板聚集及心肌細(xì)胞壞死、凋亡等過程［9］。鑒于miRNA 異常表達(dá)與急性冠脈綜合征的發(fā)生、發(fā)展具有一定相關(guān)性。本次從分析血漿miR-122、miR-29b、miR-30d 等因子入手，以期為臨床診斷急性冠脈綜合征及評(píng)估預(yù)后篩選實(shí)用指標(biāo)。本研究結(jié)果提示血漿miR-122、miR-29b、miR-30d 異常表達(dá)與急性冠脈綜合征發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。其中，miR-122 是一種由肝臟特異性編碼的多聚腺苷酸。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)，其表達(dá)水平受miR-370 的調(diào)控，且參與體內(nèi)脂肪酸和三酰甘油的合成。也有研究［10］指出，miR-122 參與膽固醇及脂肪酸代謝的調(diào)控，若是抑制血漿miR-122 的表達(dá)量，能有效降低總膽固醇水平，以及減少肝臟三酰甘油的含量。在侯素芝等［11］學(xué)者研究中可見，急性冠脈綜合征組的TG、TC 顯著高于穩(wěn)定性心絞痛組和健康對照組，從中說明TG、TC 水平的升高能增加動(dòng)脈粥樣硬化的風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致急性冠脈綜合征的發(fā)生。而miR-122 又參與了TG、TC 水平的升高，故本文推測miR-122 可能是膽固醇和脂肪酸代謝的調(diào)節(jié)器，可將其作為急性冠脈綜合征診療的靶點(diǎn)。

有研究發(fā)現(xiàn)，miR-29b 異常表達(dá)與T 淋巴細(xì)細(xì)胞瘤、動(dòng)脈粥樣硬化、心肌纖維化等疾病的發(fā)生密切相關(guān)。譬如其在急性心肌梗死、心肌纖維化等疾病發(fā)生中均能起到一定調(diào)節(jié)作用，故臨床將其作為多種疾病的診斷標(biāo)志物分子［12-13］。在本研究中可見，miR-29b 與miR-122、miR-30d 不同，在患者中其血漿miR-29b 表達(dá)量呈明顯下降趨勢，經(jīng)分析為，血管內(nèi)皮細(xì)胞中的miR-29b 具有抑制核因子kB 信號(hào)通路活化的作用，在正常表達(dá)情況下，能抑制炎癥反應(yīng)對細(xì)胞的損害，使血管內(nèi)皮細(xì)胞在細(xì)胞脂多糖的刺激下仍存活。當(dāng)血漿miR-29b 表達(dá)量下降，則無法抑制核因子kB 信號(hào)通路的活化，并且會(huì)導(dǎo)致炎癥因子水平升高，加大對心肌細(xì)胞的損傷，最終引發(fā)急性冠脈綜合征［14］。miR-30d 作為microRNA-30 家族中的一員，參與了多種細(xì)胞的分化。有研究指出，miR-30d 表達(dá)量變化能調(diào)節(jié)硫化氫的分泌，保護(hù)缺血缺氧狀態(tài)下的心肌細(xì)胞。在石萍等［15］學(xué)者研究中可見，急性冠脈綜合征患者血漿中的miR-30d 表達(dá)量會(huì)隨著胸痛時(shí)間呈動(dòng)態(tài)變化，從中說明miR-30d 表達(dá)量會(huì)隨病情發(fā)生改變。在本文Spearman 相關(guān)性顯示，miR-30d 與急性冠脈綜合征嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)，佐證上述說法的可靠性。在本文研究中也可看到，miR-122、miR-30d、miR-29b 預(yù)測急性冠脈綜合征的AUC 分別為0.959、0.966、0.936；說明其預(yù)測價(jià)值較高，若是聯(lián)合診斷，有利于提高診斷確診率，即三項(xiàng)聯(lián)合的AUC為0.999，說明其預(yù)測價(jià)值較miR-122、miR-30d、miR-29b 單獨(dú)檢測高。

綜上所述，miR-122、miR-30d、miR-29b 用于診斷急性冠脈綜合征患者具有較高的臨床價(jià)值，其表達(dá)量會(huì)隨著病情的嚴(yán)重程度上升或下降。