乳腺癌化療患者Q-T間期離散度的變化及意義

安曉飛 李智慧 韓鳳娟

乳腺癌是發(fā)病率居首位的女性惡性腫瘤，主要治療手段是手術(shù)切除聯(lián)合術(shù)后輔助放化療、內(nèi)分泌治療等。蒽環(huán)類藥物是常用的乳腺癌輔助化療藥物，抗腫瘤作用確切。但是，蒽環(huán)類藥物具有心臟毒性，可引起心肌損傷，表現(xiàn)為心力衰竭、心律失常、心臟擴(kuò)大等，嚴(yán)重者危及生命安全［1］。蒽環(huán)類藥物心肌毒性相關(guān)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，蒽環(huán)類藥物通過(guò)下調(diào)miR-19b 的途徑增加含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（cysteinyl aspartate specific proteinase-3，caspase-3）的表達(dá)，進(jìn)而誘導(dǎo)心肌細(xì)胞發(fā)生凋亡［2］。當(dāng)心肌細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，細(xì)胞的電位穩(wěn)定性及復(fù)極同步性均會(huì)發(fā)生改變，通過(guò)心電圖檢測(cè)Q-T 間期離散度能夠評(píng)價(jià)心肌細(xì)胞的電位穩(wěn)定性及復(fù)極同步性。有研究報(bào)道，Q-T 間期離散度對(duì)蒽環(huán)類藥物引起的心肌損傷具有預(yù)測(cè)價(jià)值［3-4］，但Q-T 間期離散度是否與心肌損傷程度及心肌細(xì)胞凋亡有關(guān)并不清楚。為了深入闡明Q-T 間期離散度在蒽環(huán)類藥物引起心肌損傷中的評(píng)估價(jià)值及可能機(jī)制，本研究探究了Q-T 間期離散度與心肌損傷程度及miR-19b/caspase-3 凋亡途徑的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 資料

選擇2016年9月2019年12月期間在本院接受術(shù)后化療的80 例乳腺癌患者作為乳腺癌組，納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)術(shù)后病理診斷為乳腺癌［5］；②接受含蒽環(huán)類藥物的化療方案，化療周期≥2；③化療前后接受心電圖檢查；④簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①化療前存在心肌損傷；②同期接受放療；③合并肝腎功能異常。另取同期在本院體檢的60 例健康知情者作為對(duì)照組。乳腺癌組年齡41～60 歲、平均（55.85±9.93）歲，BMI（22.38±5.82）kg/m2；對(duì)照組年齡40～58 歲、平均（54.344±9.77）歲，BM（I 22.92±7.14）kg/m2。兩組間一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 Q-T 間期離散度的檢測(cè)

乳腺癌組化療前及化療2 個(gè)周期后進(jìn)行心電圖檢查，對(duì)照組入組時(shí)進(jìn)行心電圖檢查，每個(gè)導(dǎo)聯(lián)測(cè)量3 個(gè)Q-T 間期，Q-T 間期的起點(diǎn)為QRS 波起點(diǎn)，終點(diǎn)判斷如下：①等電位線與T 波交界處；②等電位線與T 波降支切跡交界處；③T 波與U 波之間的切跡。所測(cè)得Q-T 間期最大值與最小值的差值即為Q-T 間期離散度。

1.3 血清心肌損傷標(biāo)志物的檢測(cè)

取乳腺癌組化療前及化療2個(gè)周期后的血清，對(duì)照組體檢時(shí)的血清，采用電化學(xué)發(fā)光法及配套試劑盒檢測(cè)肌鈣蛋白I（cTnI）、磷酸肌酸激酶同工酶（CK-MB）的含量。按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。

1.4 外周血miR-19b 的檢測(cè)

取乳腺癌組化療前及化療2 個(gè)周期后的外周抗凝血，對(duì)照組體檢時(shí)的外周抗凝血。首先采用全血RNA 提取試劑盒（北京天根公司）提取外周抗凝血中RNA，而后采用miR cDNA第一鏈合成試劑盒（北京天根公司）進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)，以miR為模板、合成cDNA；最后，采用miR 熒光定量PCR 檢測(cè)試劑盒檢測(cè)miR-19b的表達(dá)水平，按照試劑盒說(shuō)明書配置反應(yīng)體系后在熒光定量PCR 儀上進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)程序?yàn)?4℃預(yù)變性3 min，94℃15 s、60℃40 s 重復(fù)40 個(gè)循環(huán)。根據(jù)反應(yīng)的循環(huán)曲線計(jì)算miR-19b的表達(dá)水平。

1.5 血清Caspase-3 的檢測(cè)

取乳腺癌組化療前及化療2 個(gè)周期后的血清，對(duì)照組體檢時(shí)的血清，采用酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒檢測(cè)Caspase-3 的含量。按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析；計(jì)量資料以（）表示，兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，組內(nèi)化療前后比較采用兩配對(duì)樣本t檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Pearson 檢驗(yàn)，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組Q-T 間期離散度的比較

乳腺癌組患者化療前的Q-T 間期離散度與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），化療后的Q-T 間期離散明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；乳腺癌組患者化療后的Q-T 間期離散度高于化療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組Q-T 間期離散度的比較（±s）Table 1 Comparison of Q-T interval dispersion between 2 groups（±s）

表1 兩組Q-T 間期離散度的比較（±s）Table 1 Comparison of Q-T interval dispersion between 2 groups（±s）

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05；與乳腺癌組化療前比較，bP<0.05

組別乳腺癌組n 80對(duì)照組t/P 值t/P 值60時(shí)間化療前化療后入組時(shí)Q-T 間期離散度（ms）42.83±9.93 51.88±12.18ab 40.49±11.45 1.292/0.199 5.617/0.000

2.2 兩組血清CK-MB、cTnI 比較

乳腺癌組患者化療前的血清CK-MB、cTnI 含量與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），化療后的血清CK-MB、cTnI 含量明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；乳腺癌組患者化療后的血清CK-MB、cTnI 含量高于化療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

表2 兩組血清CK-MB、cTnI 比較（±s）Table 2 Comparison of CK-MB、cTnI between 2 groups（±s）

表2 兩組血清CK-MB、cTnI 比較（±s）Table 2 Comparison of CK-MB、cTnI between 2 groups（±s）

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05；與乳腺癌組化療前比較，bP<0.05。

組別乳腺癌組n 80對(duì)照組t/P 值t/P 值60時(shí)間化療前化療后入組時(shí)CK-MB(U/L)7.38±2.21 16.61±3.58ab 6.72±2.09 1.790/0.076 19.088/0.000 cTnI(ng/mL)0.072±0.017 0.124±0.024ab 0.069±0.020 0.958/0.340 14.392/0.000

2.3 兩外周血miR-19b、血清Caspase-3 的比較

乳腺癌組患者化療前的外周血miR-19b 表達(dá)水平、血清Caspase-3 含量與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；化療后的外周血miR-19b 表達(dá)水平明顯降低，血清Caspase-3 含量明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表3。

表3 兩組miR-19b、Caspase-3 的比較（±s）Table 3 Comparison of miR-19b，Caspase-3 between 2 groups（±s）

表3 兩組miR-19b、Caspase-3 的比較（±s）Table 3 Comparison of miR-19b，Caspase-3 between 2 groups（±s）

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05；與乳腺癌組化療前比較，bP<0.05。

組別乳腺癌組n 80對(duì)照組t/P 值t/P 值60時(shí)間化療前化療后入組時(shí)miR-19b 1.04±0.21 0.73±0.17ab 1.00±0.24 1.049/0.296 7.792/0.000 Caspase-3（ng/mL）28.49±9.91 44.57±8.49ab 31.29±7.63 1.820/0.071 9.560/0.000

2.4 乳腺癌組Q-T 間期離散度與心肌損傷標(biāo)志物、miR-19b、Caspase-3 的相關(guān)性

化療前，乳腺癌組Q-T 間期離散度與CK-MB、cTnI、miR-19b、Caspase-3 無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05）；化療后，乳腺癌組Q-T 間期離散度與CK-MB、cTnI、Caspase-3 呈正相關(guān)，與miR-19b 呈負(fù)相關(guān)。見(jiàn)表4。

表4 乳腺癌組Q-T 間期離散度與心肌損傷標(biāo)志物、miR-19b、Caspase-3 的相關(guān)性Table 4 Correlation between Q-T interval dispersion and myocardial injury markers，miR-19b，caspase-3 in breast cancer group

3 討論

蒽環(huán)類藥物是乳腺癌患者術(shù)后輔助化療常用的藥物，雖然殺傷癌細(xì)胞的效果確切，但是也具有顯著的心臟毒性，患者在接受蒽環(huán)類藥物化療期間會(huì)發(fā)生心肌損傷并增加多種并發(fā)癥的發(fā)生率，嚴(yán)重者可危及生命。因此，準(zhǔn)確評(píng)估蒽環(huán)類藥物化療期間是否發(fā)生心肌損傷、深入探究蒽環(huán)類藥物引起心肌損傷的分子機(jī)制有助于早期預(yù)防心肌損傷的發(fā)生、發(fā)現(xiàn)心肌損傷新的防治靶點(diǎn)。

心肌酶是臨床上用于評(píng)估心肌損傷的常用指標(biāo)，但部分乳腺癌患者接受蒽環(huán)類藥物化療期間心肌酶的升高為假陽(yáng)性，另有部分患者心肌酶正常為假陰性，這給病情評(píng)估造成了一定困擾，不利于準(zhǔn)確評(píng)估蒽環(huán)類藥物化療期間的心肌損傷［6-7］。當(dāng)心肌細(xì)胞發(fā)生損傷時(shí)，細(xì)胞的電位穩(wěn)定性及復(fù)極同步性均會(huì)發(fā)生改變，且這一改變的出現(xiàn)可能早于心肌細(xì)胞的破裂、心肌酶的釋放，因此對(duì)心肌細(xì)胞的電位穩(wěn)定性及復(fù)極同步性進(jìn)行評(píng)估有助于早期識(shí)別心肌損傷［8-9］。Q-T 間期離散度是通過(guò)心電圖評(píng)價(jià)心肌細(xì)胞電位及復(fù)極情況的無(wú)創(chuàng)指標(biāo)，多項(xiàng)心肌梗死、心肌炎的臨床研究證實(shí)，Q-T 間期離散度的增加與心肌損傷的程度有關(guān)［10-12］。

近些年，國(guó)內(nèi)有研究采用Q-T 間期離散度來(lái)預(yù)測(cè)及評(píng)估蒽環(huán)類藥物引起的心肌損傷［3-4］，本研究也將該指標(biāo)用于乳腺癌患者蒽環(huán)類藥物化療后心肌損傷的評(píng)價(jià)?；? 個(gè)周期后，乳腺癌患者的Q-T 間期離散度較化療前及健康志愿者均明顯增加，表明蒽環(huán)類藥物化療影響了乳腺癌患者心肌細(xì)胞的電位穩(wěn)定性及復(fù)極同步性。在此基礎(chǔ)上分析Q-T 間期離散度對(duì)心肌損傷的評(píng)估價(jià)值，通過(guò)CK-MB、cTnI 兩項(xiàng)指標(biāo)反映心肌損傷的程度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：乳腺癌患者化療2 個(gè)周期后的血清CK-MB、cTnI 含量均較化療前及健康志愿者均明顯增加，表明乳腺癌患者在蒽環(huán)類藥物化療后出現(xiàn)了心肌損傷；并且乳腺癌患者化療后的Q-T 間期離散度與血清CK-MB、cTnI 含量具有正相關(guān)關(guān)系，表明Q-T 間期離散度的增加與乳腺癌患者蒽環(huán)類藥物化療后心肌損傷程度的加重有關(guān)。

蒽環(huán)類藥物心臟毒性的分子機(jī)制復(fù)雜且未完全闡明，多項(xiàng)研究認(rèn)為細(xì)胞凋亡是與蒽環(huán)類藥物引起心肌細(xì)胞損傷密切相關(guān)的生物學(xué)環(huán)節(jié)［13-15］。國(guó)內(nèi)周琦［2］的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，蒽環(huán)類藥物通過(guò)抑制miR-19b 表達(dá)的途徑引起心肌細(xì)胞中caspase-3 表達(dá)增加，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞發(fā)生凋亡。本研究對(duì)miR-19b及caspase-3 的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：乳腺癌患者化療2 個(gè)周期后的外周血miR-19b 表達(dá)水平較化療前及健康志愿者均明顯降低，血清caspase-3 含量較化療前及健康志愿者均明顯增加，與周琦的細(xì)胞結(jié)果［2］吻合，表明調(diào)控miR-19b/caspase-3 凋亡途徑是蒽環(huán)類藥物引起心肌損傷的分子機(jī)制之一。在心肌損傷的過(guò)程中，部分心肌細(xì)胞發(fā)生凋亡會(huì)影響細(xì)胞電位及復(fù)極，本研究通過(guò)相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)：乳腺癌患者化療后的Q-T 間期離散度與miR-19b 呈負(fù)相關(guān)，與caspase-3 呈正相關(guān)，表明Q-T 間期離散度的增加與乳腺癌患者蒽環(huán)類藥物化療后miR-19b/cas-pase-3 凋亡途徑的改變有關(guān)。

綜上所述，乳腺癌化療患者化療后Q-T間期離散度增加與心肌損傷加重、miR-19b/caspase-3凋亡途徑激活有關(guān)，未來(lái)檢測(cè)Q-T間期離散度有望成為早期評(píng)估及預(yù)測(cè)乳腺癌患者化療后心肌損傷的無(wú)創(chuàng)指標(biāo)，miR-19b/caspase-3 凋亡途徑也有望成為研究蒽環(huán)類藥物心臟毒性分子機(jī)制及防治手段的新靶點(diǎn)。