異葉澤蘭的遺傳多樣性和居群歷史動(dòng)態(tài)研究

潘躍芝 趙玉娟 龔洵

摘 要：異葉澤蘭屬于菊科澤蘭屬，是該屬分布海拔相對(duì)較高的植物，分布在青藏高原東部和橫斷山海拔1 700～3 000 m的地區(qū)。該文利用ycf6-psbM和rpl32-trnL兩個(gè)葉綠體DNA（cpDNA）片段以及核DNA片段ITS（nITS）作為分子標(biāo)記，研究了異葉澤蘭的遺傳多樣性及其分布特征，探討了其居群歷史動(dòng)態(tài)。結(jié)果表明：（1）葉綠體片段聯(lián)合分析結(jié)果顯示，異葉澤蘭在物種水平遺傳多樣性水平不高，單倍型多態(tài)性指數(shù)（Hd）為0.656，核苷酸多態(tài)性（π）為0.001 61;而ITS的基因型多態(tài)性指數(shù)（Hd）為0.687，核苷酸多態(tài)性（π）為0.002 35。（2）cpDNA和nITS分析結(jié)果均顯示，異葉澤蘭居群水平總的遺傳多樣性大于居群內(nèi)平均遺傳多樣性，遺傳變異主要發(fā)生在居群間，居群間存在明顯的遺傳分化（cpDNA：Gst=0.679，Nst=0.655，F(xiàn)st=0.655;nITS：Gst=0.543，

Nst=0.370，F(xiàn)st=0.584），但是由于Nst值小于Gst值，因此異葉澤蘭的分布不具有明顯的譜系地理結(jié)構(gòu)。（3）基于單倍型地理分布以及Network分析推測(cè)，橫斷山區(qū)南部（川西南-滇西北）和云南中部可能是異葉澤蘭在第四紀(jì)冰期時(shí)的兩個(gè)避難所，中性檢驗(yàn)和失配分析的結(jié)果支持異葉澤蘭在冰期后未發(fā)生過(guò)居群擴(kuò)張。

關(guān)鍵詞： 異葉澤蘭， 遺傳多樣性， 居群歷史動(dòng)態(tài)， 橫斷山區(qū)， 避難所

中圖分類(lèi)號(hào)：Q948.15

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1000-3142（2021）03-0340-11

收稿日期：2019-12-27

基金項(xiàng)目：國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（2017YFC0505200） [Supported by the National Key Research and Development Program of China （2017YFC0505200）]。

作者簡(jiǎn)介： 潘躍芝（1973-），博士，副研究員，主要從事植物進(jìn)化與遺傳資源評(píng)價(jià)研究，（E-mail）panyuezhi@mail.kib.ac.cn。

通信作者：龔洵，博士，研究員，主要從事植物進(jìn)化與保護(hù)遺傳學(xué)研究，（E-mail）gongxun@mail.kib.ac.cn。

Genetic diversity and population demography of Eupatorium heterophyllum （Asteraceae）

PAN Yuezhi， ZHAO Yujuan， GONG Xun

（ Yunnan Key Laboratory for Wild Plant Resources， Kunming Institute of Botany， Chinese Academy of Sciences， Kumming 650201， China ）

Abstract：Eupatorium heterophyllum， belonging to Eupatorium （Asteraceae）， is distributed in the eastern Qinghai-Tibet Plateau and Hengduan mountain， and has relatively high elevation in comparison with those of other species within this genus. A survey of two chloroplast DNA （cpDNA） fragments （ycf6-psbM and rpl32-trnL）， and one nuclear DNA fragment ITS （nITS） were carried out to assess the genetic diversity and infer the population demography of E. heterophyllum. The results showed that the haplotype diversity （Hd） of combined cpDNA fragments was 0.656， and the nucleotide diversity （π） was 0.001 61 at the species level. These two index values of ITS were 0.687 and 0.002 35， respectively. All these data showed that E. heterophyllum had relatively low level of genetic diversity. Both cpDNA and ITS data show that the total genetic diversity of E. heterophyllum was higher than the average value of populations， and the genetic variations occurred mainly among populations. Significant genetic differentiation exists among populations （cpDNA： Gst=0.679， Nst=0.655， Fst=0.655; nITS： Gst=0.543， Nst=0.370， Fst=0.584）. However， there was no obvious phylogeographical structure occurred in E. heterophyllum （Nst < Gst）. Both the pattern of haplotype distribution and Network structure of haplotypes indicated that the southern Hengduan? mountian and central Yunnan Province were probably the two refugia for E. heterophyllum during the Quaternary Glaciation period. It is infered that E. heterophyllum has not undergone population expansion after glacial period which was supported by the neutral test and mismatch analysis.

Key words： Eupatorium heterophyllum， genetic diversity， population demography， Hengduan mountains， refugium

異葉澤蘭（Eupatorium heterophyllum）屬于菊科澤蘭屬（Eupatorium），該屬曾被認(rèn)為是分布在美洲及歐亞大陸的菊科大屬，約600種，被人們所熟知的外來(lái)入侵物種紫荊澤蘭（E. adenophora）曾被置于該屬（林容等，1985;Chen et al.， 2011）。但是，后來(lái)該屬被重新界定為僅分布在歐亞大陸的北極-第三紀(jì)分布小屬，包含45個(gè)種左右（King & Robinson， 1970）;而分布于中南美洲的類(lèi)群不再被歸入該屬內(nèi)，如紫荊澤蘭被歸并到紫莖澤蘭屬（Ageratina），定名為A. adenophora（King & Robinson， 1970;Chen et al.， 2011）。被重新定義的澤蘭屬屬北溫帶類(lèi)群，北美分布有27種，東亞分布有25種，1種分布在歐洲， 是一個(gè)典型的東亞北美間斷分布類(lèi)群（Schilling et al， 1999; Ito et al.， 2000）;在中國(guó)的大陸和臺(tái)灣地區(qū)約分布有14種，其中6種為特有種（Chen et al.， 2011）。系統(tǒng)發(fā)育和植物地理學(xué)分析表明，該類(lèi)群為北美起源和分化，其一分支在6.18～11.6 Ma（晚第三紀(jì)）時(shí)經(jīng)白伶海峽陸橋擴(kuò)散至歐亞大陸，隨后在亞洲經(jīng)歷了輻射演化（Schilling et al.， 1999; Schmidt & Schilling， 2000）。其中，東亞分布的種類(lèi)在形態(tài)表型以及染色體核型上差異都比較小（Watanabe et al.， 1990），物種間可能存在自然雜交的現(xiàn)象（Schmidt & Schilling， 2000）。在中國(guó)分布的約14個(gè)種中，異葉澤蘭分布在青藏高原東部和橫斷山海拔1 700～3 000 m的地區(qū)，是澤蘭屬唯一的分布海拔較高的物種，生于山坡林下、林緣、草地及河谷（Chen et al.， 2011），其化學(xué)成分在不同居群間存在差異（Saito et al.， 2014）。

橫斷山區(qū)是泛北極植物區(qū)系的一個(gè)區(qū)（李錫文和李捷，1993）。該地區(qū)的種子植物區(qū)系基本上是溫帶性質(zhì)的， 尤其是北溫帶成分，這其中許多又是北極-第三紀(jì)植物，這類(lèi)植物在中新世以后伴隨氣溫的急劇下降而南遷。秦嶺-黃河一線并環(huán)沿四川盆地可能是北極第三紀(jì)成分向喜馬拉雅-橫斷山遷移的主要路線（孫航， 2002）。該地區(qū)在第四紀(jì)冰期時(shí)未被統(tǒng)一的大冰蓋覆蓋，同時(shí)又受東亞季風(fēng)氣候和印度季風(fēng)氣候的影響，這給許多植物類(lèi)群提供了避難所，尤其是海拔相對(duì)較低的地區(qū)（Qiu et al.， 2011;更吉卓瑪?shù)龋?018）。在冰后期，橫斷山區(qū)成為現(xiàn)代溫帶植物的重要起源地和輻射地（李錫文和李捷，1993;于海彬和張鐿鋰，2013），物種多樣性和遺傳多樣性都非常高（Yu et al.， 2019）。異葉澤蘭作為澤蘭屬在高海拔地區(qū)的分布物種，在第四紀(jì)冰期及冰期后存在怎樣的居群歷史動(dòng)態(tài)，現(xiàn)有分布居群又具有怎樣的遺傳多樣性分布式樣。本文基于兩個(gè)葉綠體DNA片段（ycf6-psbM和rpl32-trnL）和核DNA片段ITS的測(cè)序數(shù)據(jù)，利用群體遺傳學(xué)和譜系地理學(xué)的分析方法，對(duì)以上問(wèn)題進(jìn)行了初步的探討和回答。

1 材料與方法

1.1 材料

共采集甘肅、四川、云南及貴州27個(gè)居群的261個(gè)樣本的葉片材料（表1，圖1， 圖2）， 硅膠干燥后帶回實(shí)驗(yàn)室。

1.2 DNA提取、PCR擴(kuò)增及測(cè)序

依據(jù)CTAB法（Doyle & Doyle， 1987）提取總DNA。對(duì)nrDNA 的ITS區(qū)段進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增引物為ITS4（TCCTCCGCTTATTGATATGC）和ITS5 （GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG） （White et al.， 1990）;對(duì)cpDNA的ycf6-psbM和rpl32-trnL區(qū)段進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增引物為ycf6F（ATGGATATAGTAAGT

CTYGCTTGGGC）和psbMR（ATGGAAGTAAATATTCT

YGCATTTATTGCT）（Shaw et al.， 2005）及rpl32F（CAGTTCCAAAAAAACGTACTTC） 和trnLR（CTGCT

TCCTAAGAGCAGCGT） （Shaw et al.， 2007）。ITS 的PCR擴(kuò)增條件：95 ℃變性2 min;以95 ℃ 30 s，53 ℃ 1 min，65 ℃ 1 min的條件循環(huán)30次;在65 ℃下延伸7 min。ycf6-psbM的PCR反應(yīng)條件與ITS基本一致，但其退火溫度為52 ℃。 rpl32-trnL 的PCR擴(kuò)增條件：80 ℃變性2 min;以95 ℃ 1 min， 50 ℃ 1min，65 ℃ 1.5 min的條件循環(huán)33次;在65 ℃下延伸5 min。PCR產(chǎn)物用上海生工生物技術(shù)有限公司的純化試劑盒W5211進(jìn)行純化，純化產(chǎn)物用ABI3730測(cè)序儀進(jìn)行雙向測(cè)序。

1.3 數(shù)據(jù)分析

測(cè)序的原始數(shù)據(jù)用DNAStar 軟件包的Seqman（DNAStar，Inc.，Madison，USA）進(jìn)行拼接，用Clustal X （Thompson et al.， 1997）進(jìn)行比對(duì)。用PAUP*4.0b10（Swofford，2002）將兩個(gè)葉綠體片段的序列進(jìn)行聯(lián)合。用DnaSP 5.10（Librado & Rozas， 2009）統(tǒng)計(jì)單倍型數(shù)目和變異位點(diǎn)特征，以及單倍型多樣性（Hd）和核苷酸多樣性（π）;利用該軟件進(jìn)行中性檢驗(yàn)，包括Tajimas D和Fu and Lis F*檢驗(yàn)，在居群擴(kuò)張模型下推測(cè)居群大小變化。運(yùn)用ArcGis10.2編輯各單倍型在地形圖上的地理分布。利用Network5.011 （http：//www.fluxus-engineering.com）構(gòu)建單倍型網(wǎng)狀進(jìn)化關(guān)系。

用Permut（Pons & Petit， 1996）軟件計(jì)算居群內(nèi)平均遺傳遺傳多樣性Hs、總的遺傳多樣性Ht和居群間遺傳分化系數(shù)Gst值和Nst值。

應(yīng)用Arlequin 3.5（Excoffier & Lischer， 2010）軟件包中的分子變異分析（AMOVA），分別檢測(cè)該研究物種在居群間和居群內(nèi)的遺傳變異水平。利用該軟件對(duì)單倍型分布的Fst進(jìn)行評(píng)價(jià)，同時(shí)利用該軟件包中的Mantel統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，比較地理距離矩陣與平均遺傳距離矩陣之間的相關(guān)性，并進(jìn)行1 000次重復(fù)的顯著性檢驗(yàn);失配分析（mismatch distribution analysis）由該軟件來(lái)完成，即分別計(jì)算歧點(diǎn)觀測(cè)值與期望值的方差（SSD）、糙度指數(shù)（r： raggedness index）以及它們的顯著性（P value）。

2 結(jié)果與分析

2.1 cpDNA數(shù)據(jù)分析

共有260個(gè)樣本的ycf6-psbM和rpl32-trnL同時(shí)測(cè)序成功，兩個(gè)片段聯(lián)合并比對(duì)后矩陣長(zhǎng)度為1 179 bp。DnaSP 5.10分析共生成11個(gè)單倍型，每個(gè)居群的核苷酸多樣性（π）、單倍型多樣性（Hd）見(jiàn)表1。物種水平單倍型多態(tài)性指數(shù)（Hd）為0.656，核苷酸多態(tài)性（π）為0.001 61。

單倍型H1主要分布在云南西北部、四川西南部以及甘肅文縣和貴州施秉縣的11個(gè)居群中，昆明（居群24）及東川（居群23）有少量分布;單倍型H4則分布在云南中部的5個(gè)居群中;H5僅分布在云南昆明的居群24中;H9僅分布在麗江玉龍縣的居群13中;H10僅分布在昆明東川居群22中（圖1，表1）。Network分析表明，發(fā)生頻率最高的單倍型H1和H4位于網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的中間位置，單倍型H3、H10、H11、H8、H5、H6和H5位于網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的末端位置（圖3）。

居群的 SSD 值以及糙度指數(shù)r 值都為不顯著的正值（P>0.05），中性檢驗(yàn)表明Tajimas D （-0.59）與 Fu and Lis F（-0.06）值雖然均為負(fù)值，但不顯著小于零 （P > 0.05），失配分布曲線為多峰曲線（圖4：左），觀測(cè)值背離了期望值，違背了居群擴(kuò)張模型。這些結(jié)果都表明，異葉澤蘭居群未發(fā)生顯著居群擴(kuò)張。

異葉澤蘭總遺傳多樣性（Ht）為0.682，居群內(nèi)平均遺傳多樣性（Hs）為0.219，居群間遺傳分化系數(shù)Gst值和Nst 值分別為 0.679和0.655，Nst小于Gst。AMOVA分析結(jié)果表明，異葉澤蘭較多的遺傳變異（65.55%）發(fā)生在居群間， 僅34.45%的變異發(fā)生在居群內(nèi)， 固定指數(shù)Fst=0.655。遺傳距離和地理距離呈正相關(guān)，但顯著度不高（r=0.18， P=0.045）。

2.2 ITS分析

共有261個(gè)樣本的ITS測(cè)序成功，其中197個(gè)個(gè)體是純合體，其余64個(gè)為雜合體。序列比對(duì)后的數(shù)據(jù)矩陣長(zhǎng)度為638 bp，經(jīng)軟件DnaSP5.10的“phase”功能拆分后生成522條序列。這522條序列共生成21種基因型（H1-H21） （圖2，表1），物種水平基因型多態(tài)性指數(shù)（Hd）為0.686 9，核苷酸多態(tài)性（π）為0.002 35;每個(gè)居群的核苷酸多樣性（π）和基因型多樣性（Hd）值見(jiàn)表1。

分布頻率最高的為基因型H1和H3。其中，H1分布在云南中部及四川的冕寧和九龍地區(qū)，云南中部為其主要分布地區(qū);而H3從甘肅文縣沿四川盆地西部邊緣一直分布到分云南西北部地區(qū)，貴州施秉居群中也有分布，其中云南西北部及四川西南部為主要分布區(qū)（圖2，表1）。基因型H2分布在居群1、12、13、14、19、24和27中，除甘肅文縣（居群1）外，呈現(xiàn)從云南西北部到云南中部到云南中北部，再到貴州（居群27）的分布格局。H4和H5也呈現(xiàn)出在甘肅文縣（居群1）、云南西北部（居群14）和云南中北部（居群19）的分布式樣。H7僅分布在云南中北部的三個(gè)居群中（居群20和21、22），H11僅分布在云南中北部的兩個(gè)居群中（居群23和居群25），基因型H8分布在四川西南部（居群16）、云南西北部（居群8、13和15）以及貴州地區(qū)（居群27）。H6為居群14所特有，H10為居群13所特有，H12和H13僅分布在居群2中，H15僅分布在居群1中，H16和H17僅分布在居群17中，H18、H19和H20僅分布在居群18中，H21僅分布在居群27中。因此，ITS基因型主要分布模式可以歸納如下：（1）以H3為代表的“甘肅-川西南-滇西北-貴州”地區(qū)分布類(lèi)型，以H1為代表的“川西南-滇中” 地區(qū)分布類(lèi)型;（2）“四川盆地邊緣”特有基因型分布類(lèi)型，如H12、H13、H15等。出現(xiàn)頻率較高的單倍型H1和H3位于網(wǎng)狀進(jìn)化圖的中間位置，同時(shí)網(wǎng)狀進(jìn)化圖出現(xiàn)多個(gè)環(huán)狀結(jié)構(gòu)，說(shuō)明核基因重組事件的發(fā)生（圖5）。

居群的 SSD 值以及糙度指數(shù)r 值都為不顯著的正值（P >0.01）;中性檢驗(yàn)表明Tajimas D （-1.14）為負(fù)值，但它不顯著小于零（P > 0.1），F(xiàn)u and Lis F 為0.64，失配分布曲線為雙峰曲線（圖4：右），觀測(cè)值背離了期望值，違背了居群擴(kuò)張模型。由此推斷，居群未發(fā)生過(guò)擴(kuò)張只是處于動(dòng)態(tài)平衡，這與葉綠體DNA的分析結(jié)果相一致。

ITS數(shù)據(jù)分析顯示，異葉澤蘭總的遺傳多樣性（Ht）為0.712，居群內(nèi)平均遺傳多樣性（Hs）為0.325，居群間遺傳分化系數(shù)Gst值 為 0.543、Nst 值為 0.370，Nst小于Gst。 AMOVA分析結(jié)果表明，異葉澤蘭58.44%的遺傳變異發(fā)生在居群間， 其余41.56%發(fā)生在居群內(nèi)， 固定指數(shù)Fst=0.584。同時(shí)，統(tǒng)計(jì)分析顯示，異葉澤蘭遺傳距離和地理距離呈顯著正相關(guān)（r=0.43， P=0）。

3 討論

3.1 異葉澤蘭的遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)

本研究中，我們對(duì)27個(gè)居群的261個(gè)個(gè)體的兩個(gè)cpDNA片段及ITS進(jìn)行了測(cè)序和分析，兩個(gè)cpDNA片段聯(lián)合分析后共生成11個(gè)單倍型， ITS序列經(jīng)PHASE拆分后共生成21個(gè)單倍型，表現(xiàn)出較高的單倍型多樣性。在物種水平上，cpDNA的核苷酸多態(tài)性（π）為0.001 61，ITS序列核苷酸多態(tài)性為0.002 35。在菊科植物中，內(nèi)蒙古革苞菊（Tugarinovia mongolica）是菊科一個(gè)單種屬植物，包含一變種Tugarinovia mongolica var. ovatifolia，原變種分布在內(nèi)蒙古北部地區(qū)，其卵葉變種分布在內(nèi)蒙古南部。基于兩個(gè)葉綠體DNA片段（psbA-trnH 和psbK-psbI）的數(shù)據(jù)分析表明，內(nèi)蒙古革苞菊具有非常高的核苷酸多樣性（π=0.009 2）和單倍型多樣性（Hd = 0.908 6），兩個(gè)變種之間遺傳分化明顯（Zhao et al.， 2019）。白菊木（Leucomeris decora）為菊科落葉小喬木，其trnQ-rps16， rpl16 和rpl32-trnL聯(lián)合數(shù)據(jù)的核苷酸多態(tài)性為π=0.001 02，而變異率相對(duì)較高的核基因片段GAPDH的π=0.002 37（Zhao & Gong， 2012）。鹿蹄橐吾（Ligularia hodgsonii）為中國(guó)-日本間斷分布的菊科橐吾屬植物， 在中國(guó)主要是圍繞四川盆地分布， 其23個(gè)居群的三個(gè)葉綠體片段聯(lián)合分析（trnQ-5′rps16， trnL-rpl32和psbA-trnH）的核苷酸多態(tài)性為π=0.002 99，單倍型多態(tài)性為Hd=0.847（Wang et al.， 2013）。因此，與這些菊科植物相比，異葉澤蘭物種水平的核苷酸多態(tài)性和單倍型多態(tài)性都相對(duì)較低。但是，在居群水平，ITS數(shù)據(jù)顯示四川盆地邊緣的幾個(gè)居群存在相對(duì)較高的單倍型多樣性（表1，圖2）。

cpDNA單倍型數(shù)據(jù)顯示，居群水平總的遺傳多樣性（Ht=0.764）大于居群內(nèi)平均遺傳多樣性（Hs=0.250）;ITS數(shù)據(jù)顯示，總的遺傳多樣性（Ht=0.746）大于居群內(nèi)平均遺傳多樣性（Hs=0.382）。AMOVA分析表明，異葉澤蘭居群間遺傳變異高于居群內(nèi) （cpDNA： Fst=0.655; nITS：Fst= 0.584）。Permut分析顯示，居群水平的遺傳分化系數(shù)相對(duì)較高（cpDNA：Gst=0.679，Nst=0.655; nITS：Gst=0.543，Nst=0.370）。Petit et al.（2005）統(tǒng)計(jì)了124種被子植物的屬于母性遺傳的分子標(biāo)記遺傳分化系數(shù)Gst平均值和77種被子植物的屬于雙親遺傳的分子標(biāo)記遺傳分化系數(shù)Gst平均值，結(jié)果顯示屬于母性遺傳的遺傳分化系數(shù)Gst平均值為0.637，屬于雙親遺傳的遺傳分化系數(shù)Gst值平均為0.184，異葉澤蘭分化系數(shù)高于這兩個(gè)值。以上結(jié)果顯示，異葉澤蘭居群間存在較明顯的遺傳分化。由于Nst值小于Gst值，因此異葉澤蘭的分布不具有明顯的譜系地理結(jié)構(gòu)（Pons & Petit， 1996）。但是，從單倍型分布式樣來(lái)看卻存在較明顯的“甘肅-川西南-滇西北-貴州”和“滇中”兩個(gè)相對(duì)分離的分布區(qū)，這兩個(gè)分布區(qū)都存在各自特有單倍型和主要單倍型。然而，單倍型網(wǎng)狀進(jìn)化樹(shù)顯示，兩個(gè)分布區(qū)所擁有的單倍型并沒(méi)有各自形成兩大譜系分支，同時(shí)兩個(gè)分布區(qū)間也存在分布頻率相對(duì)較低的共享單倍型。作為一種多年生菊科植物，異葉澤蘭具有較強(qiáng)的適應(yīng)能力，而種子具有較強(qiáng)的遠(yuǎn)距離傳播能力，兩分布區(qū)間應(yīng)該存在較強(qiáng)的基因交流，這可能是導(dǎo)致異葉澤蘭遺傳多樣性分布式樣的主要原因。

3.2 異葉澤蘭的居群歷史動(dòng)態(tài)

譜系地理學(xué)研究的主要目的之一，是推測(cè)第四紀(jì)冰期時(shí)某物種的避難所及冰后期分布范圍的擴(kuò)展（Avise， 2000; Liu et al.， 2012）。青藏高原東部及鄰近的中國(guó)西南地區(qū)，分布著大量的古老種和新起源種，其中許多植物的分布范圍在冰后期發(fā)生過(guò)擴(kuò)張（Qiu et al.， 2011;Liu et al.， 2012），但也有未發(fā)生過(guò)擴(kuò)張的物種，如偏花報(bào)春（Primula secundiflora）（Wang et al.， 2008）。異葉澤蘭作為分布在青藏高原東部和橫斷山脈的物種，中性檢驗(yàn)和失配分析表明其未發(fā)生過(guò)居群的擴(kuò)張。

冰期時(shí)的避難所往往會(huì)保留較高的遺傳多樣性和單倍型多樣性， 而單倍型分布能夠反映一個(gè)物種的地理分布格局特征 （Hewitt， 1996， 2000;Petit et al.， 2003）。根據(jù)溯祖理論，分布頻率較高的、位于網(wǎng)狀進(jìn)化樹(shù)中間位置的單倍型可能為較古老的單倍型，而居群特有單倍型可能是通過(guò)近期輻射分化衍生而來(lái)的較年輕的單倍型（Emerson et al.， 2001）。依據(jù)Network分析結(jié)果，異葉澤蘭葉綠體DNA兩個(gè)單倍型H1和H4以及ITS兩個(gè)單倍型H1和H3分布的地理范圍較廣，且位于網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的內(nèi)部位置，可能為古老單倍型（Templeton et al.， 1992; Crandall & Templeton， 1993）。其中，葉綠體DNA單倍型H1和ITS的單倍型H3廣泛分布于甘肅-川西南-滇西北一帶及貴州地區(qū)，而葉綠體DNA單倍型H4和ITS的單倍型H1則分布于云南中部地區(qū)。由此推測(cè)，橫斷山區(qū)南部（川西南-滇西北）和云南中部可能是異葉澤蘭在第四紀(jì)冰期尤其是末次冰盛期（LGM）時(shí)的兩個(gè)避難所所在地。

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（責(zé)任編輯 蔣巧媛）