突變等位基因腫瘤特異性對甲狀腺乳頭狀癌的診斷價值和預(yù)后相關(guān)性分析

李雪平 汪明強 呂金利 馬志勇 王湛鈞

甲狀腺乳頭狀癌(PTC)常發(fā)生于甲狀腺惡性腫瘤患者中，屬于1種高發(fā)型內(nèi)分泌系統(tǒng)腫瘤，而且發(fā)病率呈逐年上升趨勢。相關(guān)報道顯示：甲狀腺乳頭狀癌患者治療后，預(yù)后情況和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的幾率均顯著改善可能與其基因的異質(zhì)性有著很大關(guān)系[1-3]。但是一些高?；颊呷菀壮霈F(xiàn)復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移甚至死亡現(xiàn)象，因此尋找判斷指標(biāo)對甲狀腺癌患者的預(yù)后較差情況進行識別和判斷有著重要臨床價值。當(dāng)前甲狀腺癌分子的標(biāo)志物逐漸進入到臨床研究之中，例如STRN/ALK的基因融合、TERT啟動子突變、PPAR/ PAX8基因融合、PTC/RET基因融合、RAS突變以及BRAF突變等，其中以BRAF突變最為常見，所以單個的基因并沒有辦法對患者的預(yù)后情況進行準(zhǔn)確判斷[4]。因此本文選取我院2017年6月至2020年6月共收治的132例甲狀腺乳頭狀癌患者作為研究對象，分析突變等位基因腫瘤特異性對甲狀腺乳頭狀癌的診斷價值和預(yù)后相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取我院2017年6月至2020年6月共收治的132例甲狀腺乳頭狀癌患者作為研究對象，應(yīng)用突變等位基因腫瘤特異性(mutant-allele tumor heterogeneity，MATH)將患者分為高MATH組和低MATH組，甲狀腺乳頭狀癌患者的MATH在2.57到93.72之間，平均為(29.46±16.21)；因此將MATH≥29.46的患者分為高MATH組，共65例，將MATH<29.46的患者納入低MATH組，共67例。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者臨床資料完整；所有患者均知情并簽署知情同意書；患者通過術(shù)后病理證實為甲狀腺乳頭狀癌。排除標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)中沒有進行臨床清掃；多病找惡性病變患者；術(shù)前經(jīng)受過相關(guān)放化療治療的患者。兩組患者的一般資料對比無明顯差異(P>0.05)，具有可比性，見表1。

表1 一般資料

1.2 方法

①應(yīng)用石蠟切片核酸提取試劑盒和人類BRAF基因突變檢測試劑盒(購自廈門艾德生物醫(yī)藥科技股份有限公司)；ABI7500實時熒光定量PCR儀提取DNA并檢測，具體過程根據(jù)試劑盒說明書進行操作。

②應(yīng)用突變擴增組織系統(tǒng)與熒光PCR技術(shù)來對實驗中DNA樣本出現(xiàn)BRAF基因突變情況進行檢測，針對BRAF基因突變的位點設(shè)計特異突變檢測引物，并對甲狀腺乳頭狀癌基因擴增除突變模板，同時利用FAM標(biāo)記的雙環(huán)探針熒光探針對擴增產(chǎn)物進行實時檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 2組患者臨床病理特征對比分析

對比2組患者臨床病理特征對比無明顯差異(P>0.05)，見表2。

表2 2組患者臨床病理特征對比分析

2.2 2組基因突變不同類型患者臨床病理特征比較

對比2組基因突變不同類型患者臨床病理特征發(fā)現(xiàn)，兩組性別、年齡、腫瘤大小、鈣化情況對比無明顯差異(P>0.05)，淋巴結(jié)節(jié)轉(zhuǎn)移例數(shù)對比差異顯著(P<0.05)，見表3。

表3 2組基因突變不同類型患者臨床病理特征比較

2.3 突變等位基因腫瘤特異性對甲狀腺乳頭狀癌預(yù)后預(yù)測價值

對單因素分析具有統(tǒng)計學(xué)差異指標(biāo)進行賦值：MATH值不是甲狀腺乳頭狀癌患者生存情況的顯著預(yù)測因素(P=0.459)，不同BRAF基因型甲狀腺乳頭狀癌患者的生存情況無顯著差異(P=0.464)，而在突變型和野生型患者中，高MATH患者的生存率顯著低于低MATH患者(P突變型=0.030、P野生型=0.016)，見表4。

表4 突變等位基因腫瘤特異性對甲狀腺乳頭狀癌的預(yù)后的預(yù)測價值

3 討論

腫瘤內(nèi)異質(zhì)性主要指的是在相同的腫瘤之內(nèi)以及特定的原發(fā)腫瘤和其轉(zhuǎn)移之間出現(xiàn)的不同行為特征、表型以及遺傳的癌細(xì)胞亞群[5-6]。這種差異對于惡性腫瘤患者的診斷和治療具有指導(dǎo)意義。相關(guān)報道提出，多病灶類型的甲狀腺乳頭狀癌患者可能會出現(xiàn)特定組織類型的異質(zhì)性，并且可能在分子水平之上，存在瘤內(nèi)特異性[7-8]。伴隨著PTC患者腫瘤的進展，癌細(xì)胞在分裂之后，子代細(xì)胞出現(xiàn)父代細(xì)胞及同代細(xì)胞均可能出現(xiàn)病理學(xué)差異，因此該腫瘤侵襲以及生長指標(biāo)甚至患者預(yù)后均發(fā)生變化。MATH為腫瘤全外顯子測序相關(guān)結(jié)果，可用于ITH程度評估。孫穎等提出，乳腺癌、頭頸部鱗癌的異質(zhì)性程度可作為當(dāng)前臨床上一種有用生物標(biāo)記[9]。MATH是否可用于PTC患者預(yù)后評估，該問題目前尚未見報道。

本研究結(jié)果表明，對比兩組患者臨床病理特征以及BRAF基因型等對比均無明顯差異(P>0.05)；對比兩組基因突變不同類型患者臨床病理特征發(fā)現(xiàn)，兩組淋巴結(jié)節(jié)轉(zhuǎn)移人數(shù)對比差異顯著(P<0.05)，其余指標(biāo)無顯著差異(P>0.05)。當(dāng)前PTC之中常見分子改變?yōu)門ERT、BRAF突變。當(dāng)前研究中顯示，在PTC患者之中BRAF的突變率為40%～60%，而且端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶的突變提升了啟動子活性，并通過維持端粒子的長度導(dǎo)致癌細(xì)胞增殖，出現(xiàn)PTC。相關(guān)研究顯示[10]，分子標(biāo)記物在PTC患者的預(yù)后之中的作用抑制屬于焦點研究內(nèi)容，聯(lián)合多基因突變或者是單基因突變被應(yīng)用多項PTC預(yù)后預(yù)測之中，但是結(jié)果依然存在較大爭議。本研究結(jié)果表明，對單因素分析具有統(tǒng)計學(xué)差異指標(biāo)進行賦值：MATH值不是甲狀腺乳頭狀癌患者生存情況的顯著預(yù)測因素(P=0.459)，BRAF基因型對于甲狀腺乳頭狀癌患者的生存情況無顯著影響(P=0.464)，而突變型和野生型患者中，高MATH患者的生存率顯著低于低MATH患者(P均<0.05)。因此證明，突變等位基因腫瘤特異性可以在BRAF野生型和突變型之中預(yù)測甲狀腺乳頭狀癌患者的預(yù)后情況。相關(guān)研究顯示[11]，PTC的復(fù)發(fā)與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移與TERT的啟動因子突變有著很大關(guān)系，而Moon等[12]研究則認(rèn)為這種突變和臨床特征沒有明顯相關(guān)性，并且不能夠判斷患者的預(yù)后情況。本研究中應(yīng)用的MATH數(shù)字算法是腫瘤內(nèi)異質(zhì)性的直觀測量方法，與單細(xì)胞分析或者腫瘤微切割相比具有明顯優(yōu)勢[13]。

綜上所述，突變等位基因腫瘤特異性可以在BRAF野生型和突變型之中預(yù)測甲狀腺乳頭狀癌患者的預(yù)后情況，具有臨床診斷價值，可以用于臨床治療指導(dǎo)。