口腔鱗狀細(xì)胞癌中IL-17及IL-24表達(dá)水平及臨床意義

艾 敏 高 嵐

口腔鱗狀細(xì)胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)具有生長(zhǎng)迅速、浸潤(rùn)性強(qiáng)、淋巴結(jié)易轉(zhuǎn)移等特點(diǎn)，發(fā)生率占頜面部惡性腫瘤的90.0%及以上，全世界每年新增病例>30萬(wàn)，年死亡數(shù)可達(dá)14.5萬(wàn)例，5年生存率<50.0%[1-2]。故早期發(fā)現(xiàn)OSCC并準(zhǔn)確評(píng)估預(yù)后是當(dāng)前提高患者生存質(zhì)量的關(guān)鍵。目前臨床尚未完全明確OSCC病理機(jī)制，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，免疫細(xì)胞及炎性反應(yīng)作為腫瘤微環(huán)境中重要組成部分，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起著關(guān)鍵作用[3-4]。白細(xì)胞介素(IL)-17為T(mén)h17主要分泌細(xì)胞因子，在炎癥相關(guān)的腫瘤疾病中扮演重要角色，外周血IL-17與OSCC患者臨床病理特征關(guān)系現(xiàn)已得到臨床證實(shí)[5]，但關(guān)于血清IL-17與OSCC預(yù)后關(guān)系仍缺乏相關(guān)報(bào)道。IL-24不僅可誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤血管生成及癌細(xì)胞浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移，還能提高放、化療敏感性，在抑制乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌等多種腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)方面均已得到臨床證實(shí)[6-7]，但其在OSCC中的具體機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究?；诖耍狙芯烤C合探討血清IL-17、IL-24對(duì)OSCC的診斷價(jià)值，以期為臨床個(gè)性化診療提供循證指導(dǎo)。具體分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年5月至2019年5月我院61例OSCC患者作為研究組，另取73例癌前病變患者作為對(duì)照組。2組年齡、性別、吸煙史、飲酒史、基礎(chǔ)疾病史等基本資料均衡可比(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 2組一般資料比較

1.2 選取標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) ①研究組均符合《口腔頜面部惡性腫瘤治療指南》[8]中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)組織病理學(xué)檢查證實(shí)為OSCC；②對(duì)照組經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診為癌前病變；③本研究符合我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū)。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ①處于妊娠期或哺乳期等特殊時(shí)期女性；②合并食管癌、胃癌等其他惡性腫瘤者；③肝腎等重要臟器器質(zhì)性病變者；④既往有口腔手術(shù)史者；⑤先天發(fā)育異常者；⑥精神行為異常者。

1.3 方法

空腹取6 ml肘靜脈血，1000×g離心20 min(離心半徑10 cm)，分離取血清，置于-70 ℃低溫保存。(1)采用酶標(biāo)儀以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清IL-17、IL-24水平，具體操作方法：設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管，各孔中均加入50 μl生物素化抗體工作液，酶標(biāo)板覆膜，37 ℃孵育1.5 h，加樣時(shí)注意減少碰觸酶標(biāo)板底部孔壁，輕晃混勻，防止氣泡產(chǎn)生，加樣時(shí)間≤10 min。甩干孔內(nèi)液體，各孔均加入350 μl洗滌液，浸泡1～2 min，吸去或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)液體，拍干。重復(fù)上述步驟3次。各孔均加入100 μl酶結(jié)合物工作液，蓋上覆膜，37 ℃溫育30 min。棄去孔內(nèi)液體，甩干，重復(fù)洗板步驟后加入90 μl底物溶液，覆膜，37 ℃避光孵育15 min至標(biāo)準(zhǔn)孔產(chǎn)生明顯梯度時(shí)終止。每孔加入50 μl終止液終止反應(yīng)。立刻以酶標(biāo)儀測(cè)量計(jì)算450 nm波長(zhǎng)各孔光密度(OD值)，以濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在雙對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線。(2)采用微粒子化學(xué)發(fā)光儀以化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清Cyfra 21-1、SCCAg水平，儀器購(gòu)自美國(guó)雅培公司，試劑盒購(gòu)自安徽經(jīng)科生物技術(shù)有限公司，嚴(yán)格按照儀器、試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

1.4 觀察指標(biāo)

(1)比較2組血清IL-17、IL-24、Cyfra 21-1、SCCAg水平。(2)比較研究組不同臨床病理特征患者血清IL-17、IL-24水平。(3)分析血清IL-17、IL-24、Cyfra 21-1、SCCAg對(duì)OSCC的診斷價(jià)值。(4)統(tǒng)計(jì)OSCC患者1年生存率。(5)比較不同血清IL-17、IL-24水平OSCC患者1年生存率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 2組血清IL-17、IL-24、Cyfra 21-1、SCCAg水平

研究組血清IL-17、Cyfra 21-1、SCCAg水平高于對(duì)照組，IL-24水平低于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 2組血清IL-17、IL-24、Cyfra 21-1、SCCAg水平

2.2 OSCC血清IL-17、IL-24與臨床病理特征關(guān)系

OSCC不同分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血清IL-17、IL-24水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 OSCC患者血清IL-17、IL-24水平與臨床病理特征關(guān)系

2.3 血清IL-17、IL-24、Cyfra 21-1、SCCAg診斷OSCC價(jià)值

ROC顯示，診斷OSCC價(jià)值的AUC Cyfra 21-1>SCCAg>IL-17>IL-24，當(dāng)Cyfra 21-1 Cut-off值為2.07 ng/ml時(shí)，診斷敏感性及特異性分別為68.85%、84.93%。見(jiàn)表4，圖1。

表4 血清IL-17、IL-24、Cyfra 21-1、SCCAg診斷OSCC價(jià)值

圖1 ROC曲線

2.4 OSCC患者1年生存率

隨訪1年，61例OSCC患者共脫落2例，生存率為84.75%(50/59)，生存曲線見(jiàn)圖2。

圖2 生存曲線

2.5 不同血清IL-17、IL-24水平OSCC患者1年生存率比較

圖3 生存曲線

3 討論

3.1 研究背景

相關(guān)研究指出，OSCC的形成與浸潤(rùn)、炎性刺激及反應(yīng)損傷修復(fù)密切相關(guān)[9]。同時(shí)，多項(xiàng)流行病學(xué)和分子生物學(xué)研究也表示[10-11]，炎癥反應(yīng)可大大提高癌癥發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，而慢性炎癥可誘導(dǎo)組織持續(xù)損傷，改變組織微環(huán)境中存在的炎癥細(xì)胞及細(xì)胞因子，并與腫瘤細(xì)胞遷移、侵襲、增殖有關(guān)。因此，早期評(píng)估OSSC患者免疫炎癥反應(yīng)是目前OSSC臨床研究重點(diǎn)。

3.2 血清IL-17水平在OSCC患者中的表達(dá)及對(duì)預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值

IL-17具有強(qiáng)大促炎作用及誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞功能，其與腫瘤的研究現(xiàn)已成為臨床新熱點(diǎn)?，F(xiàn)有資料表明[12-13]，乳腺癌、原發(fā)性肝癌患者血清IL-17水平過(guò)度升高，并隨病情進(jìn)展而出現(xiàn)明顯變化。而本研究通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)可知，血清IL-17水平在OSCC患者中呈異常高表達(dá)，并隨分化程度、臨床分期增加、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移出現(xiàn)增長(zhǎng)趨勢(shì)，與丁麗娜等[14]研究結(jié)果具有一致性，這可能歸因于以下機(jī)制：①I(mǎi)L-17可誘導(dǎo)纖維細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞分泌促血管生成因子，上調(diào)細(xì)胞間粘附分子表達(dá)，通過(guò)IL-17/血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)通路，刺激轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β等其它促血管生成因子產(chǎn)生，進(jìn)而加快腫瘤新生血管形成[15-16]；②IL-17可刺激腫瘤細(xì)胞及腫瘤微環(huán)境中樹(shù)突狀細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等過(guò)度釋放IL-6，而IL-6反過(guò)來(lái)可激活致癌信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，刺激轉(zhuǎn)錄激活因子3產(chǎn)生，從而進(jìn)一步上調(diào)促生長(zhǎng)因子、促血管生成基因的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)，加快腫瘤轉(zhuǎn)移、分化。初步推斷，血清IL-17在OSCC發(fā)展中起到一定作用。進(jìn)一步經(jīng)ROC曲線分析可知，與血清Cyfra 21-1、SCCAg等常規(guī)腫瘤標(biāo)志物相比，當(dāng)cut-off值設(shè)定為740.72 pg/ml時(shí)，血清IL-17診斷OSCC的特異性可達(dá)75.34%，說(shuō)明血清IL-17對(duì)OSCC早期診斷具有一定價(jià)值，有望成為診斷OSCC的特異指標(biāo)，為臨床診治提供新靶點(diǎn)。另外，本研究還發(fā)現(xiàn)，血清IL-17水平過(guò)度升高可能降低OSCC患者生存率，主要與血清IL-17水平升高干擾正常免疫系統(tǒng)功能，影響治療效果存在一定聯(lián)系，推測(cè)早期予以有效干預(yù)，控制血清IL-17表達(dá)可能為改善OSCC患者預(yù)后提供新途徑，但具體機(jī)制有待今后研究進(jìn)一步深入。

3.3 血清IL-24水平與OSCC患者臨床病理特征的相關(guān)性及對(duì)預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值

IL-24具有廣譜抗瘤活性，可抑制多種腫瘤細(xì)胞體內(nèi)外增殖能力，刺激機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)功能，發(fā)揮雙重抗腫瘤作用[17-18]。本研究通過(guò)對(duì)比表明，OSCC患者血清IL-24水平低于癌前病變患者，與史亦南[19]研究結(jié)果不一致，這可能是由于本研究采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清IL-24，而其則采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)同一患者腫瘤組織。提示血清IL-24作為一種新型抑癌基因，其水平過(guò)度下調(diào)可能參與OSCC的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。進(jìn)一步經(jīng)Spearman相關(guān)性分析，血清IL-24與OSCC患者分化程度存在正相關(guān)關(guān)系，與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在負(fù)相關(guān)關(guān)系，分析機(jī)制在于，血清IL-24水平上調(diào)不僅可抑制腫瘤iNOS表達(dá)，調(diào)控腫瘤細(xì)胞周期，還能抑制IL-6、腫瘤壞死因子-α等炎癥因子表達(dá)，刺激機(jī)體產(chǎn)生抗腫瘤免疫應(yīng)答，反之，血清IL-24水平下降一定程度則會(huì)激活腫瘤基因，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。最后，通過(guò)KM曲線可知，血清IL-24水平升高可能提高OSCC患者1年生存率，機(jī)制可能在于血清IL-24水平高表達(dá)通過(guò)調(diào)控MAPK/ERK、PI3K-AKT、NF-κB、JNK及AP-1等多條信號(hào)通路，可上調(diào)促凋亡蛋白Bax基因的表達(dá)，活化Caspase-3，從而阻斷腫瘤細(xì)胞周期，進(jìn)一步誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，控制腫瘤細(xì)胞增長(zhǎng)。由此可見(jiàn)，早期檢測(cè)血清IL-24水平，有望為OSCC治療、預(yù)后評(píng)估提供理論依據(jù)。

綜上可知，血清IL-17、IL-24水平均在OSCC患者中呈異常表達(dá)，早期檢測(cè)可為臨床OSCC診斷、實(shí)施個(gè)性化治療、評(píng)估預(yù)后提供新思路。