顱內(nèi)膠質(zhì)瘤組織中OPN和Rac1的表達與患者生存期的相關(guān)性

郭合伏 馮志廣 王居峰

顱內(nèi)膠質(zhì)瘤起源于神經(jīng)膠質(zhì)細胞，是神經(jīng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)常見的原發(fā)性惡性腫瘤，其發(fā)病率約占顱內(nèi)惡性腫瘤30%，其中以多形性膠質(zhì)母細胞瘤居多[1-2]。該腫瘤的臨床特征、組織及基因均存在異質(zhì)性，通?；颊哳A后較差，5年生存率低于10%[3]。骨橋蛋白(osteopontin,OPN)是近年來在多種腫瘤患者組織及血清中發(fā)現(xiàn)的分泌型的磷酸化糖蛋白，相關(guān)研究表明：通過上調(diào)OPN的表達可促進膠質(zhì)瘤細胞的增殖和侵襲，表明其參與膠質(zhì)瘤的發(fā)生和進展過程[4-5]。Rac1是重要肌動蛋白骨架調(diào)控蛋白，可誘導肌動蛋白骨架重組并產(chǎn)生片狀偽足，從而促進細胞運動，近年來，研究發(fā)現(xiàn)：Rac1在乳腺癌、結(jié)腸癌及卵巢癌中表達均明顯增高，且其高表達與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，而在膠質(zhì)瘤中，其表達水平隨膠質(zhì)瘤惡性程度增加升高[6]。本研究對顱內(nèi)膠質(zhì)瘤患者組織OPN和Rac1表達情況進行研究，并進一步分析其與患者生存期的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年3月至2019年3月中原油田濮東醫(yī)院收治的60例行膠質(zhì)瘤切除術(shù)的顱內(nèi)膠質(zhì)瘤患者為膠質(zhì)瘤組，其中WHO 1級11例，2級16例，3級26例，4級7例。另隨機選擇同期65例行顱內(nèi)減壓術(shù)的非惡性腫瘤患者為正常對照組。2組患者一般資料見表1，組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，可進行比較。本研究經(jīng)本院倫理學委員會審查，所有患者均知情同意本研究。

表1 患者一般資料

1.2 入選標準

1.2.1 納入標準 ①顱內(nèi)膠質(zhì)瘤組均經(jīng)影像學MRI及病理學檢查確診為顱內(nèi)膠質(zhì)瘤；②均為首次手術(shù)；③未經(jīng)過放化療及免疫治療；④均順利完成手術(shù)并出院。

1.2.2 排除標準 ①合并其他惡性腫瘤患者；②中途退出本研究患者；③具有免疫功能障礙患者；④罹患可能對檢測指標結(jié)果造成影響的疾病患者等。

1.3 方法

1.3.1 OPN和Rac1表達的檢測 取患者膠質(zhì)瘤術(shù)后切除的病灶組織樣本，正常對照組顱內(nèi)減壓術(shù)取術(shù)后切除的部分正常腦組織樣本，研磨為組織勻漿后，采用人OPN和Rac1酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)試劑盒(雙抗體夾心)檢測患者組織中OPN和Rac1的含量，于反應體系中加入準備好的樣品和標準品，37 ℃反應30 min，洗板5次后加入酶標試劑，繼續(xù)37 ℃反應30 min，然后加入顯色液A、B，37 ℃顯色10 min，加入終止液，15 min內(nèi)讀取OD值，計算OPN和Rac1水平。

1.3.2 生存期統(tǒng)計及分組 患者出院后隨訪至2020年4月1日，期間每周通過微信、電話以及上門訪問等方式了解患者預后情況，并對其生存期情況進行統(tǒng)計。然后將60例膠質(zhì)瘤患者根據(jù)生存期長短排序平均分為2組：長期生存組和短期生存組，各30例。

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

2.1 2組患者組織中OPN和Rac1的含量比較

與正常對照組相比，膠質(zhì)瘤組患者組織中OPN含量和Rac1含量均顯著上升，差異具有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。見表2。

表2 2組患者組織中OPN和Rac1的含量比較

2.2 膠質(zhì)瘤患者生存期情況

入選膠質(zhì)瘤患者均順利完成顱內(nèi)膠質(zhì)瘤相關(guān)手術(shù)，隨訪至2020年4月1日，平均隨訪時長(23.17±3.88)個月，患者生存率36.66%(22/60)。見圖1。

圖1 膠質(zhì)瘤患者生存函數(shù)圖

2.3 不同生存期患者組織中OPN和Rac1的含量比較

與長期生存組相比，短期生存組膠質(zhì)瘤患者組織中OPG和RANKL的含量均顯著升高，差異具有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。見表3。

表3 不同生存期患者組織中OPN和Rac1的含量比較

2.4 OPN和Rac1含量與患者生存期的相關(guān)性分析

相關(guān)性分析結(jié)果顯示：膠質(zhì)瘤患者生存期與其組織中OPN和Rac1含量均呈顯著負相關(guān)，即患者膠質(zhì)瘤組織中OPN和Rac1含量均隨其生存期縮短而顯著增加(γ=-0.832、-0.774，P均<0.05)。

3 討論

膠質(zhì)瘤為神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤，目前臨床上其主要治療手段為手術(shù)聯(lián)合放、化療等，但因其侵襲性較強的特點，因此患者治療后復發(fā)率較高[7]。目前該腫瘤發(fā)生、進展的具體機制目前仍未完全明確，相關(guān)內(nèi)容的進一步探討對于該腫瘤患者預后評估及改善具有重要意義[8]。

相關(guān)研究表明：在神經(jīng)膠質(zhì)瘤的發(fā)展過程中，OPN及其他相關(guān)通路蛋白(如：Notch-1)介導血管生成和神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的維持，并在新血管生成邊界的星形膠質(zhì)細胞中占主導地位，但這些分子與膠質(zhì)瘤之間的關(guān)系尚不清楚[9-10]。細胞遷移對于腫瘤轉(zhuǎn)移是必需的，包括Rac1在內(nèi)的小GTP酶的Rho家族的激活在轉(zhuǎn)移級聯(lián)反應的初始步驟中占有重要地位，并且在肌動蛋白細胞骨架重排和細胞遷移中起著重要作用，相關(guān)研究顯示：Rac1可能通過調(diào)節(jié)皮層肌動蛋白進而影響細胞片狀偽足的大小來促進膠質(zhì)瘤細胞的遷移和侵襲，因此抑制Rac1是治療膠質(zhì)瘤的關(guān)鍵所在[6，11-12]。

本研究選擇2016年3月至2019年3月中原油田濮東醫(yī)院收治的60例行膠質(zhì)瘤切除術(shù)的顱內(nèi)膠質(zhì)瘤患者為膠質(zhì)瘤組，另隨機選擇同期65例行顱內(nèi)減壓術(shù)的非惡性腫瘤患者為正常對照組，檢測顱內(nèi)膠質(zhì)瘤患者組織中OPN和Rac1表達，并分析二者水平與患者生存期的相關(guān)性，結(jié)果表明：與正常對照組相比，膠質(zhì)瘤組患者組織中OPN含量和Rac1含量均顯著上升，差異具有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)，表明OPN和Rac1的高表達與膠質(zhì)瘤的發(fā)生密切相關(guān)。本研究中入選膠質(zhì)瘤患者均順利完成顱內(nèi)膠質(zhì)瘤相關(guān)手術(shù)，平均隨訪時長(23.17±3.88)個月，患者生存率為36.66%(22/60)，與相關(guān)研究結(jié)果較為接近[13-14]。

本研究將患者根據(jù)生存期情況進行排序，并均分為2組：長期組和短期組，分析其膠質(zhì)瘤組織勻漿中OPN和Rac1的含量，結(jié)果表明：與長期生存組相比，短期生存組膠質(zhì)瘤患者組織中OPN和Rac1的含量均顯著升高，差異具有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)，相關(guān)性分析結(jié)果顯示：膠質(zhì)瘤患者生存期與其組織中OPN和Rac1 含量均呈顯著負相關(guān)(P均<0.05)。表明：膠質(zhì)瘤患者病灶組織中OPN和Rac1的表達水平與其術(shù)后生存期具有關(guān)聯(lián)性，其表達水平可在一定程度上對患者手術(shù)及治療預后情況進行預測。另外，本研究不足之處在于未對不同病理特征或WHO分級膠質(zhì)瘤患者OPN和Rac1的表達水平進行深入分析，未能進一步明確這兩個指標在膠質(zhì)瘤發(fā)生進展中的具體機制。

總而言之，OPN和Rac1參與顱內(nèi)膠質(zhì)瘤的發(fā)生和進展，并與患者生存期及預后密切相關(guān)，可作為評估患者預后的參考指標。