lincRNA-UFC1在肝細(xì)胞癌組織中表達(dá)的臨床意義

李國濤 朱豫萌 張 盼 張國強(qiáng)

快速增殖原發(fā)性肝細(xì)胞癌的主要生物學(xué)特征之一,是導(dǎo)致患者預(yù)后差的重要原因。研究肝細(xì)胞癌細(xì)胞快速增殖的機(jī)制對改善患者預(yù)后具有重要的臨床意義。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一類不編碼蛋白的RNA，廣泛存在于真核生物中，其作用是調(diào)控基因表達(dá)。了解lncRNA的基因調(diào)控方式，研究疾病發(fā)生機(jī)制，為臨床治療有望提供新的靶點(diǎn)[1-2]。目前l(fā)ncRNA成為研究癌癥發(fā)病機(jī)制的熱點(diǎn)，本文研究肝細(xì)胞癌組織以及肝細(xì)胞癌患者血清中l(wèi)incRNA-UFC1的表達(dá)水平，以期為臨床診斷、指導(dǎo)治療提供參考。

1 材料與方法

1.1 研究對象

2016年1月至2019年1月，選擇在醫(yī)院治療的原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者的68例的石蠟標(biāo)本進(jìn)行研究，其中男性52例，女性16例，年齡43～71歲，平均(54.9±8.1)歲。所有患者均經(jīng)病理證實為肝細(xì)胞癌；Edmondson分級：Ⅰ、Ⅱ級16例，Ⅲ、Ⅳ級52例；BCLC分期：A期48例，B期13例，C期5例，D期2例；手術(shù)治療，術(shù)前未進(jìn)行其他相關(guān)治療。本研究經(jīng)過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會同意。

1.2 檢測方法

應(yīng)用原位雜交的方法檢測68例肝細(xì)胞癌組織以及其相對應(yīng)的癌旁組織中l(wèi)incRNA-UFC1水平的表達(dá)。肝細(xì)胞癌組織脫水、浸蠟、包埋，切片5 μm。石蠟經(jīng)二甲苯、梯度酒精脫蠟水化，切片置入3% H2O2中10 min，滅活內(nèi)源性過氧化物酶，無菌蒸餾水洗滌3次。暴露lncRNA核酸片段，后固定，預(yù)雜交，雜交，洗滌，加封閉液，滴加生物素標(biāo)記的鼠抗地高辛，滴加SABC，滴加生物素化過氧化物酶，DAB顯色，蘇木精染核，梯度酒精脫水，二甲苯透明，封片，顯微鏡下觀察。染色強(qiáng)度判斷：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色；陽性細(xì)胞數(shù)計分：1分為1%～10%，2分為11%～50%，3分為51%～75%，4分為>75%；得分為染色強(qiáng)度積分+陽性細(xì)胞數(shù)積分；得分≥3分為高表達(dá)，<3分為低表達(dá)。

1.3 分析方法

比較癌組織與癌旁組織lincRNA-UFC1表達(dá)水平，比較不同臨床病理參數(shù)患者癌組織中l(wèi)incRNA-UFC1表達(dá)水平。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件。計數(shù)資料用百分比或者例數(shù)表示，用χ2檢驗。P<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 肝細(xì)胞癌組織與癌旁組織中l(wèi)incRNA-UFC1表達(dá)水平比較

癌組織中l(wèi)incRNA-UFC1高表達(dá)率顯著高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 肝細(xì)胞癌組織與癌旁組織中l(wèi)incRNA-UFC1表達(dá)水平比較(例，%)

2.2 不同臨床病理參數(shù)患者肝細(xì)胞癌組織中l(wèi)incRNA-UFC1表達(dá)水平比較

無包膜、AFP>20 ng/ml、有門靜脈癌栓、癌腫直徑>5 cm、BCLC分期B+C+D患者癌組織中l(wèi)incRNA-UFC1高表達(dá)率更高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 不同臨床病理參數(shù)患者肝細(xì)胞癌組織中l(wèi)incRNA-UFC1表達(dá)水平比較(例，%)

3 討論

90%的原發(fā)性肝細(xì)胞癌是肝細(xì)胞肝癌,具有發(fā)病率高、預(yù)后差的特點(diǎn)。長鏈非編碼RNA屬于功能性RNA，轉(zhuǎn)錄長度大于200nt，發(fā)揮調(diào)控基因的作用，參與生理、病理過程。目前發(fā)現(xiàn)的參與哺乳動物基因活動的lncRNA有上千個。最初發(fā)現(xiàn)lncRNA時認(rèn)為其無生物學(xué)功能。但隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)許多l(xiāng)ncRNA有功能，調(diào)控染色體的修飾，轉(zhuǎn)錄激活、干擾等[3-6]。lncRNA調(diào)節(jié)蛋白編碼基因，表達(dá)異常與疾病發(fā)病有關(guān)。許多發(fā)生基因沉默的抑癌基因均可轉(zhuǎn)錄lncRNA，誘導(dǎo)癌癥的發(fā)生[7-10]。

lncRNA與多種疾病相關(guān)，例如癌癥、心臟病、阿爾茨海默病、牛皮鮮、脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)癥、X染色體易損綜合征等[11]。研究顯示過表達(dá)lincRNA-UFC1的癌細(xì)胞增殖能力明顯增強(qiáng)，癌細(xì)胞克隆形成能力明顯增強(qiáng)[12]。過表達(dá)lincRNA-UFC1的肝細(xì)胞癌細(xì)胞皮下瘤的增殖能力增強(qiáng)[13-15]。lincRNA-UFC1過表達(dá)的肝細(xì)胞癌細(xì)胞G0/G1期的比例明顯下降,而S期的比例明顯升高,癌細(xì)胞促細(xì)胞周期進(jìn)展蛋白cyclin D1、CDK4、CDK6表達(dá)增加。過表達(dá)lincRNA-UFC1癌細(xì)胞株凋亡比例降低。lincRNA-UFC1沉默表達(dá)的癌細(xì)胞中促凋亡蛋白水平下降。lincRNA-UFC1結(jié)合RNA結(jié)合蛋白HuR(屬于果蠅胚胎致死異常視覺家族，ELAV)發(fā)揮調(diào)節(jié)β-catenin水平。癌組織中l(wèi)incRNA-UFC1與β-catenin mRNA表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系。癌細(xì)胞株中,lincRNA-UFC1上升與β-catenin表達(dá)水平增加呈正相關(guān)。研究顯示miR-34a與lincRNA-UFC1直接結(jié)合并下調(diào)其表達(dá)。癌組織中l(wèi)incRNA-UFC1與miR-34a表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，miR-34a可以通過縮短lincRNA-UFC1的半衰期來調(diào)控lincRNA-UFC1的表達(dá)水平。本次研究結(jié)果顯示，肝細(xì)胞癌組織中l(wèi)incRNA-UFC1呈高表達(dá)，并且與 Edmondson病理學(xué)分級、是否有包膜、AFP水平、門靜脈血栓、癌腫直徑、BCLC分期有關(guān)。提示lincRNA-UFC1參與了肝細(xì)胞癌的發(fā)生與發(fā)展。曹傳輝[16]研究lincRNA-UFC1在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用以及機(jī)制，結(jié)果顯示其在肝癌組織中呈高表達(dá)，可以作為預(yù)測肝癌患者預(yù)后的1個有價值的分子標(biāo)志物，其通過誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞周期進(jìn)展及抑制肝癌細(xì)胞凋亡促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖，可以與RNA結(jié)合蛋白HuR直接結(jié)合，上調(diào)β-catenin的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖。曹傳輝的研究結(jié)果與本次研究結(jié)果相似。本次研究的不足之處是未能對其作用機(jī)制進(jìn)行分析，期待在今后的工作中，增加文獻(xiàn)閱讀，收集相關(guān)資料，進(jìn)一步分析。

綜上所述，肝細(xì)胞癌組織中l(wèi)incRNA-UFC1高表達(dá)率更高，其高表達(dá)與是否有包膜、AFP水平、是否有門靜脈癌栓、癌腫直徑、BCLC分期有關(guān)。