GLUT-1、VEGF表達(dá)與鼻咽癌發(fā)生發(fā)展及MVD的關(guān)系

張媛媛 陳選英 薛曉會(huì)

臨床上鼻咽癌的發(fā)生，能夠?qū)е禄颊呓诓∏檫M(jìn)展速度的顯著加快，增加了鼻咽癌患者遠(yuǎn)期的病死風(fēng)險(xiǎn)[1-2]。臨床上對(duì)于鼻咽癌的發(fā)生機(jī)理的研究，可以為疾病的診療及預(yù)后隨訪提供參考。葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(GLUT-1)的表達(dá)上升，能夠通過提高葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的激活程度，促進(jìn)癌細(xì)胞對(duì)于ATP的能量利用代謝，最終促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的持續(xù)性自我增殖[3]；血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)是血管內(nèi)皮誘導(dǎo)生長(zhǎng)因子，其對(duì)于腫瘤新生血管的形成促進(jìn)作用，能夠提高腫瘤病灶的血流灌注量，提高腫瘤細(xì)胞的血氧供應(yīng)程度，最終影響腫瘤細(xì)胞的持續(xù)性異常分裂過程[4]。部分研究者探討了VEGF在鼻咽癌患者病灶組織中的表達(dá)情況，認(rèn)為在鼻咽癌患者中，VEGF蛋白的表達(dá)濃度可明顯上升[5]，但缺乏對(duì)于GLUT-1、VEGF的表達(dá)與鼻咽癌患者體內(nèi)微血管密度(MVD)的關(guān)系分析。為了揭露GLUT-1、VEGF的表達(dá)與鼻咽癌患者的病情關(guān)系，從而為臨床上鼻咽癌的診療提供參考，本次研究選取我院病理中心收集的80 例鼻咽癌組織標(biāo)本，探討了GLUT-1、VEGF蛋白的表達(dá)情況。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取我院2017年5月至2019年10月收集的80例鼻咽癌組織標(biāo)本(鼻咽癌組)及其癌旁組織(對(duì)照組)。入選標(biāo)準(zhǔn)：①鼻咽癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的標(biāo)準(zhǔn)[6]；②所有標(biāo)本均為手術(shù)后獲取；③手術(shù)前患者未接受放化療、免疫學(xué)治療、內(nèi)分泌治療；④本研究符合《赫爾透辛基宣言》相關(guān)醫(yī)學(xué)倫理規(guī)定，經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，對(duì)研究對(duì)象的各項(xiàng)資料嚴(yán)格保密。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他部位惡性腫瘤的患者；②未經(jīng)病理學(xué)檢查確診；③資料缺失；④伴有風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病。其中男性60例、女性20例，年齡44～75歲，平均(55.2±9.8)歲；臨床分期：Ⅰ期20例、Ⅱ期25例、Ⅲ期30例、Ⅳ期5例；浸潤(rùn)深度：T1～T2 48例、T3～T4 32例；病灶最大徑≥3 cm 48例、病灶最大徑<3 cm 32例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性43例。

1.2 免疫組化染色技術(shù)

免疫組化結(jié)果判定：GLUT-1蛋白陽(yáng)性染色表達(dá)于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)中，VEGF蛋白陽(yáng)性染色表達(dá)于細(xì)胞膜中，兩種蛋白的陽(yáng)性染色呈黃色、棕黃色、褐色表達(dá)。①依據(jù)染色的程度分為：未染色(0分)、僅僅淡黃色染色(1分)、棕黃色染色(2分)、染色呈褐色、黑色(3分)；②根據(jù)染色的細(xì)胞占比結(jié)果：占比≤10%計(jì)分1分、占比范圍11%～50%計(jì)分2分、占比范圍51%～75%計(jì)分3分、占比>75%計(jì)分4分，染色程度與陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)分之乘積<3分為陰性、≥3分為陽(yáng)性。石蠟切片采用二甲苯進(jìn)行脫臘至水，5%的雙氧水常溫在孵育10 min，采用磷酸鹽緩沖液孵育5 min，蒸餾水沖洗3次，每次5 min，5%的山羊血清抗體封閉10 min，不沖洗，滴加一抗(購(gòu)自abcum公司 批號(hào)：20119304 濃度：1∶500)，4 ℃冰箱孵育過夜，蒸餾水沖洗3次，每次5 min，滴加生物素標(biāo)記好的二抗(購(gòu)自北京康泰生物 批號(hào)：20104856 濃度：1∶1000)，37 ℃孵育30 min，蒸餾水沖洗3次，每次5 min，滴加第二代辣根酶標(biāo)記的工作液體，37 ℃孵育10 min，蒸餾水沖洗3次，每次5 min，顯色之后采用酒精脫水、二甲苯透明、樹膠封片，鏡下觀察。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 鼻咽癌組織與鼻咽正常組織中GLUT-1蛋白、VEGF蛋白表達(dá)差異

鼻咽癌組織中GLUT-1蛋白、VEGF蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為71.25%、62.50%，均顯著高于對(duì)照組標(biāo)本中的30.00%、25.00%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 鼻咽癌組織與鼻咽正常組織中GLUT-1蛋白、VEGF蛋白表達(dá)差異(例，%)

2.2 鼻咽癌組織GLUT-1蛋白、VEGF蛋白表達(dá)與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

鼻咽癌組織中的GLUT-1蛋白、VEGF蛋白陽(yáng)性表達(dá)率在不同臨床分期、不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的組織中比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在不同病灶大小、不同浸潤(rùn)深度的組織中比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2，表3。

表2 GLUT-1蛋白與鼻咽癌病理特征的關(guān)系(例，%)

表3 VEGF蛋白與鼻咽癌病理特征的關(guān)系(例，%)

2.3 不同GLUT-1蛋白、VEGF蛋白表達(dá)的鼻咽癌組織中MVD計(jì)數(shù)比較

GLUT-1蛋白、VEGF蛋白陽(yáng)性表達(dá)鼻咽癌組織中的MVD計(jì)數(shù)均顯著高于陰性表達(dá)的鼻咽癌組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表4，表5。

表4 GLUT-1蛋白陽(yáng)性與陰性表達(dá)組織中MVD計(jì)數(shù)比較

表5 VEGF蛋白陽(yáng)性與陰性表達(dá)組織中MVD計(jì)數(shù)比較

3 討論

長(zhǎng)期吸煙、HPV病毒感染等內(nèi)外環(huán)境誘導(dǎo)的鼻粘膜上皮細(xì)胞的損傷，能夠在異常增殖分裂過程中增加鼻咽癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[7]。臨床上鼻咽癌的發(fā)生總體呈現(xiàn)出了高發(fā)態(tài)勢(shì)和年輕化的發(fā)病趨勢(shì)，長(zhǎng)期的鼻咽癌病情進(jìn)展，能夠?qū)е禄颊哌h(yuǎn)期總體生存時(shí)間的顯著縮短[8]。部分研究者報(bào)道的鼻咽癌的5年內(nèi)病死率可超過15%以上，同時(shí)其5年內(nèi)的復(fù)發(fā)或者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)可超過20%以上[9]。在研究鼻咽癌發(fā)病機(jī)理的過程中，越來(lái)越多的研究關(guān)注到腫瘤蛋白在惡性腫瘤發(fā)生過程中的價(jià)值。雖然有研究探討了上皮非特異性腫瘤標(biāo)志物對(duì)于鼻咽癌病情評(píng)估的非標(biāo)注作用，但依靠普通非特異性腫瘤標(biāo)志物評(píng)估鼻咽癌病情的靈敏度及可靠性均較低[10]。而通過尋找可靠而高靈敏度的腫瘤病情評(píng)估指標(biāo)，能夠在揭露鼻咽癌發(fā)病機(jī)理的同時(shí)，為臨床上鼻咽癌的診療提供臨床方面的參考。

GLUT-1是葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白，其能夠通過運(yùn)載葡萄糖蛋白，提高癌細(xì)胞對(duì)于葡萄糖氧化呼吸鏈的吸收利用速率，最終影響到腫瘤細(xì)胞的增殖過程。GLUT-1對(duì)于葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體結(jié)構(gòu)的調(diào)控作用，能夠影響到腫瘤細(xì)胞膜上受體的激活程度，提高腫瘤細(xì)胞內(nèi)第二信使的上調(diào)水平；VEGF作為生長(zhǎng)因子家族成員，其能夠通過影響到血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷修復(fù)過程，加劇腫瘤新生血管的形成速度，最終參與到惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中[11]。已有的現(xiàn)階段研究主要探討了VEGF對(duì)于鼻咽癌細(xì)胞的生長(zhǎng)影響，認(rèn)為VEGF能夠顯著影響到鼻咽癌細(xì)胞的浸潤(rùn)過程[12]，但缺乏對(duì)于GLUT-1、VEGF的表達(dá)與MVD的關(guān)系分析。

本次研究中免疫組化的相關(guān)探討發(fā)現(xiàn)，在鼻咽癌病灶組織中，GLUT-1、VEGF蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率水平明顯的上升，高于良性病變組，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著，表明GLUT-1、VEGF蛋白的高表達(dá)能夠顯著影響到鼻咽癌的病情進(jìn)展。GLUT-1、VEGF的蛋白高表達(dá)，能夠在癌基因的激活、葡萄糖代謝轉(zhuǎn)運(yùn)、腫瘤血管的重塑化等方面發(fā)揮作用，從而最終影響到鼻咽部惡性腫瘤的發(fā)生。例如有其他研究者也發(fā)現(xiàn)，在發(fā)生了局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，鼻咽癌病灶組織中GLUT-1蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率可上升25%～55%，同時(shí)GLUT-1蛋白的表達(dá)還與鼻咽癌患者遠(yuǎn)期的總體生存時(shí)間有關(guān)[13-14]。在探討GLUT-1、VEGF蛋白的表達(dá)與鼻咽癌患者臨床病理特征的關(guān)系時(shí)，發(fā)現(xiàn)在不同的臨床分期或者是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，GLUT-1、VEGF蛋白的表達(dá)具有顯著的差異，提示了GLUT-1、VEGF蛋白的表達(dá)能夠影響到鼻咽癌患者的臨床病理特征進(jìn)展。GLUT-1對(duì)于鼻咽癌臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響，在于其能夠影響到癌細(xì)胞膜上ATP控制的膜離子通道蛋白的開放程度，提高了腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和粘附能力，最終促進(jìn)了臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生；VEGF的高表達(dá)對(duì)于鼻咽癌臨床病理特征的影響，在于其能夠提高病灶組織細(xì)胞的血流灌注量和血氧水平，從而影響到鼻咽部腫瘤的淋巴結(jié)浸潤(rùn)和侵犯過程[15]。MVD是評(píng)估腫瘤病灶血管形成的相關(guān)指標(biāo)，MVD的過度上升能夠顯著增加遠(yuǎn)期腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)，GLUT-1、VEGF蛋白陽(yáng)性表達(dá)的鼻咽癌組織中的MVD計(jì)數(shù)均明顯上升，提示了GLUT-1、VEGF的表達(dá)還能夠影響到腫瘤血管的分布密度。

綜上所述，鼻咽癌組織中GLUT-1、VEGF蛋白表達(dá)上調(diào)，與腫瘤發(fā)生發(fā)展及微血管形成均具有一定的關(guān)系。但關(guān)于GLUT-1、VEGF蛋白影響MVD表達(dá)的具體機(jī)制仍然需要進(jìn)一步的探討。