醒鼻凝膠滴鼻劑干預(yù)兒童變應(yīng)性鼻炎CD4+CD25+Foxp3+Treg的臨床研究

邱彩霞，艾 斯，莊翔莉，顏水平，劉 文，鄭 健*

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院，福建 福州350004；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建 福州350122）

變應(yīng)性鼻炎（allerigic rhinitis，AR）主要以打噴嚏、鼻塞、流涕、鼻充血為主要臨床表現(xiàn)，在我國(guó)患病率為4%～38%［1］。近年來(lái)，AR的發(fā)病率陡升，這可能與氣候、環(huán)境污染有關(guān)［2］。AR屬于中醫(yī)學(xué)“鼻鼽”“鼽嚏”范疇，口服中藥、傳統(tǒng)鼻內(nèi)噴藥、針灸等中醫(yī)藥治療在臨床廣泛應(yīng)用，并獲得較好的臨床療效［3］。AR最佳治療方式是將藥物直接用于鼻黏膜上，既可以最大限度減少全身作用，又可將藥物集中在鼻部發(fā)揮最大作用，且兒童容易接受。醒鼻凝膠滴鼻劑已在我院用于鼻炎治療十余年，療效顯著。已有研究證實(shí)，CD4+CD25+Foxp3+Treg數(shù)量減少、功能減弱或者呈低反應(yīng)性可能是導(dǎo)致哮喘發(fā)病的重要原因之一［4］。哮喘與鼻炎為同一氣道，同一疾病。由此，本研究通過(guò)檢測(cè)AR患兒CD4+CD25+Foxp3+Treg水平來(lái)觀察其與變應(yīng)性鼻炎的關(guān)系，進(jìn)一步揭示醒鼻凝膠滴鼻劑治療AR的可能作用機(jī)制，為其臨床推廣應(yīng)用提供依據(jù)。

1 臨床資料

1.1 診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照《兒童變應(yīng)性鼻炎診斷和治療指南（2010年，重慶）》［5］中AR的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) ①符合以上診斷標(biāo)準(zhǔn)；②年齡5～12歲；③經(jīng)家長(zhǎng)或監(jiān)護(hù)人同意納入研究并簽署知情同意書(shū)。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) ①合并有其他心血管、肝臟及造血系統(tǒng)等嚴(yán)重疾病或精神患兒；②已接受其他相關(guān)藥物治療。

1.4 一般資料 選取2018年10月—2020年10月于福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院兒科門(mén)診就診的變應(yīng)性鼻炎患兒67例，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組35例和觀察組32例。另選取同一時(shí)間段于健康體檢中心體檢的正常兒童10例。3組性別、年齡和病程比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性，見(jiàn)表1。

表1 3組一般資料比較（±s）

表1 3組一般資料比較（±s）

組別健康組對(duì)照組觀察組例數(shù)103532男5女520181514年齡／歲8.56±0.238.29±0.158.75±0.21病程／年—1.28±0.341.33±0.21

2 方法

2.1 治療方法

2.1.1 對(duì)照組 予布地奈德噴霧劑（上海強(qiáng)生公司）噴霧治療，64μg／噴，每日1噴，每日2次，2周為1個(gè)療程，連續(xù)治療2個(gè)療程。

2.1.2 觀察組 予醒鼻凝膠滴鼻劑（福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院院內(nèi)制劑，閩藥制字Z2011S0006）滴鼻，1滴／次，每日2次，2周為1個(gè)療程，連續(xù)治療2個(gè)療程。

2.1.3 健康組 未予任何干預(yù)。

2.2 檢測(cè)指標(biāo)及方法

2.2.1 CD4+CD25+Foxp3+Treg檢測(cè) 采集3組治療前后肝素鋰抗凝外周血2mL，提取血單核細(xì)胞（PBMC），用200μL PBS重懸并調(diào)節(jié)PBMC濃度為1×107個(gè)／mL，取100μL細(xì)胞懸液，加入20μL CD4-FITC和20μL CD25-APC單克隆抗體，避光反應(yīng)20 min；PBS洗滌后加入2mL固定液，避光反應(yīng)10 min；洗滌棄上清，加入2mL PBS，避光反應(yīng)30 min。重復(fù)洗滌1次，加20μL Foxp3-PE，避光反應(yīng)30 min，加入適量PBS后進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)。試劑盒購(gòu)自美國(guó)BD Pharmingen公司，所有步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)執(zhí)行。

2.2.2 血清IgE檢測(cè) 采集3組治療前后分離膠促凝外周血2mL，室溫靜置30 min后，1800 r／min離心5 min，取上清液進(jìn)行ELISA法檢測(cè)。試劑盒均購(gòu)自美國(guó)R&D公司，所有步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)執(zhí)行。

2.2.3 視覺(jué)模擬量表評(píng)定 視覺(jué)模擬量表是卡尺狀的直觀模擬器，卡尺有10格的橫向刻度，從左端以0開(kāi)始，到右端10結(jié)束?？ǔ咦钭蠖?度表示無(wú)癥狀，很舒服；最右端以10表示，表示癥狀極為痛苦。

2.2.4 癥狀總分評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 參照《附：變應(yīng)性鼻炎診斷標(biāo)準(zhǔn)及療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)（1997年修訂，海口）》［6］中癥狀評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)患兒癥狀、體征進(jìn)行評(píng)分。無(wú)癥狀為0分，輕度為1分，中度為2分，重度為3分。

2.2.5 療效判定標(biāo)準(zhǔn) 參照《附：變應(yīng)性鼻炎診斷標(biāo)準(zhǔn)及療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)（1997年修訂，海口）》［6］擬定。①顯效：癥狀總分減少≥50%；②有效：癥狀總分減少＞20%，＜50%；③無(wú)效：癥狀總分減少≤20%。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)照組與觀察組療效比較 見(jiàn)表2。

表2 對(duì)照組與觀察組療效比較

3.2 對(duì)照組與觀察組治療前后癥狀總分、視覺(jué)模擬量表評(píng)分比較 見(jiàn)表3。

表3 對(duì)照組與觀察組治療前后癥狀總分、視覺(jué)模擬量表評(píng)分比較（±s） 分

表3 對(duì)照組與觀察組治療前后癥狀總分、視覺(jué)模擬量表評(píng)分比較（±s） 分

注：與治療前比較，1）P＜0.05。

視覺(jué)模擬量表評(píng)分7.53±0.984.12±0.771）7.29±0.563.85±0.691）組別對(duì)照組例數(shù)35觀察組32時(shí)間治療前治療后治療前治療后癥狀總分2.18±0.121.68±0.161）2.20±0.141.71±0.181）

3.3 3組治療前后外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg百分率和總IgE水平比較 見(jiàn)表4。

表4 3組治療前后外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg百分率和總IgE水平比較（±s）

表4 3組治療前后外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg百分率和總IgE水平比較（±s）

注：與健康組比較，1）P＜0.05；與治療前比較，2）P＜0.05。

總IgE／（ng／mL）17.88±1.26—356.24±5.231）115.78±2.382）389.12±6.881）127.34±3.562）組別例數(shù)健康組10對(duì)照組35觀察組32時(shí)間治療前治療后治療前治療后治療前治療后CD4+CD25+Foxp3+Treg百分率／%14.32±0.74—5.12±0.681）10.33±0.862）5.44±0.681）12.11±0.452）

4 討論

醒鼻凝膠滴鼻劑是福建名老中醫(yī)的臨床經(jīng)驗(yàn)方，由徐長(zhǎng)卿、蟬蛻、牛黃、冰片組成。君藥徐長(zhǎng)卿，祛風(fēng)化濕、止癢止痛；臣藥蟬蛻，疏風(fēng)清熱，輔助君藥止癢；佐藥牛黃，清熱解毒、通竅化痰；使藥冰片，通竅醒神，發(fā)揮引藥上行之功。AR的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，涉及炎癥、免疫、神經(jīng)、遺傳、環(huán)境等學(xué)說(shuō)，其中大量研究集中在Thl／Th2失衡學(xué)說(shuō)。有研究顯示，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cells，Tregs細(xì)胞）也參與了AR的發(fā)病及Th1／Th2平衡機(jī)制［7］。Tregs細(xì)胞可下調(diào)Thl和Th2細(xì)胞的促炎反應(yīng)，早期就抑制了Th2細(xì)胞的分化，從而降低過(guò)多的Th2細(xì)胞反應(yīng)氣道變應(yīng)性炎癥反應(yīng)［8］。

傳統(tǒng)的Treg以CD4+、CD25+進(jìn)行標(biāo)記，但Treg和效應(yīng)T細(xì)胞有部分重疊，難以區(qū)分。而Foxp3+是Treg的特異性核轉(zhuǎn)錄因子，是Treg譜系發(fā)育、表型和功能的決定基因，高表達(dá)于Treg，可反映Treg的活性水平，被認(rèn)為是Treg的特異性標(biāo)志物［9］。本研究結(jié)果顯示，與健康組比較，對(duì)照組和觀察組治療前鼻炎患兒CD4+CD25+Foxp3+Treg水平明顯降低，IgE明顯升高，這可能與Treg表達(dá)降低引起Th1型細(xì)胞因子分泌減少，Th2型細(xì)胞因子分泌增多，機(jī)體變態(tài)反應(yīng)升高有關(guān)。經(jīng)醒鼻凝膠滴鼻劑及布地奈德噴霧劑干預(yù)后，外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg水平升高，總IgE水平降低，提示該治療可調(diào)節(jié)Th1／Th2平衡，抑制嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞及肥大細(xì)胞的致炎作用，從而直接抑制AR的發(fā)生，明顯改善患兒臨床癥狀。

本研究進(jìn)一步證實(shí)了CD4+CD25+Foxp3+Treg參與AR的發(fā)病過(guò)程，且醒鼻凝膠滴鼻劑可能通過(guò)上調(diào)CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞數(shù)量及降低IgE水平，以調(diào)節(jié)Th1／Th2免疫平衡機(jī)制，從而減輕氣道局部炎癥，為其臨床應(yīng)用提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。