核酸檢測技術(shù)在基層血站血液篩查中的應用效果探討

邱彤

（錦州市全民健康保障中心，遼寧 錦州 121000）

在臨床治療過程中需大量血液，而血液的主要來源為志愿獻血者。因此，保證血液安全具有重要意義。目前，核酸檢測和血清學檢測是臨床血液篩選的主要方法，主要對志愿者是否感染病毒或病原體進行檢測，但病原體的檢測會受窗口期影響，且窗口期還會增加血源質(zhì)量低、健康情況較差的發(fā)生風險，對臨床的治療也會存在不良影響[2]。選取2018年6月至2020年6月于基層血站進行無償獻血的45 520名志愿者作為研究對象，旨在分析核酸檢測技術(shù)在基層血站的應用效果，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選取2018年6月至2020年6月于基層血站進行無償獻血的45 520名志愿者作為研究對象，其中男28 450例，女17 070例；年齡20～55歲，平均（32.75±10.43）歲。

納入標準：①經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附劑測定后未出現(xiàn)任何反應；②符合獻血者健康體檢相關(guān)要求；③經(jīng)過HBV篩查，呈HBsAg陰性；通過試紙條對丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）篩查，通過硫酸銅比重法對志愿者的血紅蛋白進行檢測。排除標準：①配合度較差志愿者；②健康度較差志愿者。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑檢測儀器：全自動酶免檢測儀（奧斯邦，型號：star）；全自動混樣儀（瑞士艾米爾頓，型號：star）。檢測試劑：①乙型肝炎病毒e抗原檢測試劑盒[藍十字生物藥業(yè)（北京）有限公司，國械注準20173401259]；②乙型肝炎病毒e抗體試劑盒[英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司，國械注準20163402559]；③乙型肝炎病毒表面抗體試劑盒[Diagnostic Kit for Antibody to Hepatitis B Surface Antigen（ELISA），國藥準字S10910048]；④乙型肝炎病毒表面抗原確認試劑盒（中和試驗）[珠海麗珠試劑股份有限公司，國食藥監(jiān)械（準）字2013第300094號]；⑤乙型肝炎表面抗原診斷試劑盒（Diagnostic Kit for Hepatitis B Surface Antigen，國藥準字S10910049）；⑥華益美核酸檢測試劑。

1.2.2 檢測抽取周靜脈血，每位志愿者均抽取2管，并在真空采血管中加入5 mL的乙二胺四乙酸進行抗凝處理，其中一管用于核酸檢測，管內(nèi)含有分離膠；另一管用于酶聯(lián)免疫檢測，不含分離膠，采血4 h后，常規(guī)離心5 min，保持溫度為4℃/1 600 g，之后置于5℃的運輸箱，送實驗室離心處理，離心20 min，將標本置于5℃冰箱，血液采集后的72 h內(nèi)完成核酸檢測。

核酸檢測及酶聯(lián)免疫檢測：對志愿者測定2次，采用酶聯(lián)免疫吸附劑檢測血液得到志愿者血液攜帶病原體情況，對于2次檢測未出現(xiàn)任何反應或檢測反應呈陰性的血液標本進行進一步的核酸檢測；抽取志愿者血液樣本160μL，采用全自動混樣儀進行檢測。病毒載量檢測：抽取志愿者血液樣本800μL，采用高精度儀器進行樣本制備，并及時擴增和檢測。通過高精度的檢測儀器自檢，可得到樣本與質(zhì)控品中的HBV-DNA濃度差別。高精度檢測儀器的線性范圍為（20～1.66E+07）IU/mL，若檢測結(jié)果在數(shù)值范圍內(nèi)，說明能直接對HBV-DNA濃度進行計算，若檢測儀器顯示“Tragel Not Delected”等字樣，說明HBV-DNA呈陰性；若HBV-DNA的檢測結(jié)果數(shù)值低于定量下線，說明HBV-DNA濃度≤20 IU/mL；若檢測結(jié)果數(shù)值＞（1.70E+08）IU/mL，為得到準確的HBV-DNA濃度，需將原始血液樣本稀釋后進行二次檢測。補充血清實驗：采用中和法、酶聯(lián)免疫吸附測定法，使用乙型肝炎病毒表面抗體試劑盒（生產(chǎn)批號：2015060612）對e抗體、表面抗體、乙肝e抗原及核心抗體進行再次檢測。上述檢測嚴格按照檢測標準及試劑盒操作說明進行實驗。

1.3 觀察指標分析核酸檢測結(jié)果及HBV-DNA陽性檢測結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計學方法采用SPSS 23.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料百分率（%）表示。

2 結(jié)果

2.1 核酸檢測結(jié)果HBV-DNA呈陽性志愿者共47例，陽性確認率為58.75%，見表1。

表1 核酸檢測結(jié)果

2.2 檢測HBV-DNA陽性志愿者結(jié)果35例HBV-DNA陽性志愿者中有31例HBV感染患者，感染率為88.57%，見表2。

表2 檢測HBV-DNA陽性志愿者結(jié)果（n=35）

3 討論

核酸擴增檢測技術(shù)是實驗室對血液標本進行病原體核酸檢測的重要技術(shù)，主要通過分子技術(shù)進行病原體的檢測與診斷，直接開展檢測，可減少常規(guī)檢查中的復雜程序[3]。目前，我國檢測技術(shù)快速發(fā)展，實時熒光PCR技術(shù)和反轉(zhuǎn)錄介導的擴增技術(shù)是我國核酸檢測的主要技術(shù)，使用高精密儀器提取血液中的核酸，對提取的核酸進行擴增，最后完成對提取核酸的檢測[4]。先擴增再檢測的操作方式能有效提升檢測儀器的敏感性、自動化性。血液樣本中的微量核酸檢測難度較大，而對核酸擴增后，能清晰檢出感染病毒的血液樣本中含有的微量核素，能明顯縮短對病原體檢測的窗口期，對提升陽性確認率具有重要意義[5]。以往臨床研究表明，在進行HBsAg、抗-HCV等檢測時，窗口期較長，分別為45、73、22 d，針對這一問題，有研究[6]指出，進行NAT混合檢測能明顯縮短窗口期。

使用核酸檢測技術(shù)檢測病原體基因組，能盡可能縮短病原體指標檢測的窗口期，不僅提升檢測效率，還避免各種原因?qū)е聶z測出現(xiàn)的誤差（免疫靜默、病毒變異及隱匿性感染等），使血液檢測更加安全，避免血液中病原體的傳播。20世紀90年代末，臨床就開始廣泛應用核酸檢測技術(shù)，隨著技術(shù)的更新和發(fā)展，核酸檢測技術(shù)成為臨床最主要的血液篩查的方法之一[7]。本研究結(jié)果顯示，HBV-DNA呈陽性患者共88例，陽性確認率為0.19%，陽性確認率較高，分析原因為，主要與本地傳染病的流性差異、檢測儀器、檢測試劑操作技巧、檢測時間等有關(guān)；檢測結(jié)果為陽性的患者均為HBV病毒攜帶者，而檢出結(jié)果不是HCV陽性、HIV陽性患者的標本與樣本容量及研究時間等密切相關(guān)。對88例特殊標本開展進一步檢測，結(jié)果顯示，47例標本感染HBV病毒，陽性確認率為58.75%，未確認者33例。分析原因為，不排除相關(guān)操作人員未能根據(jù)檢測標準進行操作；抽取的血液樣本內(nèi)的病毒濃度較低；血液樣本在運送途中未合理保存或保存溫度發(fā)生變化、運輸時間較長等因素導致核酸物質(zhì)出現(xiàn)不同程度的分解[8]。

綜上所述，在基層血站血液篩查中開展核酸檢測技術(shù)，應用效果顯著，血液篩查結(jié)果準確，值得在血液篩查中推廣應用。