微生物送檢標(biāo)本在培養(yǎng)前進(jìn)行涂片鏡檢的意義分析

蔡恒洋，曲軼，王桂煥

（東港市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧 丹東 118300）

急性、慢性下呼吸道感染、社區(qū)獲得性感染及醫(yī)院獲得性感染等疾病均較為常見(jiàn)[1]，隨著臨床抗菌藥物的廣泛使用，疾病抗菌藥物治療的耐藥性明顯增高，為保證患者用藥安全和療效，國(guó)家相關(guān)部門(mén)加強(qiáng)對(duì)抗菌藥物的合理管理，微生物檢驗(yàn)逐漸引起臨床高度重視，其檢驗(yàn)的藥敏結(jié)果可直接作為臨床治療感染性疾病的重要依據(jù)[2]，因此，檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和有效性直接關(guān)系臨床醫(yī)生用藥的有效性和合理性[3]。微生物檢驗(yàn)標(biāo)本質(zhì)量受較多因素影響，如微生物送檢標(biāo)本是否及時(shí)、有效檢出，將直接影響藥敏試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性[4]。如何保證微生物送檢標(biāo)本質(zhì)量，是標(biāo)本進(jìn)行藥敏培養(yǎng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。目前，有效的篩查送檢前不合格標(biāo)本是提高病原菌檢出率的重要途徑。涂片鏡檢通過(guò)送檢標(biāo)本制作薄片，進(jìn)行革蘭氏染色、顯微鏡下觀察微生物形態(tài)，可早期診斷、鑒別細(xì)菌，判斷標(biāo)本是否合格，且準(zhǔn)確鑒定細(xì)菌類(lèi)型，在微生物送檢標(biāo)本培養(yǎng)前使用，可提升微生物標(biāo)本送檢的合格率和準(zhǔn)確率，為臨床醫(yī)師有效用藥和治療提供重要依據(jù)[5]。基于此，本研究選取2019年1月至2019年6月本院采集的417份微生物送檢標(biāo)本作為研究對(duì)象，旨在探究微生物送檢標(biāo)本在培養(yǎng)前進(jìn)行涂片鏡檢的臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料選取2019年1月至2019年6月本院采集的417份微生物送檢標(biāo)本作為研究對(duì)象。

1.2 儀器快速革蘭氏染色液（珠海貝索生物技術(shù)有限公司），法國(guó)梅里埃VT2微生物鑒定系統(tǒng)。

1.3 方法涂片染色鏡檢：使用無(wú)菌棉簽挑取痰液、分泌物及膿液標(biāo)本，提取薄片，取5～8 mL新鮮尿液及其他標(biāo)本置于無(wú)菌試管中，3 000 r/min離心30 min取尿沉渣制作涂片，涂片烘干后，進(jìn)行革蘭氏染色和鏡檢分析。

接種培養(yǎng)：使用一次性定量無(wú)菌接種環(huán)（1μL）挑取標(biāo)本，痰液標(biāo)本分別接種于血平板、巧克力平板、麥康凱平板、科馬嘉平板上，對(duì)涂片檢出菌株者加種沙保羅培養(yǎng)基，于35℃5%二氧化碳孵化箱中培養(yǎng)1～2 d[6]，采用BD公司Crystal微生物分析系統(tǒng)鑒定。

1.4 觀察指標(biāo)合格標(biāo)本[7]及陽(yáng)性結(jié)果判斷[8]，痰液標(biāo)本：鱗狀上皮細(xì)胞≥10個(gè)低倍鏡視野，外觀膿性或血性，白細(xì)胞＜25個(gè)低倍鏡視野表示合格；尿液標(biāo)本：＜10個(gè)油鏡視野，平均每個(gè)視野有＜1個(gè)細(xì)菌者表示標(biāo)本合格；分泌物標(biāo)本：無(wú)菌采集，涂片無(wú)鱗狀上皮細(xì)胞表示標(biāo)本合格。接種培養(yǎng)結(jié)果與涂片鏡檢符合，檢出致病菌與涂片檢出致病菌形態(tài)相符。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用[n（%）]表示，比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 微生物送檢標(biāo)本分布結(jié)果417例標(biāo)本中，痰液標(biāo)本105份，尿液標(biāo)本102份，分泌物標(biāo)本167份，其他標(biāo)本43份，見(jiàn)表1。

表1 微生物送檢標(biāo)本分布結(jié)果Table 1 Distribution results of microbiological specimens submitted for inspection

2.2 標(biāo)本篩查合格率及不同類(lèi)型標(biāo)本陽(yáng)性率比較不合格標(biāo)本27份，不合格率6.47%，合格標(biāo)本390份，合格率為93.53%，不同類(lèi)型標(biāo)本陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表2。

表2 標(biāo)本篩查合格率及不同類(lèi)型標(biāo)本陽(yáng)性率比較Table 2 Specimen screening qualification rate and comparison of positive rates of different types of specimens

2.3 合格標(biāo)本涂片鏡檢與接種培養(yǎng)陽(yáng)性符合率比較390例合格標(biāo)本檢出致病菌株陽(yáng)性101份，占比25.90%，接種培養(yǎng)法檢出致病菌株陽(yáng)性117份。涂片鏡檢的痰液、尿液、分泌物及其他標(biāo)本培養(yǎng)的陽(yáng)性率與接種培養(yǎng)法比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩種培養(yǎng)方法痰液、尿液、分泌物及其他標(biāo)本陽(yáng)性符合率分別為78.79%、87.50%、93.33%、86.67%，見(jiàn)表3。

表3 合格標(biāo)本涂片鏡檢與接種培養(yǎng)陽(yáng)性符合率比較Table 3 Comparison of positive coincidence rate of smear microscopy and inoculation culture of qualified specimens

3 討論

對(duì)呼吸道感染醫(yī)源性感染等疾病患者進(jìn)行痰液培養(yǎng)及藥敏感度試驗(yàn)培養(yǎng)具有重要的臨床意義。痰標(biāo)本培養(yǎng)質(zhì)量關(guān)系細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果的準(zhǔn)確性，而結(jié)果的準(zhǔn)確性可為臨床提供真實(shí)可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)；同時(shí)，有助于臨床評(píng)估患者病情，制定合理的治療方案，避免經(jīng)驗(yàn)性治療或用藥，可顯著減少臨床抗菌藥物濫用，降低抗菌藥物的耐藥性，改善患者疾病治療預(yù)后，節(jié)約有限的醫(yī)藥衛(wèi)生資源[9]。

痰涂片鏡檢可保證標(biāo)本質(zhì)量，提高標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果準(zhǔn)確性。在微生物送檢前對(duì)標(biāo)本進(jìn)行合格篩查，排除不合格標(biāo)本，是細(xì)菌培養(yǎng)的重要依據(jù)。目前，國(guó)內(nèi)大部分醫(yī)院均未進(jìn)行培養(yǎng)前涂片鏡檢篩查，而直接進(jìn)行藥敏或標(biāo)本細(xì)菌培養(yǎng)，易影響結(jié)果的準(zhǔn)確性，臨床濫用抗生素，甚至錯(cuò)誤的藥敏試驗(yàn)結(jié)果將導(dǎo)致細(xì)菌耐藥，疾病誤診或延誤治療病情的最佳時(shí)機(jī)。因此，在微生物送檢前采用統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)化試驗(yàn)，可避免假陰性，提升標(biāo)本檢查結(jié)果的精準(zhǔn)度[10]。

本研究結(jié)果顯示，對(duì)417例微生物標(biāo)本進(jìn)行涂片鏡檢，不合格標(biāo)本27份，合格標(biāo)本390分，合格率93.53%，其中痰液標(biāo)本合格占比29.49%，尿液標(biāo)本31.28%，分泌物標(biāo)本30.77%，其他標(biāo)本8.46%。根據(jù)涂片鏡檢結(jié)果，對(duì)合格標(biāo)本進(jìn)行鏡檢，發(fā)現(xiàn)均符合白細(xì)胞鱗狀上皮細(xì)胞≥10個(gè)低倍鏡視野，白細(xì)胞＜25個(gè)低倍鏡視野，性狀分析發(fā)現(xiàn)外觀膿性或血性，未見(jiàn)唾液或口腔細(xì)菌黏液，培養(yǎng)結(jié)果均為正常菌群；在微生物標(biāo)本涂片鏡檢時(shí)，能及時(shí)排除不合格標(biāo)本，降低采集標(biāo)本的錯(cuò)誤率，提高檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和即時(shí)性，減少培養(yǎng)工作的誤差，降低疾病漏誤診率[11]；同時(shí)，避免標(biāo)本不合格可為臨床診治提供重要、準(zhǔn)確的依據(jù)。對(duì)送檢的微生物標(biāo)本進(jìn)行革蘭氏染色分析，于顯微鏡下能直接觀察微生物是否感染。在顯微鏡下初步篩查，鑒別細(xì)菌類(lèi)型，選擇藥敏性紙片；早診斷、早篩查，判定合格的標(biāo)本，并提示患者是否還需輔助其他項(xiàng)目檢查，有利于細(xì)菌鑒定[12]。

對(duì)390例合格標(biāo)本進(jìn)行分析，進(jìn)一步篩查陽(yáng)性致病菌117份，涂片鏡檢陽(yáng)性101份，不同類(lèi)型微生物標(biāo)本的陽(yáng)性率比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，涂片鏡檢與接種培養(yǎng)痰液、尿液、分泌物及其他標(biāo)本符合率分別為78.79%、87.50%、93.33%、86.67%，均較高。對(duì)部分存在符合率誤差的原因進(jìn)行分析，可能因涂片制作薄片的材料不當(dāng)，無(wú)法真實(shí)反映標(biāo)本的真實(shí)性，或涂片太薄，也對(duì)標(biāo)本真實(shí)性會(huì)產(chǎn)生一定影響。涂片進(jìn)行革蘭氏染色分析，染色后背景為紅色，而陰性桿菌也為紅色，因此，會(huì)增加漏檢或誤檢率[13]。此外，部分細(xì)菌為不動(dòng)桿菌，鏡檢下形態(tài)與革蘭陰性相似，易發(fā)生混淆；此外，不排除標(biāo)本接種造成的污染。為進(jìn)一步提升和保證微生物標(biāo)本檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性，需采集更大的樣本量，盡可能降低誤差率。

綜上所述，涂片鏡檢用于微生物送檢標(biāo)本前篩查，操作便捷，可提升微生物送檢標(biāo)本的合格率，提高標(biāo)本檢出的符合率和陽(yáng)性率，具有重要的推廣價(jià)值。