基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討桑寄生“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨”的作用機(jī)制

李小芬 方镕澤 馮華

【摘 要】 目的：運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法預(yù)測(cè)桑寄生“補(bǔ)肝腎 強(qiáng)筋骨”的作用靶點(diǎn)及相關(guān)信號(hào)通路 為桑寄生傳統(tǒng)功效的闡釋提供參考。方法：利用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析平臺(tái)（TCMSP）數(shù)據(jù)庫(kù)、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)在線數(shù)據(jù)庫(kù)（TCMID）和《中華本草》搜索桑寄生化學(xué)成分 并篩選其活性化學(xué)成分。運(yùn)用TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)和Swiss TargetPrediction數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)活性化學(xué)成分的作用靶點(diǎn)。運(yùn)用GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)和OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)“補(bǔ)肝腎 強(qiáng)筋骨”相關(guān)的疾病靶點(diǎn)。運(yùn)用STRING數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建“藥物-疾病”交集靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò) 并采用cytoscape 3.6.1軟件進(jìn)行可視化分析 篩選核心靶點(diǎn);同時(shí)采用cytoscape 3.6.1 軟件構(gòu)建“活性成分-核心靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)。利用Cytoscape 3.6.1軟件中的ClueGO插件進(jìn)行基因本體 （GO）生物學(xué)過(guò)程和基于京都基因與基因組百科全書 （KEGG）通路富集分析。結(jié)果：篩選得到8個(gè)活性化合物 358個(gè)靶點(diǎn)蛋白 其中RAC-α絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶、表皮生長(zhǎng)因子受體、轉(zhuǎn)錄因子AP-1和雌激素受體等靶點(diǎn)可能是桑寄生“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨”的關(guān)鍵靶點(diǎn)。桑寄生“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨”主要涉及細(xì)胞增殖、代謝過(guò)程、生物合成過(guò)程、炎癥反應(yīng)等生物過(guò)程 通過(guò)調(diào)控甲狀腺激素、破骨細(xì)胞分化、HIF-1、TNF、NF-κB、雌激素、長(zhǎng)壽調(diào)節(jié)途徑和JAK-STAT等信號(hào)通路來(lái)發(fā)揮“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨”作用。結(jié)論：本研究初步揭示了桑寄生傳統(tǒng)功效“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨”的分子作用機(jī)制 體現(xiàn)了桑寄生“多成分-多靶點(diǎn)-多途徑”的作用特點(diǎn) 為進(jìn)一步的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制實(shí)驗(yàn)研究提供了參考依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 桑寄生;活性成分;補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨;網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué);分子機(jī)制

Abstract：Objective To predict the target and related signaling pathways of Taxillus chinensis （DC.） Danser of tonifying liver and kidney， strengthening muscles and bones by using network pharmacology method， and provide reference for the interpretation of the traditional efficacy of Taxillus chinensis （DC.） Danser. Methods The chemical constituents of Taxillus chinensis（DC.）Danser were searched by Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform （TCMSP） database， Traditional Chinese Medicine Integrated Database （TCMID） and Chinese herbal medicine， and their active chemical components were screened. The TCMSP database and the Swiss TargetPrediction database were used to predict the target of active chemical constituents. The GeneCards database and the OMIM database were used to predict the disease targets associated with tonifying liver and kidney， strengthening muscles and bones. The STRING database was used to construct the PPI network of the drug-disease intersection， and the cytoscape 3.6.1 software was used for visual analysis to screen the core targets. The cytoscape 3.6.1 software was used to construct the “active ingredient-core target-disease” network. Gene Ontology （GO） biological process and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes （KEGG） pathway enrichment analysis were performed using the ClueGO plug-in in Cytoscape 3.6.1 software. Results Eight active compounds and 358 target proteins were screened. The target of RAC-α serine/threonine protein kinase， epidermal growth factor receptor， transcription factor AP-1 and estrogen receptor may be Taxillus chinensis （DC.） Danser. The key target of liver and kidney and strong bones. The Taxillus chinensis （DC.） Danser “tonifying liver and kidney， strengthening muscles and bones” mainly involves biological processes such as cell proliferation， metabolic processes， biosynthesis processes， and inflammatory reactions， by regulating thyroid hormone， osteoclast differentiation， HIF-1， TNF， NF-κB， and estrogen. The long-lived regulatory pathway and JAK-STAT and other signaling pathways play a role in “tonifying liver and kidney， strengthening muscles and bones”. Conclusion This study preliminarily reveals the molecular mechanism of the traditional efficacy of Taxillus chinensis （DC.） Danser of tonifying liver and kidney， strengthening muscles and bones， and embodies the characteristics of “multi-component-multi-target-multi-pathway” of Taxillus chinensis （DC.） Danser， which is the basis of further pharmacodynamics and The mechanism of action mechanism provides a reference basis.

Keywords：Taxillus Chinensis （DC.） Danser; Active Ingredient;Tonifying Liver and Kidney;Strengthening Muscles and Bones; Network Pharmacology;Molecular Mechanism

桑寄生為桑寄生科植物桑寄生Taxillus chinensis（DC.）Danser的干燥帶葉莖枝 具有祛風(fēng)濕、補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、安胎元等功效 用于風(fēng)濕痹痛 腰膝酸軟、筋骨無(wú)力、崩漏經(jīng)多、妊娠漏血、胎動(dòng)不安、頭暈?zāi)垦５劝Y[1]。桑寄生始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》 被列為上品 是臨床常用的祛風(fēng)濕藥 而其補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、安胎等作用在臨床上應(yīng)用也非常廣泛 已經(jīng)被歷代的醫(yī)家在實(shí)踐中證實(shí)[2-4]?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn) 古典理論認(rèn)為的“肝藏血”“腎藏精”以及“肝主筋”“腎主骨”與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究能夠完全契合 為臨床運(yùn)用“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨”法則治療筋骨疾病提供了可靠依據(jù)[5]。腎氣旺盛 腎精充足 骨骼則健壯 骨髓生化有源 四肢百骸功能正常;肝血充盛 筋骨得到充沛的濡養(yǎng) 才能強(qiáng)健有力。因此 臨床上補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨是骨質(zhì)病變的主要治法之一[6]。桑寄生主要含黃酮類、生物堿、萜類、多糖、蛋白質(zhì)等化學(xué)成分 其中黃酮類成分為主要活性成分[7-9]。研究[9]發(fā)現(xiàn) 桑寄生水煎液可抑制骨吸收 提高骨質(zhì)量 改善骨代謝的負(fù)平衡狀態(tài) 從而達(dá)到治療骨質(zhì)疏松的作用。體外研究[10]表明 黃酮類物質(zhì)可通過(guò)抑制破骨細(xì)胞分化 促進(jìn)骨形成 起到抗骨質(zhì)疏松的作用。目前 有關(guān)桑寄生“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨”的藥效研究已有報(bào)道[9，11] 但從細(xì)胞及分子水平系統(tǒng)全面的揭示桑寄生以何種途徑發(fā)揮“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨”作用的分子機(jī)制鮮見報(bào)道 亟待進(jìn)一步加強(qiáng)。

傳統(tǒng)中醫(yī)藥（理、法、方、藥）由于缺乏分子生物學(xué)的表征 無(wú)法發(fā)揮其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì) 難以與現(xiàn)代科學(xué)有機(jī)的融合[12]。近年來(lái) 隨著網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的興起 它主要是通過(guò)構(gòu)建和整合“成分-靶標(biāo)-通路-疾病”多層次網(wǎng)絡(luò) 分析特定信號(hào)節(jié)點(diǎn)之間的相互作用關(guān)系 從系統(tǒng)、整體角度探索藥物與機(jī)體相互作用的一門新學(xué)科[13-14]。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)被認(rèn)為是一種提高新藥臨床試驗(yàn)的成功率 節(jié)省藥物研發(fā)費(fèi)用的新方法 尤其有助于闡明多組分和多靶標(biāo)之間潛在的復(fù)雜關(guān)系 而其整體性、系統(tǒng)性的特點(diǎn)更是與中藥“多成分、多途徑、多靶點(diǎn)”協(xié)同作用的特點(diǎn)不謀而合 為中醫(yī)藥復(fù)雜系統(tǒng)的研究提供了新的思路[15-16]。因此 本文采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法 通過(guò)數(shù)據(jù)挖掘、篩選、構(gòu)建桑寄生“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨”作用的“中藥-活性成分-核心靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò) 探討桑寄生“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨”的作用機(jī)制 以期為桑寄生傳統(tǒng)功效作用機(jī)制的闡釋提供參考依據(jù)。技術(shù)路線如圖1所示。

1 方法

1.1 化學(xué)成分的收集 通過(guò)查閱《中華本草》、 中國(guó)知網(wǎng)（CNKI， http：//kns.cnki.net/kns/brief/default_result.aspx）、PubMed數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/）、中醫(yī)藥綜合數(shù)據(jù)庫(kù)TCMID （http：//www.megabionet.org/tcmid/）和中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析平臺(tái)（TCMSP， http：//lsp.nwu. edu.cn/tcmsp.php） 搜索桑寄生所有化學(xué)成分。

1.2 活性成分的篩選 口服生物利用度（oral bioavailability OB） 是評(píng)估藥物能否開發(fā)的關(guān)鍵參數(shù) 也是評(píng)價(jià)中藥臨床療效的有效指標(biāo)。類藥性（ drug likeness DL） 目前被廣泛用于評(píng)價(jià)先導(dǎo)化合物藥物是否有可能成藥的重要依據(jù)。在TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)中認(rèn)為 OB>30%的分子具有較好的口服生物利用度 DL>0.18的分子具有較好的類藥性[17]。將桑寄生所有化學(xué)成分 以ADME（吸收、分布、代謝、排泄）參數(shù)（OB≥30%和 DL≥0.18）或生物活性（文獻(xiàn)已有報(bào)道）為標(biāo)準(zhǔn) 篩選桑寄生的活性化學(xué)成分。然后通過(guò)PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）搜索活性化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)式。

1.3 藥物靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)的建立 通過(guò)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)和Swiss TargetPrediction（http：//www.swissta rgetprediction.ch/）數(shù)據(jù)庫(kù) 檢索桑寄生活性化合物對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn) 建立活性成分靶點(diǎn)數(shù)據(jù)集。通過(guò)人類基因和基因表型綜合數(shù)據(jù)庫(kù)（OMIM http：//www.omim.org/）和GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.genecards.org/）以“Bone weakness”“waist and knee pain”“Liver and kidney deficiency”和“Osteoporosis”為關(guān)鍵詞檢索“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨”相關(guān)的靶點(diǎn) 建立疾病靶點(diǎn)數(shù)據(jù)集。最后將篩選得到的所有靶點(diǎn)均經(jīng)UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.uniprot.org/）查詢轉(zhuǎn)化成UniProt ID格式。

1.4 核心靶點(diǎn)的篩選及網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 將藥物靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)進(jìn)行取交集 存在交集中的靶點(diǎn)即為桑寄生“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨”的預(yù)測(cè)靶點(diǎn)。將其導(dǎo)入String數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//string-db.org/）中構(gòu)建“藥物-疾病”交集靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò) 并采用cytoscape 3.6.1 軟件對(duì)PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行可視化分析 以網(wǎng)絡(luò)中每個(gè)節(jié)點(diǎn)的拓?fù)鋮?shù)“節(jié)點(diǎn)連接度”（Degree）、“節(jié)點(diǎn)介度”（Betweenness centrality）、“節(jié)點(diǎn)緊密度”（Closeness centrality）的中位數(shù)為卡值 選取同時(shí)滿足大于3個(gè)卡值的節(jié)點(diǎn) 作為桑寄生“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨”的核心靶點(diǎn);同時(shí)采用cytoscape 3.6.1 軟件構(gòu)建“中藥-活性成分-核心靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)。

1.5 生物過(guò)程分析 將核心靶點(diǎn)輸入Cytoscape3.6.1軟件的ClueGO插件中進(jìn)行基因本體（GO）生物學(xué)過(guò)程和基于京都基因與基因組百科全書（KEGG）通路富集分析 以 P≤0. 01作為篩選標(biāo)準(zhǔn) 篩選出具有極顯著性差異的生物過(guò)程和信號(hào)通路。

1.6 構(gòu)建桑寄生“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨”作用的通路圖 運(yùn)用KEGG （https：//www.genome.jp/kegg/）數(shù)據(jù)庫(kù)中的KEGG Mapper功能 將核心靶點(diǎn)映射在相關(guān)信號(hào)通路上 揭示桑寄生多靶點(diǎn)、多途徑的治療作用。

2 結(jié)果

2.1 桑寄生活性成分的篩選 從《中華本草》、中國(guó)知網(wǎng)、PubMed數(shù)據(jù)庫(kù)、TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)和TCMID數(shù)據(jù)庫(kù)中得到目前桑寄生已報(bào)道的58個(gè)化學(xué)成分 根據(jù)ADME參數(shù)（OB≥30%和 DL≥0.18）或生物活性（文獻(xiàn)已有報(bào)道）為標(biāo)準(zhǔn) 共篩選得到8個(gè)桑寄生活性化合物 并下載其結(jié)構(gòu)式 結(jié)果見表1。

2.2 桑寄生活性成分靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 將 TCMSP、Swiss TargetPrediction數(shù)據(jù)庫(kù)檢索得到的所有靶點(diǎn) 刪除重復(fù)靶點(diǎn) 最終得到8個(gè)活性成分對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn) 共計(jì)358 結(jié)果見表1。在OMIM和GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)以“Bone weakness”“waist and knee pain”“Liver and kidney deficiency”和“Osteoporosis”為關(guān)鍵詞檢索整合得到1535個(gè)“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨”相關(guān)的疾病靶點(diǎn)。最后將篩選得到的所有靶點(diǎn)均經(jīng)UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)查詢轉(zhuǎn)化成UniProt ID格式。

2.3 桑寄生核心靶點(diǎn)的篩選 將藥物靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)進(jìn)行取交集 得到88個(gè)交集靶點(diǎn) 并繪制韋恩圖 結(jié)果如圖2所示。將交集靶點(diǎn)輸入String數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//string-db.org/）中構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò) 并采用cytoscape 3.6.1 軟件對(duì)PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行可視化分析 得到所有節(jié)點(diǎn)3個(gè)拓?fù)鋮?shù)的中位數(shù)值分別為15（Degree）、0.0042（Betweenness centrality）、0.5119（Closeness centrality） 選取同時(shí)滿足大于3個(gè)拓?fù)鋮?shù)中位數(shù)值的節(jié)點(diǎn) 作為桑寄生“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨”的核心靶點(diǎn) 結(jié)果見表2;同時(shí)采用cytoscape 3.6.1 軟件構(gòu)建“核心靶點(diǎn)”PPI網(wǎng)絡(luò) 結(jié)果如圖3所示。

2.4 桑寄生“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨”核心靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 通過(guò)cytoscape 3.6.1 軟件分別構(gòu)建“中藥-活性成分”網(wǎng)絡(luò)、“活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)、“疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò) 將以上網(wǎng)絡(luò)合并成為一個(gè)網(wǎng)絡(luò) 最終構(gòu)建“中藥-活性成分-核心靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò) 結(jié)果如圖4所示。

2.5 GO生物過(guò)程富集分析 將33個(gè)核心靶點(diǎn)輸入Cytoscape 3.6.1軟件的ClueGO插件中進(jìn)行GO生物過(guò)程富集分析 保留P≤0.01的結(jié)果 進(jìn)行可視化分析 結(jié)果如圖5所示。結(jié)果共富集得到 68個(gè)生物過(guò)程 根據(jù)Term P-value越小 Term可靠性越高的原則 列舉了排名前20的生物過(guò)程 結(jié)果如圖6所示。結(jié)果表明桑寄生“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨”的作用主要可能是通過(guò)調(diào)控膠質(zhì)細(xì)胞分化 活性氧生物合成過(guò)程 對(duì)生長(zhǎng)激素的反應(yīng) 胰島素樣生長(zhǎng)因子受體信號(hào)通路 肽基酪氨酸自磷酸等多個(gè)生物過(guò)程而起到治療功效 體現(xiàn)了中藥多途徑的治療作用。

2.7 桑寄生“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨”作用的通路注釋圖 將33個(gè)核心靶點(diǎn)輸入KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)的KEGG Mapper功能中 標(biāo)注出核心靶點(diǎn)在每條相關(guān)信號(hào)通路中所占的個(gè)數(shù)。結(jié)果顯示有8個(gè)靶點(diǎn)蛋白參與雌激素信號(hào)通路的相關(guān)調(diào)控 揭示桑寄生多靶點(diǎn)、多途徑的治療作用 結(jié)果如圖8所示。

3 討論

桑寄生強(qiáng)筋骨的作用被歷代醫(yī)家所認(rèn)可 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為肝臟是多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝的中樞 也是人體維生素、激素等代謝的場(chǎng)所 這就是中醫(yī)理論所說(shuō)的“肝藏血”。腎臟影響維生素D的形成及控制鈣、磷等元素的代謝 這就是中醫(yī)理論所說(shuō)“腎主骨生髓”的作用。中醫(yī)理論認(rèn)為“肝主筋”“腎主骨”“肝腎同源”與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究能夠完全契合 而其強(qiáng)筋骨作用與補(bǔ)肝腎作用密切相連 是補(bǔ)肝腎作用的體現(xiàn)和應(yīng)用[5，18]。鄭磊等[6]從“肝主筋”“腎主骨”“肝腎同源”3個(gè)方面探討了“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨”的作用機(jī)制 結(jié)果表明其主要與肝臟能量代謝、核酸代謝 腎臟影響維生素D的形成、激素、鈣、磷代謝等生理過(guò)程相關(guān) 為“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨”的現(xiàn)代研究提供了可靠依據(jù)。

本研究預(yù)測(cè)出桑寄生主要有效成分為槲皮苷、槲皮素、沒(méi)食子酸、維生素C、萹蓄甘、β-谷甾醇等 主要為黃酮類成分。研究[19]表明 萹蓄苷、槲皮苷為桑寄生補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨功效的代表性成分。桑寄生中槲皮素可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡 抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和新生血管生成[20] 槲皮苷具有抑制乙酰膽堿酶和蘇氨酸激酶等作用[21]。研究[22]發(fā)現(xiàn)桑寄生葉子中富含豐富的維生素C 維生素C具有強(qiáng)烈的生理活性 參與人體多種代謝 是人體必需的維生素之一 具有解毒和改善肝功能、保持肌膚潤(rùn)滑、清除自由基、保護(hù)心臟及血管、抗腫瘤等作用。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)果表明 AKT1、SRC、EGFR、TNF、JUN、PTGS2、ESR1可能為桑寄生“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨”的潛在靶點(diǎn)。AKT1是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶? 該蛋白參與多種生物學(xué)過(guò)程 包括代謝 增殖 細(xì)胞存活 生長(zhǎng)和血管生成等 均是通過(guò)一系列下游底物的絲氨酸/蘇氨酸磷酸化來(lái)介導(dǎo)的。AKT激活依賴于PI3K途徑 并被認(rèn)為是該途徑中的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)。烏頭湯可改善膝骨關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)軟骨的形態(tài)結(jié)構(gòu) 抑制關(guān)節(jié)軟骨中與炎癥相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活 下調(diào)p38 MAPK、JNK、Ras、ERK、iNOS 蛋白含量表達(dá) 發(fā)揮保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨 延緩膝骨關(guān)節(jié)炎病理進(jìn)程作用[23]。雌激素受體（estrogen receptor ESR1）可延長(zhǎng)破骨細(xì)胞的存活時(shí)間、減少其凋亡 抑制破骨細(xì)胞的活性和分化 最終達(dá)到抑制破骨細(xì)胞的骨吸收 防治骨質(zhì)疏松的作用[24]。

GO生物過(guò)程富集分析 表明桑寄生“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨”作用涉及細(xì)胞增殖、代謝過(guò)程、生物合成過(guò)程、炎癥反應(yīng)等生物過(guò)程 其中膠質(zhì)細(xì)胞分化 活性氧生物合成過(guò)程 對(duì)生長(zhǎng)激素的反應(yīng) 胰島素樣生長(zhǎng)因子受體信號(hào)通路 肽基酪氨酸自磷酸可能為桑寄生“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨”作用的主要進(jìn)程。KEGG通路富集分析 表明桑寄生主要是通過(guò)調(diào)控NF-κB信號(hào)通路 長(zhǎng)壽調(diào)節(jié)途徑 破骨細(xì)胞分化 C型凝集素受體信號(hào)通路 JAK-STAT信號(hào)通路 雌激素信號(hào)通路 催乳素信號(hào)通路 甲狀腺激素信號(hào)通路 PI3K /AKT信號(hào)通路 MAPK 信號(hào)通路發(fā)揮“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨”作用的。在PI3K /AKT 信號(hào)通路中 當(dāng)AKT 及其靶基因激活時(shí) 可促進(jìn)成骨細(xì)胞的分化 小鼠敲除 AKT1 和 AKT2 基因 會(huì)出現(xiàn)明顯的骨量減少癥狀 提示成骨細(xì)胞可能通過(guò) PI3K /AKT信號(hào)通路促進(jìn)骨形成[25]。MAPK 信號(hào)通路是調(diào)控成骨細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的重要途徑 研究[26]表明其主要包括ESR1通路 p38通路和JNK通路。ESR1信號(hào)通路能上調(diào)成骨細(xì)胞中Osterix mRNA的表達(dá) 抑制骨吸收 升高骨密度。

綜上所述 本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法 構(gòu)建“中藥-有效成分-核心靶點(diǎn)-疾病”“靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò) 發(fā)現(xiàn)桑寄生“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨”的作用機(jī)制涉及多個(gè)生物過(guò)程、多條通路 體現(xiàn)了中藥多成分-多靶點(diǎn)-多途徑的作用特點(diǎn)。提示桑寄生“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨” 的作用機(jī)制可能是以上靶點(diǎn)和信號(hào)通路共同作用的結(jié)果。但是具體的結(jié)果仍需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)加以證明。

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（收稿日期：2020-08-18 編輯：陶希睿）