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    高尿酸對小鼠陰莖勃起功能及血清睪酮水平的影響

    2021-06-08 06:02:16楊詩云楊金月和培春李廣裕梁季鴻
    中國臨床新醫(yī)學 2021年5期
    關鍵詞:睪酮陰莖高尿酸

    楊詩云,楊金月,陸 荃,和培春,李廣裕,梁季鴻

    尿酸是嘌呤代謝的最終產(chǎn)物,正常情況下,機體內的尿酸處于一種動態(tài)的平衡狀態(tài),對機體起抗氧化的作用,當尿酸生成增多和(或)排泄減少時,這種動態(tài)平衡就會被打破,機體內血尿酸水平升高[1],形成高尿酸血癥。勃起功能障礙(erectile dysfunction,ED)是由多種因素引起的男科常見疾病,近年來發(fā)病率逐步上升。影響陰莖勃起的因素涉及神經(jīng)、心理、血管功能、陰莖海綿體組織等方面[2]。一氧化氮(nitric oxide,NO)是陰莖勃起中主要的神經(jīng)遞質,NO的減少可能導致ED的發(fā)生。此外,雄激素可通過增強性欲、性喚起等促進陰莖勃起,在維持陰莖勃起組織結構方面起重要作用,雄激素水平低下也可導致ED的發(fā)生[3]。研究[4-5]發(fā)現(xiàn)高尿酸可誘發(fā)男性ED,降低睪酮等性激素水平,導致男性性功能減退。本實驗通過建立高尿酸血癥小鼠模型,探討高尿酸對小鼠陰莖勃起功能、血清睪酮、陰莖組織NO濃度等的影響,并探討其可能的影響機制。

    1 材料與方法

    1.1實驗動物 健康雄性無特定病原體(specific pathogen free,SPF)級昆明(KM)小鼠36只,鼠齡10周,體重36~45 g,由廣西醫(yī)科大學動物實驗中心提供[許可證號:SCXK桂2020-0003]。自由飲水,飼養(yǎng)環(huán)境溫度22~25 ℃。光照條件:白天光照12 h/夜晚避光12 h,交替進行。動物適應性飼養(yǎng)1周,實驗前經(jīng)交配實驗證實小鼠均有正常的性功能,即在昏暗的燈光照明條件下,將雄鼠與發(fā)情雌鼠(由生殖方向實驗課題組提供)合籠,雄性小鼠出現(xiàn)騎跨、插入、抖動等動作,并觀察到陰莖頭及陰莖體露出則認為有正常的性功能。

    1.2試劑及儀器 氧嗪酸鉀(美侖生物),阿樸嗎啡(Sigma公司),尿酸試劑盒(南京建成),小鼠睪酮(T)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(武漢華美),NO測定試劑盒(南京建成),紫外分光光度計(上海元析),微孔板恒溫振蕩器,Thermo酶標儀,Nikon Eclipse Ci-L顯微鏡等。

    1.3高尿酸動物模型的構建 將小鼠稱重后采用配對設計方法隨機分為實驗組和對照組,每組18只。參考楊桂梅等[6]的研究方法建立高尿酸模型。實驗組給予氧嗪酸鉀(1.5 g/kg),溶于0.5%羧甲基纖維素鈉溶液中,按0.1 ml/10 g灌胃,1次/d,共30 d。對照組給予0.9%生理鹽水(0.1 ml/10 g)灌胃,1次/d,共30 d。每組動物自由飲水、普通飲食。實驗過程中兩組各有1只小鼠死亡。

    1.4陰莖勃起功能測定 于藥物干預30 d后參考Heaton等[7]的研究方法進行陰莖勃起功能測定。將小鼠稱重后放入觀察籠,適應環(huán)境10 min,保持室內安靜,燈光調暗至僅夠觀察即可。阿樸嗎啡10 mg+維生素C 50 mg加入到250 ml生理鹽水中,阿樸嗎啡終濃度為40 μg/ml,按100 μg/kg于小鼠頸部皮膚松軟處行皮下注射,注射完畢后立即將小鼠放入觀察籠中觀察30 min,記錄陰莖勃起次數(shù)。以陰莖頭充血及末端陰莖體出現(xiàn)記為陰莖勃起1次。勃起率=有勃起小鼠只數(shù)/總小鼠只數(shù)×100%。

    1.5血清尿酸及睪酮水平測定 灌胃2周后,斷尾取血進行第1次尿酸水平測定。于陰莖勃起功能測定實驗(方法1.4)結束2 d后,配制4%水合氯醛麻醉小鼠,摘眼球采血,采血后室溫靜置1 h,常溫離心10 min(3 000 r/min),取上層血清,按試劑盒檢測方法檢測兩組小鼠血清睪酮及第2次血清尿酸水平。

    1.6陰莖海綿體組織NO水平測定 摘眼球取血后,頸椎脫臼法處死小鼠,切開下腹部取出陰莖組織中后段保存?zhèn)溆谩0凑赵噭┖姓f明書配制相應試劑,取適量陰莖組織(約10 mg),加入冰上預冷的生理鹽水100 μl,手動研磨。將組織勻漿離心10 min,取上清顯色,雙蒸水調零,在波長550 nm下測定各標本的吸光度值。

    1.7睪丸組織蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色 切開小鼠下腹部,順著精索用鑷子拉出一側睪丸,迅速置于4%多聚甲醛溶液中固定,后經(jīng)梯度乙醇脫水,二甲苯透明,石蠟包埋,切片行HE染色,光鏡下觀察小鼠睪丸組織。

    2 結果

    2.1兩組小鼠干預2周末血清尿酸水平比較 在藥物干預2周末,實驗組小鼠血清尿酸水平較對照組升高,差異有統(tǒng)計學意義[(253.52±20.56)mg/L vs(197.72±16.89)mg/L;t=8.647,P=0.000],提示高尿酸小鼠模型構建成功。

    2.2兩組勃起功能比較 在注射阿樸嗎啡后,實驗組小鼠的勃起次數(shù)少于對照組,且勃起率更低,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

    表1 兩組勃起功能比較[M(P25,P75)]

    2.3兩組血清尿酸、睪酮及陰莖組織NO水平比較 在藥物干預30 d后,實驗組血清尿酸水平高于對照組,血清睪酮和陰莖組織NO水平低于對照組,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

    表2 兩組血清尿酸、睪酮及陰莖組織NO水平比較

    2.4兩組睪丸組織切片所見 光鏡下見對照組小鼠睪丸間質細胞成群分布,胞體大,呈梭型或多邊形,細胞核呈圓形,染色質較淡,細胞內脂質含量豐富。實驗組小鼠睪丸間質細胞體積縮小,核固縮,染色質濃集、深染,胞內脂質含量減少。見圖1~2。

    圖1 對照組睪丸組織HE染色所見(×400)圖2 實驗組睪丸組織HE染色所見(×400)

    2.5血清尿酸水平與睪酮及勃起功能的相關性分析結果 Pearson相關性分析結果顯示,兩組小鼠終末血清尿酸水平與睪酮、勃起功能(勃起次數(shù))呈顯著負相關(P<0.05)。見表3。

    表3 血清尿酸水平與睪酮及勃起功能的相關性分析結果

    3 討論

    3.1ED是指陰莖持續(xù)或反復不能達到或維持足夠的勃起以完成滿意的性生活。陰莖勃起是在神經(jīng)、內分泌等多種因素調節(jié)下的一種復雜的活動,該活動需要陰莖海綿體、神經(jīng)、血管、內分泌及心理等因素的密切協(xié)同[8]。NO是陰莖勃起過程中關鍵的神經(jīng)遞質,當性刺激出現(xiàn)時副交感神經(jīng)通路的激活促使海綿狀神經(jīng)和內皮細胞釋放NO[9]。NO可激活胞漿內的可溶性鳥甘酸環(huán)化酶,活化后的鳥甘酸環(huán)化酶催化5-鳥苷三磷酸(guanosine triphosphate,GTP)轉化為環(huán)狀鳥苷單磷酸(cyclic guanosine monophosphate,cGMP),進而激活蛋白激酶G,引起細胞膜上的鈣離子通道開放,鈣離子外流,胞內鈣離子濃度降低,促使平滑肌以及陰莖海綿體平滑肌松弛,白膜下靜脈回流受阻,最終使陰莖勃起。任何引起陰莖海綿體中NO減少的因素都可能導致ED的發(fā)生。另一方面,在性欲的維持上,雄激素扮演著重要角色。雄激素可以誘導性欲和陰莖的自發(fā)勃起,能夠調節(jié)陰莖海綿體中的血液灌注及回流過程。有研究[10]表明,睪酮對維持陰莖勃起的生理和解剖基礎具有重要作用,而性腺功能減退和睪酮水平降低是導致ED發(fā)生的重要因素之一。此外,也有研究發(fā)現(xiàn),高尿酸血癥與高血壓、腎臟疾病、糖尿病、心血管疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關,同時高尿酸血癥也與肥胖、血脂代謝等關系密切[11-12],而ED已經(jīng)證實與心血管疾病、糖尿病、高脂血癥等的發(fā)生具有關聯(lián)。

    3.2尿酸是機體嘌呤代謝的產(chǎn)物,生理濃度下,尿酸是一種抗氧化劑,能清除自由基,抑制活性氧簇引發(fā)的氧化應激損傷,有抗氧化、抗DNA損傷的作用,而高濃度的尿酸則表現(xiàn)為促氧化特性。高尿酸對機體NO的表達水平有著重要的影響。Gersch等[13]研究發(fā)現(xiàn),高尿酸血癥時體內氧自由基增多,促進氧自由基與NO反應增強,從而消耗了大量的NO,導致NO含量下降。高尿酸血癥亦能抑制血管內皮舒張和NO的釋放[14]。夏莉等[15]的研究也發(fā)現(xiàn),高尿酸血癥可以抑制大鼠陰莖海綿體NO的水平。本研究結果表明,實驗組小鼠陰莖組織中NO水平較對照組顯著降低。這說明高尿酸血癥能影響機體NO的表達,降低小鼠陰莖海綿體組織中NO的含量。

    3.3高尿酸與血清睪酮之間也存在著密切關聯(lián)。徐靜嫻[16]通過對比發(fā)現(xiàn),高尿酸血癥組血清總睪酮水平低于正常尿酸組,且尿酸與總睪酮水平呈負相關。本實驗結果表明,相比對照組,實驗組小鼠血清睪酮水平降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。另外,尿酸與睪酮、勃起功能(勃起次數(shù))均呈顯著負相關(P<0.05)。提示高尿酸可引起睪酮水平降低,陰莖勃起功能下降。

    3.4睪丸是合成和分泌雄激素的主要組織,睪丸間質細胞是睪丸組織中合成雄激素的主要細胞[17],人體超過90%的血漿睪酮是由間質細胞貯存和合成的膽固醇生成的[18]。雄激素睪酮可以促進精子的發(fā)生和雄性生殖器官的發(fā)育和成熟,并維持其正常生理功能[19]。本實驗睪丸組織經(jīng)HE染色在光鏡下可見,對照組小鼠睪丸間質細胞成群分布,胞體大,呈梭型或多邊形,細胞核呈圓形,染色質較淡,細胞內脂質含量豐富;而實驗組小鼠睪丸間質細胞體積縮小,核固縮,染色質濃集、深染,胞內脂質含量減少。這與陳錫文[20]和趙茜[21]等在糖尿病對大鼠睪丸間質細胞形態(tài)和功能變化的研究中,糖尿病組睪丸間質細胞的病理改變相似。而這些改變通過電鏡下觀察糖尿病大鼠睪丸間質細胞得到證實,間質細胞內出現(xiàn)線粒體腫脹、變形及滑面內質網(wǎng)數(shù)量的減少,提示間質細胞的結構和功能的損傷。這說明高尿酸血癥和糖尿病都可以通過某些機制影響睪丸間質細胞,使細胞內線粒體等細胞器合成和分泌睪酮的能力受損。此外,高尿酸對于內分泌垂體性腺軸的影響有待進一步研究。

    綜上所述,血清尿酸對陰莖勃起功能及睪酮水平有著重要影響。高尿酸通過降低陰莖組織NO水平及血清睪酮含量影響陰莖的勃起功能,而血清睪酮的水平降低可能與高尿酸導致的睪丸間質細胞損傷相關。

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