敵草快對(duì)斑馬魚組織損傷及慢性肝臟損害作用

沈文靜，張瀟，趙子昂，方再光，謝曦，王蓉，胡文婷*

（1.海南大學(xué)生命科學(xué)與藥學(xué)院，熱帶生物資源教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，?？?570228；2.海南大學(xué)海洋學(xué)院，?？?570228）

農(nóng)藥對(duì)環(huán)境與生物的污染已經(jīng)引起了我國(guó)政府的高度重視，《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》專門針對(duì)化學(xué)農(nóng)藥對(duì)于水體中魚類的毒性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估作出了統(tǒng)一規(guī)范。斑馬魚（Brachydanio rerio）具有發(fā)育快、繁殖周期短、易培養(yǎng)和方便操作等優(yōu)點(diǎn)，因此常用作化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)的魚類模式生物[11]。敵草快對(duì)生物的毒性是由活性氧（ROS）引起的氧化應(yīng)激，肝、腎是哺乳動(dòng)物被損害的主要臟器[1]。肝臟作為魚類重要的代謝器官，具有解毒、免疫等的生理功能，是藥物毒性反應(yīng)的主要靶器官之一；鰓是魚類呼吸的重要器官，也是水體中污染物首先攻擊的靶器官[12]。本研究以斑馬魚為試驗(yàn)材料，研究敵草快對(duì)斑馬魚的鰓和肝臟組織的損傷作用，并通過測(cè)定肝臟超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽-S 轉(zhuǎn)移酶（GST）的活性，以及丙二醛（MDA）和甘油三酯（TG）含量評(píng)估敵草快對(duì)斑馬魚肝臟的損害作用，旨在揭示敵草快對(duì)環(huán)境生物尤其是魚類的毒性作用機(jī)制，為今后深入研究敵草快的水生生態(tài)毒理效應(yīng)以及環(huán)境生物對(duì)敵草快的解毒機(jī)制提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

挑選健康、成熟、平均體長(zhǎng)為（3.5±0.5）cm 的斑馬魚，水溫（25±2）℃，pH 為 6.8～7.8，溶解氧＞6 mg·L-1，室內(nèi)馴養(yǎng) 1 周。

1.1.2 主要試劑

200 g·L-1敵草快水劑，購(gòu)于山東三農(nóng)生物科技有限公司；SOD 測(cè)試盒、GST測(cè)試盒、MDA 測(cè)試盒、TG測(cè)試盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所；總蛋白定量測(cè)試盒購(gòu)于上海碧云天生物技術(shù)有限公司；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 方法

1.2.1 急性毒性和暴露試驗(yàn)

綜合來看，行政事業(yè)單位內(nèi)部控制制度的完善與優(yōu)化具有顯著的現(xiàn)實(shí)意義，本文從內(nèi)部控制環(huán)境、財(cái)務(wù)人員素質(zhì)與法律法規(guī)等各個(gè)方面展開了針對(duì)性研究，結(jié)合人員風(fēng)險(xiǎn)意識(shí)的建立，對(duì)未來的工作進(jìn)行了必要指導(dǎo)與借鑒。隨著未來控制環(huán)境的改變，行政事業(yè)的財(cái)務(wù)管理水平也需要與時(shí)俱進(jìn)，才能在經(jīng)濟(jì)活動(dòng)中更好地發(fā)揮引導(dǎo)作用，保障企業(yè)未來的可持續(xù)發(fā)展。

根據(jù)預(yù)試驗(yàn)，確定在敵草快中暴露96 h 的最高LC0為 3 mg·L-1，24 h 最低 LC100為 40 mg·L-1。按等對(duì)數(shù)間距法，設(shè)定各組的敵草快濃度分別為39.09、20.58、10.83、5.17、3.00 mg·L-1，并設(shè)置空白對(duì)照組，每組3 個(gè)重復(fù)，隨機(jī)選取10 尾斑馬魚放入3 L 試驗(yàn)用液中。采用靜態(tài)試驗(yàn)法，試驗(yàn)前24 h 停止喂食，試驗(yàn)期間禁食，記錄各試驗(yàn)組中斑馬魚的臨床癥狀以及死亡情況，并及時(shí)撈出死魚。統(tǒng)計(jì) 24、48、72 h 和 96 h 的斑馬魚存活數(shù)量，利用Probit 模型計(jì)算得到半致死濃度（LC50）和安全質(zhì)量濃度（SC）。以96 h LC50的1/2、1/4、1/10 設(shè)置敵草快處理組，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照組，每組10 尾斑馬魚，方法同上。96 h 后從每組存活的斑馬魚中隨機(jī)取3尾，解剖收集鰓、肝臟組織。

1.2.2 慢性暴露試驗(yàn)

分別以96 h LC50的1/10、1/20、1/50作為敵草快暴露濃度，并設(shè)置空白對(duì)照，各組養(yǎng)殖30 尾斑馬魚作為試驗(yàn)魚放入20 L 試驗(yàn)用液中，采用半靜態(tài)試驗(yàn)法，每24 h更換1/3的試驗(yàn)用液，試驗(yàn)期間每日喂食兩次，投食總質(zhì)量不超過魚體總質(zhì)量的3%。分別在7、14 d和28 d 取8 尾斑馬魚的肝臟組織，漂洗后用濾紙拭干，按魚組織質(zhì)量（g）：生理鹽水（mL）為1∶9 加入預(yù)冷的生理鹽水進(jìn)行勻漿，在4 ℃、2 500 r·min-1條件下離心10 min，取上清液備用。

1.2.3 組織切片與觀察

組織塊用4%多聚甲醛固定48 h，經(jīng)過梯度乙醇脫水、二甲苯透明后，用石蠟包埋、切片，蘇木精-伊紅染色，樹脂封片，顯微鏡觀察、拍照。

1.2.4 肝臟酶學(xué)和生化指標(biāo)檢測(cè)

采用上海碧云天生物的BCA 蛋白濃度試劑盒測(cè)定總蛋白含量。SOD、MDA、GST、TG的測(cè)定采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒，WST-1 法測(cè)定SOD 活性，比色法測(cè)定 GST 活性，TBA 法測(cè)定 MDA 含量，GPO-PAP法測(cè)定TG的含量。

1.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

所得數(shù)據(jù)用Excel 2007處理作圖，采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行單因素方差分析（One-Way ANOVA）。

2 結(jié)果與分析

2.1 敵草快對(duì)斑馬魚的急性毒性

暴露于39.09、20.58 mg·L-1敵草快中的斑馬魚最初出現(xiàn)無規(guī)則快速游動(dòng)，隨后部分試魚長(zhǎng)時(shí)間浮于水表面，口舒張，鰓部擴(kuò)張、體色變深，隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，魚體出現(xiàn)失衡、側(cè)翻游動(dòng)，最終喪失游動(dòng)能力；暴露于10.83、5.17 mg·L-1敵草快中的斑馬魚最初出現(xiàn)快速泳動(dòng)現(xiàn)象，后期未出現(xiàn)其他明顯癥狀；暴露于3.00 mg·L-1敵草快中的斑馬魚在處理過程中未出現(xiàn)明顯的不良癥狀。中毒死亡個(gè)體體色發(fā)暗、胸鰭張開、鰓絲暗紅、體表有黏液。利用SPSS 19.0軟件中的Probit 模型統(tǒng)計(jì)得到敵草快對(duì)斑馬魚24、48、72、96 h的LC50分別為27.85、21.36、17.95、16.92 mg·L-1，敵草快安全質(zhì)量濃度為1.69 mg·L-（1SC=96 h LC50×0.1）。

2.2 敵草快對(duì)斑馬魚鰓和肝臟的形態(tài)損傷

斑馬魚暴露于8.46、4.23 mg·L-1和1.69 mg·L-1濃度敵草快中96 h后，分別取空白對(duì)照組和各處理組斑馬魚的鰓和肝臟組織進(jìn)行切片分析。

鰓組織切片觀察結(jié)果顯示（圖1、表1）：空白對(duì)照組斑馬魚鰓的組織結(jié)構(gòu)完整，呼吸上皮細(xì)胞排列整齊、規(guī)則，緊貼在鰓小片表面（圖1A）；在1.69 mg·L-1的敵草快溶液中暴露96 h后，斑馬魚鰓組織中的鰓小片呼吸上皮細(xì)胞發(fā)生水腫浮離，排列不規(guī)則，并且出現(xiàn)部分脫落（圖1B）；在4.23 mg·L-1的敵草快中暴露后，鰓小片上皮細(xì)胞腫脹、大量脫落或黏滯于鰓小片間，鰓小片末端膨大，損傷加重（圖1C）；8.46 mg·L-1的敵草快暴露則造成了鰓小片卷曲、萎縮，鰓絲組織細(xì)胞解離、空泡化，基部細(xì)胞增生，呼吸上皮與毛細(xì)血管分離嚴(yán)重，形成空腔（圖1D）。

肝組織切片觀察結(jié)果顯示（圖2、表2）：空白對(duì)照組斑馬魚肝細(xì)胞分布均勻，連接緊密呈網(wǎng)狀，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞邊界清晰，細(xì)胞核圓且位于中央（圖2A）；當(dāng)斑馬魚暴露在1.69 mg·L-1敵草快水溶液中96 h 后，肝臟部分細(xì)胞核偏移，細(xì)胞腫大，出現(xiàn)空泡（圖2B）；暴露在4.23 mg·L-1敵草快中的斑馬魚其肝細(xì)胞腫脹，部分肝細(xì)胞破裂，細(xì)胞輪廓不清晰，核仁模糊或解體（圖2C）；暴露在8.46 mg·L-1的敵草快96 h 后，斑馬魚肝臟組織結(jié)構(gòu)紊亂，肝細(xì)胞嚴(yán)重變形，出現(xiàn)大量無核肝細(xì)胞，炎性反應(yīng)明顯，伴有細(xì)胞壞死、溶解現(xiàn)象（圖2D）。

2.3 敵草快對(duì)肝臟SOD活性的影響

斑馬魚在1.69、0.84、0.34 mg·L-1的敵草快中暴露后，各處理組肝臟的SOD 活性呈現(xiàn)降-升-降的趨勢(shì)（圖3）。暴露7 d，各處理組斑馬魚肝臟的SOD 活性降低，且隨敵草快濃度的增大，活性下降更明顯，其中濃度為0.84 mg·L-1和1.69 mg·L-1處理組與空白對(duì)照組存在極顯著差異（P＜0.01）；暴露14 d，各處理組斑馬魚肝臟的SOD 活性升高，其中濃度為0.34 mg·L-1和0.84 mg·L-1處理組的SOD 活性與空白對(duì)照組相比存在顯著差異（P＜0.05），濃度為1.69 mg·L-1處理組與空白對(duì)照組存在極顯著差異（P＜0.01）；暴露28 d 時(shí)，各處理組斑馬魚肝臟的SOD 活性下降，與空白對(duì)照組之間均無顯著差異（P＞0.05）。

2.4 敵草快對(duì)肝臟GST活性的影響

敵草快對(duì)斑馬魚肝臟的GST 活性影響如圖4 所示。在敵草快28 d 的持續(xù)暴露過程中，濃度為0.84 mg·L-1和 1.69 mg·L-1處理組斑馬魚肝臟的 GST 活性在第7 d 出現(xiàn)增強(qiáng)，7～28 d 的暴露過程中活性持續(xù)降低；暴露28 d 后，濃度為0.84 mg·L-1處理組斑馬魚肝臟GST 活性顯著低于空白對(duì)照組（P＜0.05），濃度為1.69 mg·L-1處理組極顯著低于空白對(duì)照組（P＜0.01）。濃度為0.34 mg·L-1處理組斑馬魚肝臟的GST 在暴露過程中活性變化不顯著（P＞0.05）。

2.5 敵草快對(duì)肝臟MDA含量的影響

敵草快對(duì)斑馬魚肝臟MDA 含量影響如圖5 所示。暴露7 d，各處理組斑馬魚肝臟MDA 含量與空白對(duì)照組相比無明顯變化；暴露14 d，各處理組斑馬魚肝臟MDA 含量均受到敵草快暴露的輕微誘導(dǎo)，但與空白對(duì)照組無顯著性差異（P＞0.05）；暴露28 d，濃度為 0.84 mg·L-1和 1.69 mg·L-1的處理組 MDA 含量與空白對(duì)照組相比極顯著升高（P＜0.01）。

表1 急性敵草快脅迫對(duì)斑馬魚鰓組織結(jié)構(gòu)的影響Table 1 Acute effect of diquat exposure on histopathology of gill in zebrafish

表2 急性敵草快脅迫對(duì)斑馬魚肝組織結(jié)構(gòu)的影響Table 2 Acute effect of diquat exposure on histopathology of liver in zebrafish

2.6 敵草快對(duì)肝臟TG含量的影響

敵草快對(duì)斑馬魚肝臟TG 含量的影響見圖6。暴露7 d，各處理組斑馬魚肝臟TG 未表現(xiàn)出明顯的改變，暴露14 d，各處理組斑馬魚肝臟TG 與空白對(duì)照組相比均出現(xiàn)上升，濃度為0.34 mg·L-1和0.84 mg·L-1的處理組與空白對(duì)照組之間有顯著性差異（P＜0.05），暴露28 d，各處理組斑馬魚肝臟TG 含量仍高于對(duì)照組，濃度為0.84 mg·L-1和1.69 mg·L-1的處理組顯著大于空白對(duì)照組（P＜0.05），濃度為0.34 mg·L-1的處理組與空白對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05）。

3 討論

3.1 敵草快對(duì)斑馬魚的急性毒性效應(yīng)

半致死濃度通?？梢苑从澄镔|(zhì)的毒性程度，常被作為急性毒性試驗(yàn)的重要檢測(cè)指標(biāo)[13]。本研究的結(jié)果發(fā)現(xiàn)敵草快對(duì)斑馬魚96 h LC50為16.92 mg·L-1，與成云峰等[14]的研究結(jié)果基本一致（96 h LC50=17.5 mg·L-1）。根據(jù)化學(xué)物質(zhì)對(duì)魚類急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[13]，敵草快對(duì)斑馬魚的毒性分級(jí)屬于中等毒性。敵草快對(duì)魚類的急性毒性較高，毒性的差異與魚類的種類、所處發(fā)育階段、代謝能力有密切關(guān)系，斑馬魚對(duì)敵草快的耐受力略高于肖龍等[10]報(bào)道的中華鳑鲏?mèng)~（Rhodeus sinensisGünther）對(duì)敵草快的耐受力。

3.2 敵草快對(duì)斑馬魚鰓和肝組織結(jié)構(gòu)的急性損傷作用

急性損傷試驗(yàn)可以為敵草快脅迫的應(yīng)激反應(yīng)評(píng)估提供依據(jù)，選擇的敵草快最高劑量濃度為96 h LC50的1/2，在試驗(yàn)過程中2 尾斑馬魚死亡，該濃度的敵草快可以對(duì)斑馬魚造成明顯的毒性作用；最低劑量濃度為急性毒性試驗(yàn)得到的安全濃度1.69 mg·L-1[15-16]，該濃度接近敵草快的田間施用濃度[17]。

鰓是魚類進(jìn)行氣體交換的器官，在排氨和參與滲透壓調(diào)節(jié)、維持離子穩(wěn)態(tài)中有重要作用，其組織結(jié)構(gòu)易遭受水環(huán)境中污染物的破壞[18]。有研究表明，輕度的呼吸上皮水腫和細(xì)胞增生在不破壞鰓正常功能的情況下，可以阻擋外界污染物進(jìn)入內(nèi)部組織，避免造成進(jìn)一步的損傷[18]。本研究發(fā)現(xiàn)：低濃度的敵草快處理，斑馬魚鰓小片呼吸上皮出現(xiàn)水腫浮離、細(xì)胞增生，表明低濃度條件下，會(huì)誘導(dǎo)斑馬魚出現(xiàn)應(yīng)激防御反應(yīng)；隨著敵草快濃度的增加，斑馬魚鰓組織結(jié)構(gòu)損傷加重，鰓小片呼吸上皮細(xì)胞出現(xiàn)壞死、脫落、毛細(xì)血管擴(kuò)張、破裂、空泡化和空腔等嚴(yán)重的損傷現(xiàn)象，與百草枯對(duì)大蓋巨脂鯉（Colossoma macropomum）和藍(lán)線鰭魚（Trichogaster trichopterus）鰓組織的損傷結(jié)果相一致[19-20]。作為百草枯的同類除草劑，敵草快進(jìn)入呼吸上皮細(xì)胞和毛細(xì)血管壁細(xì)胞，在細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生大量的活性氧自由基，導(dǎo)致產(chǎn)生防御反應(yīng)，阻礙鰓細(xì)胞的正常氣體交換，隨著濃度的增加，防御平衡被打破，組織結(jié)構(gòu)被破壞，嚴(yán)重影響鰓的正常生理功能，引起魚類死亡。

對(duì)哺乳動(dòng)物的研究表明，百草枯主要導(dǎo)致肺損傷和肺組織纖維化，而敵草快主要損害的臟器是肝和腎，其肝臟代謝產(chǎn)物的毒性進(jìn)一步增強(qiáng)[1，21]。肝臟是魚類解毒的主要器官，魚類在污染的水體中肝臟組織會(huì)發(fā)生結(jié)構(gòu)和生理變化[22]。已有研究發(fā)現(xiàn)，有毒物質(zhì)會(huì)引起魚類肝細(xì)胞線粒體腫脹，活性氧自由基增加，導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化，破壞細(xì)胞膜系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能，使細(xì)胞出現(xiàn)空泡化[23]。本研究中，短時(shí)間暴露在低濃度敵草快中的斑馬魚肝細(xì)胞出現(xiàn)腫大和空泡化，表明敵草快誘導(dǎo)肝臟產(chǎn)生了氧化應(yīng)激，肝功能可能受到了影響；當(dāng)敵草快濃度增加時(shí)，肝臟組織損傷更明顯，空泡化嚴(yán)重、細(xì)胞界限模糊，并引起肝細(xì)胞溶解，說明細(xì)胞膜系統(tǒng)遭受了破壞，肝功能已經(jīng)受到了影響，肝組織細(xì)胞變形、核仁消失的現(xiàn)象也是細(xì)胞壞死的先兆；最終當(dāng)敵草快達(dá)到一定濃度時(shí)，肝細(xì)胞出現(xiàn)明顯的壞死現(xiàn)象，使肝臟失去正常功能，導(dǎo)致魚類死亡[18]。

3.3 敵草快對(duì)斑馬魚肝臟的慢性損害

肝臟是脊椎動(dòng)物體內(nèi)最大的腺體，對(duì)糖類代謝、脂類代謝、解毒等生命活動(dòng)起著非常重要的作用。魚類的肝臟和哺乳動(dòng)物肝臟一樣，是魚類物質(zhì)代謝以及解毒的重要場(chǎng)所。由于魚類自身?xiàng)⒌沫h(huán)境相對(duì)其他動(dòng)物更為獨(dú)特，環(huán)境水體中有毒有害物質(zhì)更容易使肝臟遭受損傷，從而影響其正常的生理與代謝功能。隨著人類生產(chǎn)生活中除草劑的普遍使用，越來越多的研究證明除草劑類有毒物質(zhì)已經(jīng)嚴(yán)重威脅到環(huán)境生物尤其是水生魚類的健康與安全，且對(duì)魚類的肝臟產(chǎn)生直接毒害作用。肝細(xì)胞SOD 和GST 的活性以及MDA 和TG 的含量，是評(píng)估肝臟在有毒環(huán)境條件下受損傷程度的重要指標(biāo)[24-25]。為了研究長(zhǎng)期接觸敵草快對(duì)斑馬魚肝臟的損害作用，本研究選擇96 h LC50的1/10、1/20 和1/50 作為暴露濃度，考察了以上指標(biāo)的變化，敵草快最低劑量濃度為0.34 mg·L-1，相當(dāng)于農(nóng)田中噴灑敵草快后的環(huán)境濃度[17]。

氧化應(yīng)激是敵草快對(duì)人類和其他哺乳動(dòng)物肝臟功能損傷與毒性作用的基礎(chǔ)，敵草快通過誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)引起肝細(xì)胞抗氧化酶活力的改變，損傷程度取決于暴露時(shí)間和濃度[26]。已有研究報(bào)道，敵草快可誘導(dǎo)斑馬魚胚胎氧化應(yīng)激產(chǎn)生過量的超氧陰離子等活性氧自由基[21]。當(dāng)體內(nèi)活性氧自由基超過抗氧化體系的清除能力時(shí)，會(huì)對(duì)肝臟細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用，影響抗氧化酶活性。SOD 具有清除超氧陰離子能力，是維持機(jī)體內(nèi)活性氧動(dòng)態(tài)平衡的重要抗氧化酶，其活力直接反映了機(jī)體清除氧自由基的能力[27]。本研究發(fā)現(xiàn)，敵草快處理14 d 時(shí)，肝細(xì)胞中SOD 活性增加，表明低濃度的超氧陰離子會(huì)誘導(dǎo)該酶的活性，但隨著體內(nèi)超氧陰離子的積累，并達(dá)到肝組織損傷的閾值時(shí)，會(huì)破壞肝臟的抗氧化防御系統(tǒng)。因此，敵草快處理28 d 時(shí)，該酶的活性出現(xiàn)下降，表明肝臟抗氧化系統(tǒng)的功能受到了影響。

GST 具有抗氧化酶和Ⅱ相代謝酶的雙重功能，催化還原性谷胱甘肽與內(nèi)源性和外源性親電子化學(xué)物反應(yīng)，不僅可以與其他抗氧化酶在細(xì)胞內(nèi)共同起到緩解氧化應(yīng)激的作用，而且可以幫助細(xì)胞解毒[28]。另外，當(dāng)肝細(xì)胞受損害時(shí)，GST 易于通過肝細(xì)胞膜而被釋放到血液中，是檢測(cè)肝臟受損的敏感性指標(biāo)[29]。在高濃度敵草快處理初期，斑馬魚肝組織中GST活性被誘導(dǎo)，可能是該酶表現(xiàn)出的應(yīng)激反應(yīng)，以幫助機(jī)體緩解敵草快的毒性作用。Sanchez 等[30]的研究表明，222 μg·L-1和 444 μg·L-1的敵草快誘導(dǎo)也同樣使三刺魚（Gasterosteus aculeatus）肝臟中GST 的活性增加。隨著細(xì)胞內(nèi)活性氧和有毒物質(zhì)的累積，GST的活性出現(xiàn)下降，并隨時(shí)間延長(zhǎng)持續(xù)降低，提示敵草快長(zhǎng)期脅迫造成了肝臟氧化還原失衡、解毒能力降低，并且肝細(xì)胞可能受到了損害。

MDA 是體內(nèi)脂質(zhì)過氧化作用的標(biāo)志性產(chǎn)物，也被認(rèn)為是自由基誘導(dǎo)生物膜脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的直接產(chǎn)物，其含量的變化可間接反映生物受自由基攻擊后膜系統(tǒng)的氧化損傷程度[31]。暴露在聯(lián)苯菊酯、甲氰菊酯等農(nóng)藥中的魚類，其肝臟組織中MDA 含量顯著增加[32-33]。本研究發(fā)現(xiàn)，敵草快處理28 d 時(shí)，斑馬魚肝細(xì)胞中MDA 含量極顯著增加。表明敵草快引起斑馬魚肝細(xì)胞內(nèi)自由基增多，肝脂質(zhì)過氧化水平升高，這可能是造成細(xì)胞膜通透性改變、細(xì)胞輪廓模糊的原因之一。

肝是機(jī)體TG 代謝的主要器官，與脂肪組織共同調(diào)控能量代謝。一些有毒物質(zhì)造成動(dòng)物肝損傷，引發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致脂質(zhì)代謝異常和肝細(xì)胞內(nèi)TG 增加[22，34]。本研究發(fā)現(xiàn)，暴露在較高濃度敵草快中的斑馬魚肝臟中的TG 含量上升，斑馬魚肝臟脂質(zhì)代謝受到影響。敵草快暴露造成斑馬魚肝臟細(xì)胞的空泡化，活性氧自由基增加導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化破壞細(xì)胞膜是細(xì)胞空泡化產(chǎn)生的原因之一，另外空泡形成往往與糖脂代謝紊亂有關(guān)，TG 在肝臟細(xì)胞內(nèi)沉積，也會(huì)形成可以觀察到的空泡[25-26]。

4 結(jié)論

（1）急性敵草快脅迫可導(dǎo)致斑馬魚鰓和肝臟組織產(chǎn)生病理學(xué)改變，劑量越大，損傷越嚴(yán)重。

（2）長(zhǎng)期敵草快刺激使斑馬魚肝臟氧化還原狀態(tài)受到破壞，發(fā)生脂質(zhì)過氧化，肝臟Ⅱ相代謝酶——谷胱甘肽-S 轉(zhuǎn)移酶的活性降低，并且使肝臟脂質(zhì)代謝出現(xiàn)障礙。