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    武漢地區(qū)健康成人血清細(xì)胞角蛋白19片段參考區(qū)間的建立

    2021-06-07 06:48:00鄧玲艷李嬌元李輝軍程黎明
    檢驗醫(yī)學(xué) 2021年5期
    關(guān)鍵詞:血清差異水平

    姬 智, 鄧玲艷, 李嬌元, 王 旭, 李輝軍, 程黎明

    (華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院檢驗科,湖北 武漢 430030)

    目前,我國肺癌的發(fā)病率和死亡率在各種惡性腫瘤中均排在第1位,2018年我國新增肺癌患者77.4萬例,死亡69萬例[1]。細(xì)胞角蛋白19片段(cytokeratin 19 fragment,CYFRA21-1)是目前廣泛使用的非小細(xì)胞肺癌標(biāo)志物,可用于非小細(xì)胞肺癌的輔助診斷、療效監(jiān)測和預(yù)后評估[2]。參考區(qū)間是區(qū)分“疾病”與“健康”人群的重要依據(jù),但不同地區(qū)的人群在遺傳學(xué)、生活環(huán)境和飲食習(xí)慣上存在一定的差異,盲目使用文獻(xiàn)或試劑廠商提供的參考區(qū)間可能會影響檢驗結(jié)果的正確解讀。為此,國際臨床化學(xué)和檢驗醫(yī)學(xué)聯(lián)合會(the International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine,IFCC)[3]、美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(the Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)[4]相關(guān)文件以及我國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 402—2012[5]均提出,每個實驗室都應(yīng)建立符合本地人群特征的參考區(qū)間,或至少能驗證其他途徑獲得的參考區(qū)間。為此,本研究擬建立武漢地區(qū)健康漢族成人血清CYFRA21-1的參考區(qū)間,并初步探討影響血清CYFRA21-1水平的因素,以幫助臨床正確評價和使用CYFRA21-1的檢測結(jié)果。

    1 材料和方法

    1.1 研究對象

    選取2017年6月—2019年6月在華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院接受健康體檢的人員,按照CLSI C28-A3文件[4]和我國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 402—2012[5]的要求,剔除不符合要求的體檢者。篩選標(biāo)準(zhǔn):(1)排除有用藥史、獻(xiàn)血/輸血史、近期住院史、手術(shù)史者;(2)排除肺癌及其他惡性腫瘤、腎臟疾病和肝臟疾病患者;(3)排除血尿素、血清肌酐(serum creatinine,SCr)檢測結(jié)果異常者;(4)排除處于哺乳期和孕產(chǎn)期等特殊時期的女性;(5)排除年齡<18歲者;(6)排除重復(fù)體檢者???cè)脒x人數(shù)為8 199名。本研究經(jīng)華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院倫理審查委員會批準(zhǔn),所有研究對象均知情同意。

    1.2 方法

    使用帶分離膠的采血管采集所有研究對象靜脈血,室溫下至少凝集30 min,1 900×g離心10 min,分離血清。采用cobas e602電化學(xué)發(fā)光全自動免疫分析系統(tǒng)(瑞士羅氏公司)及配套試劑檢測血清CYFRA21-1水平。采用cobas c701全自動生化分析儀(瑞士羅氏公司)及配套試劑檢測SCr水平。按照廠商聲明對儀器進(jìn)行日常維護(hù)。每天采用2個水平質(zhì)控品(美國伯樂公司)進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制。本研究進(jìn)行期間,室內(nèi)質(zhì)量控制總變異系數(shù)(coefficient of variation,CV)<5%。

    估算腎小球濾過率(estimated glomerular filtration rate,eGFR)采用慢性腎臟疾病流行病學(xué)協(xié)作組(chronic kidney disease epidemiology collaboration,CKD-EPI)方程[6]計算。基于SCr的黃色人種CKD-EPI方程為:當(dāng)男性SCr≤80 μmol/L(0.9 mg/dL)時,eGFR=141×(SCr/0.9)-0.411×0.993年齡;當(dāng)男性SCr>80 μmol/L(0.9 mg/dL)時,eGFR=141×(SCr/0.9)-1.209×0.993年齡;當(dāng)女性SCr≤62 μmol/L(0.7 mg/dL)時,eGFR=144×(SCr/0.7)-0.329×0.993年齡;當(dāng)女性SCr>62 μmol/L(0.7 mg/dL)時,eGFR=144×(SCr/0.7)-1.209×0.993年齡。根據(jù)改善全球腎臟病預(yù)后組織(the Kidney Disease:Improving Global Outcomes,KDIGO)對慢性腎?。╟hronic kidney disease,CKD)分期中區(qū)分是否存在腎臟損傷和腎功能不全的標(biāo)準(zhǔn),按eGFR結(jié)果將所有研究對象分為eGFR≥90 mL/(min·1.73 m2)組和eGFR<90 mL/(min·1.73 m2)組。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

    采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。采用Dixon法[4]剔除離群值。采用K-S檢驗對數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗。呈偏態(tài)分布的數(shù)據(jù)以中位數(shù)(M)[四分位數(shù)(P25~P75)]表示,2個組之間比較采用Mann-Whitney U檢驗,多組間比較采用Kruskal-Wallis檢驗。由于臨床上以血清CYFRA21-1水平升高為異常,因此根據(jù)CLSI C28-A3文件推薦的非參數(shù)法[4],CYFRA21-1參考區(qū)間上限設(shè)為第95百分位數(shù)(P95)值。采用Spearman秩相關(guān)分析評估各項指標(biāo)之間的相關(guān)性。采用分位數(shù)回歸分析[7]評估CYFRA21-1與相關(guān)協(xié)變量之間的關(guān)系。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 離群值剔除及數(shù)據(jù)分布

    根據(jù)Dixon法結(jié)果,剔除7個離群值,最終獲得有效數(shù)據(jù)8 192個。入組人群中男5 805名、女2 387名,年齡18~90歲。K-S檢驗結(jié)果顯示,CYFRA21-1數(shù)據(jù)呈偏態(tài)分布(P<0.05),總體血清CYFRA21-1水平為1.76(1.35~2.32)ng/mL,P95值為3.45 ng/mL。見圖1。

    圖1 血清CYFRA21-1 檢測結(jié)果分布

    2.2 不同性別之間血清CYFRA21-1水平的比較

    男性血清C Y F R A 2 1-1水平為1.8 2(1.40~2.38)ng/mL,明顯高于女性[1.61(1.22~2.14)ng/mL](P<0.001)。

    2.3 不同年齡之間血清CYFRA21-1水平的比較

    按年齡將所有研究對象分為18~29歲組、30~39歲組、40~49歲組、50~59歲組、60~69歲組和≥70歲組。不同年齡組之間CYFRA21-1水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。兩兩比較結(jié)果顯示,除18~29歲組與40~49歲組血清CYFRA21-1水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)外,其他各年齡組CYFRA21-1水平差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05、P<0.001)。見表1。

    表1 不同年齡組血清CYFRA21-1水平的比較 M(P25~P75),ng/mL

    2.4 CYFRA21-1參考區(qū)間的建立

    按不同性別和年齡分別確定血清CYFRA21-1水平的P95值,18~29歲、30~39歲、40~49歲、50~59歲、60~69歲和≥70歲男性的P95值分別為3.43、3.28、3.49、3.68、4.35、5.82 ng/mL,女性分別為2.92、2.85、3.08、3.17、3.96、4.77 ng/mL。

    18~29歲組、30~39歲組和40~49歲組男性血清CYFRA21-1水平的P95值高于女性(P<0.001),其他年齡組男、女性之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。各年齡組男、女性血清CYFRA21-1水平的P95值均隨年齡的增長而升高,≥60歲各年齡組明顯升高。見圖2。

    圖2 各年齡組男、女性CYFRA21-1參考區(qū)間上限比較

    若將年齡<60歲的各組合并,男性和女性CYFRA21-1的參考區(qū)間分別為0~3.44 ng/mL和0~3.09 ng/mL,不區(qū)分性別的參考區(qū)間為0~3.37 ng/mL,與試劑廠商提供的參考區(qū)間(0~3.3 ng/mL)接近,低于≥60歲人群(60~69歲為0~4.17 ng/mL,≥70歲為0~5.67 ng/mL)。

    2.5 CYFRA21-1水平與年齡的相關(guān)性

    Spearman秩相關(guān)分析結(jié)果顯示,血清CYFRA21-1水平與年齡呈正相關(guān)(r=0.213,P<0.001),與eGFR呈負(fù)相關(guān)(r=-0.247,P<0.001),eGFR與年齡呈負(fù)相關(guān)(r=-0.612,P<0.001)。見圖3。

    圖3 CYFRA21-1、年齡及eGFR之間的相關(guān)性

    2.6 eGFR對CYFRA21-1水平的影響

    8 192名研究對象中有1 743名(21.3%)eGFR<90 mL/(min·1.73 m2)。按eGFR結(jié)果將所有研究對象分為eGFR≥90 mL/(min·1.73 m2)組和eGFR<90 mL/(min·1.73 m2)組,分析不同年齡之間血清CYFRA21-1水平的差異。隨著年齡的增長,2個組CYFRA21-1水平均逐漸升高;2個組組內(nèi)各年齡段之間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。eGFR<90 mL/(min·1.73 m2)組30~39歲、40~49歲和50~59歲者血清CYFRA21-1水平的P95值均高于eGFR≥90 mL/(min·1.73 m2)組同年齡者(P<0.001)。見表2。

    表2 不同eGFR水平各組不同年齡之間血清CYFRA21-1水平及P95值的比較 ng/mL

    分位數(shù)回歸分析結(jié)果顯示,年齡(tau=0.95,β=0.02,P<0.001)、性別(tau=0.95,β=-0.24,P<0.001)和eGFR(tau=0.95,β=-0.01,P<0.001)均是CYFRA21-1水平的影響因素。

    3 討論

    CYFRA21-1 主要用于非小細(xì)胞肺癌的輔助診斷和療效監(jiān)測。我們在實際工作中發(fā)現(xiàn),如使用試劑廠商提供的參考區(qū)間(0~3.3 ng/mL),有6%~10%的健康體檢者血清CYFRA21-1水平會高于參考區(qū)間上限。為此,本研究選取大樣本量的體檢人群建立適合本地區(qū)的CYFRA21-1參考區(qū)間,并初步探討CYFRA21-1水平的影響因素。

    本研究結(jié)果顯示,武漢地區(qū)健康成人血清CYFRA21-1水平的P95值為3.45 ng/mL,高于廠商聲明的參考區(qū)間上限(3.3 ng/mL),與文獻(xiàn)報道[8]基本一致。血清CYFRA21-1水平受年齡和性別影響,隨著年齡的增長,血清CYFRA21-1水平的參考區(qū)間上限逐漸升高,≥60歲人群顯著升高;同年齡組男性參考區(qū)間上限顯著高于女性(P<0.001),特別是<50歲的人群。ZHAO等[9]對中國漢族人群血清CYFRA21-1參考區(qū)間的研究結(jié)果顯示,血清CYFRA21-1水平在不同年齡和性別之間存在差異。將<60歲的人群合并(不分性別),CYFRA21-1的參考區(qū)間(0~3.37 ng/mL)與廠商提供的參考區(qū)間(0~3.3 ng/mL)接近,低于≥60歲人群的參考區(qū)間(60~69歲為0~4.17 ng/mL,≥70歲為0~5.67 ng/mL)。

    由于CYFRA21-1通過腎臟濾過清除,因此腎功能損傷患者血清CYFRA21-1水平可能會顯著升高[10]。MIKKELSEN等[11-12]的研究結(jié)果顯示,CKD患者血清CYFRA21-1水平與eGFR呈負(fù)相關(guān)(r=-0.57,P<0.001),與年齡和性別無相關(guān)性(P>0.05);健康人群CYFRA21-1水平隨年齡增長而升高,但年齡可能不是影響CYFRA21-1水平的直接因素,而可能是由eGFR隨年齡增長而下降導(dǎo)致的。本研究結(jié)果顯示,年齡是影響eGFR的重要因素,在≥60歲人群中,eGFR<90 mL/(min·1.73 m2)者占總數(shù)的58%,而<60歲人群僅占18.2%。為了評估CYFRA21-1究竟是受年齡影響,還是受eGFR的影響,本研究對eGFR<90 mL/(min·1.73 m2)組和eGFR≥90 mL/(min·1.73 m2)組不同年齡之間血清CYFRA21-1水平進(jìn)行比較,結(jié)果顯示年齡和eGFR均能影響CYFRA21-1水平。分位數(shù)回歸分析結(jié)果也顯示,年齡、性別和eGFR均是CYFRA21-1水平的影響因素。

    本研究建立了適合武漢地區(qū)成人的CYFRA21-1參考區(qū)間。盡管本研究結(jié)果顯示,年齡、性別和eGFR都是影響CYFRA21-1水平的因素,但建議主要依據(jù)年齡(<60歲、60~69歲、≥70歲)分組來建立和使用CYFRA21-1的參考區(qū)間??紤]到相同年齡組男、女性之間CYFRA21-1參考區(qū)間的差異較小,且≥50歲男、女性之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),因此不建議對性別進(jìn)行分組。另外,在相同年齡組之間,盡管eGFR<90 mL/(min·1.73 m2)組與eGFR≥90 mL/(min·1.73 m2)組CYFRA21-1水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001),但P95值的差異較小,因此也不建議在年齡分組的基礎(chǔ)上再加入eGFR分組,以免使結(jié)果的解釋變得更加復(fù)雜。

    綜上所述,本研究利用大樣本量的健康人群數(shù)據(jù)初步建立了武漢地區(qū)成人血清CYFRA21-1的參考區(qū)間,并探討了性別、年齡和eGFR對CYFRA21-1水平的影響。但本研究僅是一個單中心研究,研究結(jié)果是否適用于其他地區(qū)人群尚不明確。另外,本研究使用的CYFRA21-1檢測方法為電化學(xué)發(fā)光法,考慮到方法學(xué)不同可能造成的檢測結(jié)果的固有差異,本研究建立的參考區(qū)間可能并不適用于其他方法。本研究未能充分探討其他因素(如吸煙、飲酒、環(huán)境污染等)對CYFRA21-1水平可能產(chǎn)生的影響,后續(xù)將進(jìn)一步完善實驗設(shè)計,探討其他可能影響CYFRA21-1水平的因素。

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