武漢地區(qū)健康成人血清細(xì)胞角蛋白19片段參考區(qū)間的建立

姬 智， 鄧玲艷， 李嬌元， 王 旭， 李輝軍， 程黎明

（華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北 武漢 430030）

目前，我國肺癌的發(fā)病率和死亡率在各種惡性腫瘤中均排在第1位，2018年我國新增肺癌患者77.4萬例，死亡69萬例[1]。細(xì)胞角蛋白19片段（cytokeratin 19 fragment，CYFRA21-1）是目前廣泛使用的非小細(xì)胞肺癌標(biāo)志物，可用于非小細(xì)胞肺癌的輔助診斷、療效監(jiān)測和預(yù)后評(píng)估[2]。參考區(qū)間是區(qū)分“疾病”與“健康”人群的重要依據(jù)，但不同地區(qū)的人群在遺傳學(xué)、生活環(huán)境和飲食習(xí)慣上存在一定的差異，盲目使用文獻(xiàn)或試劑廠商提供的參考區(qū)間可能會(huì)影響檢驗(yàn)結(jié)果的正確解讀。為此，國際臨床化學(xué)和檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)聯(lián)合會(huì)（the International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine，IFCC）[3]、美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（the Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）[4]相關(guān)文件以及我國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 402—2012[5]均提出，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)建立符合本地人群特征的參考區(qū)間，或至少能驗(yàn)證其他途徑獲得的參考區(qū)間。為此，本研究擬建立武漢地區(qū)健康漢族成人血清CYFRA21-1的參考區(qū)間，并初步探討影響血清CYFRA21-1水平的因素，以幫助臨床正確評(píng)價(jià)和使用CYFRA21-1的檢測結(jié)果。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

選取2017年6月—2019年6月在華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院接受健康體檢的人員，按照CLSI C28-A3文件[4]和我國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 402—2012[5]的要求，剔除不符合要求的體檢者。篩選標(biāo)準(zhǔn)：（1）排除有用藥史、獻(xiàn)血/輸血史、近期住院史、手術(shù)史者；（2）排除肺癌及其他惡性腫瘤、腎臟疾病和肝臟疾病患者；（3）排除血尿素、血清肌酐（serum creatinine，SCr）檢測結(jié)果異常者；（4）排除處于哺乳期和孕產(chǎn)期等特殊時(shí)期的女性；（5）排除年齡＜18歲者；（6）排除重復(fù)體檢者?？?cè)脒x人數(shù)為8 199名。本研究經(jīng)華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院倫理審查委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象均知情同意。

1.2 方法

使用帶分離膠的采血管采集所有研究對(duì)象靜脈血，室溫下至少凝集30 min，1 900×g離心10 min，分離血清。采用cobas e602電化學(xué)發(fā)光全自動(dòng)免疫分析系統(tǒng)（瑞士羅氏公司）及配套試劑檢測血清CYFRA21-1水平。采用cobas c701全自動(dòng)生化分析儀（瑞士羅氏公司）及配套試劑檢測SCr水平。按照廠商聲明對(duì)儀器進(jìn)行日常維護(hù)。每天采用2個(gè)水平質(zhì)控品（美國伯樂公司）進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制。本研究進(jìn)行期間，室內(nèi)質(zhì)量控制總變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）＜5%。

估算腎小球?yàn)V過率（estimated glomerular filtration rate，eGFR）采用慢性腎臟疾病流行病學(xué)協(xié)作組（chronic kidney disease epidemiology collaboration，CKD-EPI）方程[6]計(jì)算?；赟Cr的黃色人種CKD-EPI方程為：當(dāng)男性SCr≤80 μmol/L（0.9 mg/dL）時(shí)，eGFR=141×（SCr/0.9）-0.411×0.993年齡；當(dāng)男性SCr>80 μmol/L（0.9 mg/dL）時(shí)，eGFR=141×（SCr/0.9）-1.209×0.993年齡；當(dāng)女性SCr≤62 μmol/L（0.7 mg/dL）時(shí)，eGFR=144×（SCr/0.7）-0.329×0.993年齡；當(dāng)女性SCr>62 μmol/L（0.7 mg/dL）時(shí)，eGFR=144×（SCr/0.7）-1.209×0.993年齡。根據(jù)改善全球腎臟病預(yù)后組織（the Kidney Disease：Improving Global Outcomes，KDIGO）對(duì)慢性腎?。╟hronic kidney disease，CKD）分期中區(qū)分是否存在腎臟損傷和腎功能不全的標(biāo)準(zhǔn)，按eGFR結(jié)果將所有研究對(duì)象分為eGFR≥90 mL/（min·1.73 m2）組和eGFR＜90 mL/（min·1.73 m2）組。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用Dixon法[4]剔除離群值。采用K-S檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)。呈偏態(tài)分布的數(shù)據(jù)以中位數(shù)（M）[四分位數(shù)（P25～P75）]表示，2個(gè)組之間比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)，多組間比較采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)。由于臨床上以血清CYFRA21-1水平升高為異常，因此根據(jù)CLSI C28-A3文件推薦的非參數(shù)法[4]，CYFRA21-1參考區(qū)間上限設(shè)為第95百分位數(shù)（P95）值。采用Spearman秩相關(guān)分析評(píng)估各項(xiàng)指標(biāo)之間的相關(guān)性。采用分位數(shù)回歸分析[7]評(píng)估CYFRA21-1與相關(guān)協(xié)變量之間的關(guān)系。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 離群值剔除及數(shù)據(jù)分布

根據(jù)Dixon法結(jié)果，剔除7個(gè)離群值，最終獲得有效數(shù)據(jù)8 192個(gè)。入組人群中男5 805名、女2 387名，年齡18～90歲。K-S檢驗(yàn)結(jié)果顯示，CYFRA21-1數(shù)據(jù)呈偏態(tài)分布（P＜0.05），總體血清CYFRA21-1水平為1.76（1.35～2.32）ng/mL，P95值為3.45 ng/mL。見圖1。

圖1 血清CYFRA21-1 檢測結(jié)果分布

2.2 不同性別之間血清CYFRA21-1水平的比較

男性血清C Y F R A 2 1-1水平為1.8 2（1.40～2.38）ng/mL，明顯高于女性[1.61（1.22～2.14）ng/mL]（P＜0.001）。

2.3 不同年齡之間血清CYFRA21-1水平的比較

按年齡將所有研究對(duì)象分為18～29歲組、30～39歲組、40～49歲組、50～59歲組、60～69歲組和≥70歲組。不同年齡組之間CYFRA21-1水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。兩兩比較結(jié)果顯示，除18～29歲組與40～49歲組血清CYFRA21-1水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）外，其他各年齡組CYFRA21-1水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05、P＜0.001）。見表1。

表1 不同年齡組血清CYFRA21-1水平的比較 M（P25～P75），ng/mL

2.4 CYFRA21-1參考區(qū)間的建立

按不同性別和年齡分別確定血清CYFRA21-1水平的P95值，18～29歲、30～39歲、40～49歲、50～59歲、60～69歲和≥70歲男性的P95值分別為3.43、3.28、3.49、3.68、4.35、5.82 ng/mL，女性分別為2.92、2.85、3.08、3.17、3.96、4.77 ng/mL。

18～29歲組、30～39歲組和40～49歲組男性血清CYFRA21-1水平的P95值高于女性（P＜0.001），其他年齡組男、女性之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。各年齡組男、女性血清CYFRA21-1水平的P95值均隨年齡的增長而升高，≥60歲各年齡組明顯升高。見圖2。

圖2 各年齡組男、女性CYFRA21-1參考區(qū)間上限比較

若將年齡＜60歲的各組合并，男性和女性CYFRA21-1的參考區(qū)間分別為0～3.44 ng/mL和0～3.09 ng/mL，不區(qū)分性別的參考區(qū)間為0～3.37 ng/mL，與試劑廠商提供的參考區(qū)間（0～3.3 ng/mL）接近，低于≥60歲人群（60～69歲為0～4.17 ng/mL，≥70歲為0～5.67 ng/mL）。

2.5 CYFRA21-1水平與年齡的相關(guān)性

Spearman秩相關(guān)分析結(jié)果顯示，血清CYFRA21-1水平與年齡呈正相關(guān)（r=0.213，P＜0.001），與eGFR呈負(fù)相關(guān)（r=-0.247，P＜0.001），eGFR與年齡呈負(fù)相關(guān)（r=-0.612，P＜0.001）。見圖3。

圖3 CYFRA21-1、年齡及eGFR之間的相關(guān)性

2.6 eGFR對(duì)CYFRA21-1水平的影響

8 192名研究對(duì)象中有1 743名（21.3%）eGFR＜90 mL/（min·1.73 m2）。按eGFR結(jié)果將所有研究對(duì)象分為eGFR≥90 mL/（min·1.73 m2）組和eGFR＜90 mL/（min·1.73 m2）組，分析不同年齡之間血清CYFRA21-1水平的差異。隨著年齡的增長，2個(gè)組CYFRA21-1水平均逐漸升高；2個(gè)組組內(nèi)各年齡段之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。eGFR＜90 mL/（min·1.73 m2）組30～39歲、40～49歲和50～59歲者血清CYFRA21-1水平的P95值均高于eGFR≥90 mL/（min·1.73 m2）組同年齡者（P＜0.001）。見表2。

表2 不同eGFR水平各組不同年齡之間血清CYFRA21-1水平及P95值的比較 ng/mL

分位數(shù)回歸分析結(jié)果顯示，年齡（tau=0.95，β=0.02，P＜0.001）、性別（tau=0.95，β=-0.24，P＜0.001）和eGFR（tau=0.95，β=-0.01，P＜0.001）均是CYFRA21-1水平的影響因素。

3 討論

CYFRA21-1 主要用于非小細(xì)胞肺癌的輔助診斷和療效監(jiān)測。我們?cè)趯?shí)際工作中發(fā)現(xiàn)，如使用試劑廠商提供的參考區(qū)間（0～3.3 ng/mL），有6%～10%的健康體檢者血清CYFRA21-1水平會(huì)高于參考區(qū)間上限。為此，本研究選取大樣本量的體檢人群建立適合本地區(qū)的CYFRA21-1參考區(qū)間，并初步探討CYFRA21-1水平的影響因素。

本研究結(jié)果顯示，武漢地區(qū)健康成人血清CYFRA21-1水平的P95值為3.45 ng/mL，高于廠商聲明的參考區(qū)間上限（3.3 ng/mL），與文獻(xiàn)報(bào)道[8]基本一致。血清CYFRA21-1水平受年齡和性別影響，隨著年齡的增長，血清CYFRA21-1水平的參考區(qū)間上限逐漸升高，≥60歲人群顯著升高；同年齡組男性參考區(qū)間上限顯著高于女性（P＜0.001），特別是＜50歲的人群。ZHAO等[9]對(duì)中國漢族人群血清CYFRA21-1參考區(qū)間的研究結(jié)果顯示，血清CYFRA21-1水平在不同年齡和性別之間存在差異。將＜60歲的人群合并（不分性別），CYFRA21-1的參考區(qū)間（0～3.37 ng/mL）與廠商提供的參考區(qū)間（0～3.3 ng/mL）接近，低于≥60歲人群的參考區(qū)間（60～69歲為0～4.17 ng/mL，≥70歲為0～5.67 ng/mL）。

由于CYFRA21-1通過腎臟濾過清除，因此腎功能損傷患者血清CYFRA21-1水平可能會(huì)顯著升高[10]。MIKKELSEN等[11-12]的研究結(jié)果顯示，CKD患者血清CYFRA21-1水平與eGFR呈負(fù)相關(guān)（r=-0.57，P＜0.001），與年齡和性別無相關(guān)性（P>0.05）；健康人群CYFRA21-1水平隨年齡增長而升高，但年齡可能不是影響CYFRA21-1水平的直接因素，而可能是由eGFR隨年齡增長而下降導(dǎo)致的。本研究結(jié)果顯示，年齡是影響eGFR的重要因素，在≥60歲人群中，eGFR＜90 mL/（min·1.73 m2）者占總數(shù)的58%，而＜60歲人群僅占18.2%。為了評(píng)估CYFRA21-1究竟是受年齡影響，還是受eGFR的影響，本研究對(duì)eGFR＜90 mL/（min·1.73 m2）組和eGFR≥90 mL/（min·1.73 m2）組不同年齡之間血清CYFRA21-1水平進(jìn)行比較，結(jié)果顯示年齡和eGFR均能影響CYFRA21-1水平。分位數(shù)回歸分析結(jié)果也顯示，年齡、性別和eGFR均是CYFRA21-1水平的影響因素。

本研究建立了適合武漢地區(qū)成人的CYFRA21-1參考區(qū)間。盡管本研究結(jié)果顯示，年齡、性別和eGFR都是影響CYFRA21-1水平的因素，但建議主要依據(jù)年齡（＜60歲、60～69歲、≥70歲）分組來建立和使用CYFRA21-1的參考區(qū)間?？紤]到相同年齡組男、女性之間CYFRA21-1參考區(qū)間的差異較小，且≥50歲男、女性之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），因此不建議對(duì)性別進(jìn)行分組。另外，在相同年齡組之間，盡管eGFR＜90 mL/（min·1.73 m2）組與eGFR≥90 mL/（min·1.73 m2）組CYFRA21-1水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001），但P95值的差異較小，因此也不建議在年齡分組的基礎(chǔ)上再加入eGFR分組，以免使結(jié)果的解釋變得更加復(fù)雜。

綜上所述，本研究利用大樣本量的健康人群數(shù)據(jù)初步建立了武漢地區(qū)成人血清CYFRA21-1的參考區(qū)間，并探討了性別、年齡和eGFR對(duì)CYFRA21-1水平的影響。但本研究僅是一個(gè)單中心研究，研究結(jié)果是否適用于其他地區(qū)人群尚不明確。另外，本研究使用的CYFRA21-1檢測方法為電化學(xué)發(fā)光法，考慮到方法學(xué)不同可能造成的檢測結(jié)果的固有差異，本研究建立的參考區(qū)間可能并不適用于其他方法。本研究未能充分探討其他因素（如吸煙、飲酒、環(huán)境污染等）對(duì)CYFRA21-1水平可能產(chǎn)生的影響，后續(xù)將進(jìn)一步完善實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，探討其他可能影響CYFRA21-1水平的因素。