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    聯(lián)合檢測尿總蛋白避免尿微量白蛋白鉤狀效應的方法

    2021-06-07 06:47:58羅桑次珍澤仁曲措馬超超劉治娟
    檢驗醫(yī)學 2021年5期
    關鍵詞:效應實驗室檢測

    旦 曲, 羅桑次珍, 澤仁曲措, 馬超超, 劉治娟

    (1.西藏自治區(qū)人民醫(yī)院檢驗科,西藏 拉薩 850000;2.北京協(xié)和醫(yī)院檢驗科,北京100730)

    尿微量白蛋白(microalbumin,mAlb)在腎臟早期損傷的診斷和治療中有重要的參考價值[1]。尿白蛋白/肌酐比值(albumin to creatinine ratio,ACR)已成為慢性腎臟疾病篩查和分期的重要指標之一[2-3]。目前,尿mAlb的檢測方法主要有免疫散射比濁法、免疫透射比濁法和放射免疫分析法、時間分辨免疫分析法等。免疫透射比濁法與免疫散射比濁法有較高的一致性[4],但由于方法學的原因,免疫透射比濁法難以避免產(chǎn)生鉤狀效應。雖然已有樣本預稀釋和抗原過量檢查、反應特征曲線設置和報警、計算反應完成率等新技術[5-8]可用于避免鉤狀效應,但不同儀器和試劑的參數(shù)設置和功能不同,上述新技術不具有普遍適用性。有些開放系統(tǒng)甚至無任何鉤狀效應的預防措施。本研究擬通過尿總蛋白(total protien,TP)與尿mAlb的聯(lián)合檢測,構建線性回歸模型,在結果審核時以該方程為驗證規(guī)則,以避免免疫透射比濁法檢測尿mAlb時的鉤狀效應。

    1 材料和方法

    1.1 研究對象

    選取2018年1—12月西藏自治區(qū)人民醫(yī)院同時檢測尿mAlb和尿TP的患者1 711例,其中男943例、女768例,年齡18~78歲。另收集檢測尿mAlb時產(chǎn)生鉤狀效應的陰性或弱陽性尿液樣本35份。

    1.2 試劑與儀器

    尿mAlb試劑盒(免疫透射比濁法)和配套校準品購自四川邁克生物科技股份有限公司。腦脊液/尿TP試劑盒(鄰苯三酚紅鉬比色法)7170瓶型和配套校準品購自四川新健康成生物股份有限公司。檢測儀器為ARCHITECT C16000全自動生化分析儀(美國雅培公司)。尿液化學質控品購自美國伯樂公司(貨號為397、398,批號為68521、68522,有效期至2019年12月31日)。本實驗室2018年度尿mAlb中、高水平質控品的室內變異系數(shù)(coefficient of variation,CV)分別為4.83%、4.43%,尿TP中、高水平質控品的室內CV分別為3.19%和2.05%,2018年國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗中心室間質量評價成績合格。

    1.3 方法

    收集所有對象的晨尿,盛集于潔凈的容器內,30 min內完成檢測。渾濁尿液采用1 200×g離心10 min,取上清液進行檢測。排除影響尿mAlb和尿TP檢測結果的非病理性因素(各種因素引起的尿液污染)。

    以尿TP為因變量(Y),尿mAlb為自變量(X),建立線性回歸方程。將發(fā)生鉤狀效應的35份樣本的尿mAlb檢測值(記為尿mAlb鉤狀)代入線性回歸方程,計算得到尿TP值(記為尿TP鉤狀),隨后將尿液樣本稀釋并檢測尿mAlb,將檢測結果記為尿mAlb稀釋,代入方程后計算尿TP值(記為尿TP稀釋),與尿TP實測值(尿TP實測)進行比較。

    1.4 統(tǒng)計學方法

    采用Excel 2010軟件及SPSS 25.0軟件進行統(tǒng)計分析。采用Kolmogorov-Smirnov檢驗進行正態(tài)性檢驗。尿TP結果呈偏態(tài)分布,經(jīng)對數(shù)轉換后呈正態(tài)分布。采用Spearman相關分析評估尿mAlb與尿TP的相關性。以尿mAlb檢測值為X,尿TP檢測值為Y,繪制散點圖,建立線性回歸方程。不同方法得出的尿TP結果之間的比較采用Dunni檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    2.1 尿TP與尿mAlb的相關性及線性回歸方程

    Spearman相關分析結果顯示,尿TP與尿mAlb呈正相關(r=0.880,P=0.000)。以尿TP為因變量(Y),尿mAlb為自變量(X),建立線性回歸方程:Y=116.361+1.245X(r2=0.921,P=0.000)。見圖1。

    圖1 尿mAlb與尿TP的相關性

    2.2 審核規(guī)則的驗證

    把線性回歸方程列入實驗室信息系統(tǒng)(laboratory information system,LIS)的審核規(guī)則中進行驗證。結果顯示,尿TP實測與尿TP鉤狀比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001);與尿TP稀釋比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

    3 討論

    免疫比濁法是基于抗原抗體反應的檢測方法,而抗原抗體反應的特點就是抗原和抗體等比例反應。當抗原或抗體過量時,就會產(chǎn)生鉤狀效應,可導致假陰性或弱陽性結果。為了保證檢驗結果的準確,儀器和試劑廠商采取各種措施來避免鉤狀效應的產(chǎn)生。但并不是所有的檢測項目都適用這些方法。因此,本研究通過建立尿TP和尿mAlb的線性回歸方程來判斷是否產(chǎn)生了鉤狀效應,為部分無力購置昂貴設備的基層醫(yī)院提供新的思路。

    白蛋白從腎小球濾過后,絕大部分在腎小管被重吸收,正常人尿中白蛋白含量極微。但在一些早期的腎臟病變中,尿mAlb水平會升高。因此,尿mAlb和ACR已在臨床上被普遍用于腎臟疾病的診斷。目前,尿mAlb的檢測方法主要為免疫比濁法,某些儀器具有監(jiān)測反應曲線和帶檢查報警的功能,可以提示鉤狀效應的發(fā)生[9],但一些型號較老的儀器沒有這些功能。因此,臨床實驗室需要一種較為簡單的方法來提示鉤狀效應的發(fā)生。

    本研究結果顯示,尿TP與尿mAlb呈正相關(r=0.880,P=0.000),可建立一元線性回歸方程,在一定程度上反映了尿TP與尿mAlb之間的關系。當發(fā)生鉤狀效應時,尿mAlb和尿TP之間的關聯(lián)性不能滿足一元線性回歸方程。因此,可以把建立的線性回歸方程作為一個經(jīng)驗公式,用于尿mAlb檢測結果的審核。各臨床實驗室可建立適合自己實驗室的線性回歸方程,并定期驗證。有條件的實驗室應參照WS/T 616—2018《臨床實驗室定量檢驗結果的自動審核》的要求,分析尿TP與尿mAlb之間的相關性,進一步挖掘二者間的關系,深入揭示二者在疾病發(fā)展和治療中的病理生理特征,以便更好地為臨床服務。

    綜上所述,雖然不同的腎臟疾病尿TP的成分及水平均有一定的差異[10-11],但尿mAlb與尿TP的比值在一定程度上可反映疾病的類型。聯(lián)合檢測尿TP和尿mAlb雖然稍微增加了患者的負擔,但最終的檢測結果更為準確,有助于臨床對病情的判斷。由于本研究的樣本量較小,建立的線性回歸方程尚不能完全反映尿mAlb與尿TP之間的關系,因此還有待進一步擴大樣本量進行驗證。

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