氣相色譜法測定乳康顆粒中乙酸辛酯的含量

劉 勇，閆高穎,張必榮,張 瓊，呂慧鋒*，杜夢嵐

(1.陜西省藥品和疫苗檢查中心，陜西 西安 710065；2.陜西天谷藥業(yè)有限公司，陜西 漢中 723100；3.西安千禾藥業(yè)股份有限公司，陜西 西安 710075)

乳康顆粒是西安千禾藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的獨家劑型，由牡蠣、瓜蔞、海藻、黃芪、天冬、夏枯草、三棱、玄參、白術(shù)、莪術(shù)、丹參、乳香、沒藥、浙貝母、雞內(nèi)金(炒)15味中藥組方而成，具有疏肝解郁，理氣止痛，活血破瘀，消積化痰，軟堅散結(jié)，補氣健脾的作用[1]，中醫(yī)臨床上主要用于治療女性乳腺增生[2-3]?，F(xiàn)行《國家藥品標(biāo)準(zhǔn)YBZ0926 2006-2011Z-2013》中收載了天冬、丹參、乳香、沒藥和黃芪的薄層色譜法(TLC)鑒別以及丹參素鈉的高效液相色譜(HPLC)測定含量方法。李冬梅[4]等研究了乳康顆粒中浙貝母的TLC鑒別方法，并對乳香的鑒別方法進(jìn)行了改進(jìn)，同時增加了對丹參中有效成分丹酚酸B的含量測定的研究。由于乳康顆粒中還含有莪術(shù)、乳香、沒藥等揮發(fā)性成分，對產(chǎn)品的質(zhì)量有很大的影響，為了進(jìn)一步提升乳康顆粒的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，全面控制其成品的質(zhì)量，作者參照相關(guān)文獻(xiàn)[5-11]，增加了對乳香中有效成分乙酸辛酯含量測定的研究。

1 實驗部分

1.1 原料、試劑與儀器

乳香：陜西興盛德藥業(yè)有限責(zé)任公司，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)宋藝君副教授鑒定為橄欖科植物乳香樹(BoswelliaCarteriiBirdw)的樹脂，為埃塞俄比亞原乳香；乙酸辛酯對照品:批號111671-201704，中國食品藥品檢定研究院；乳康顆粒：批號2020101，2020102，2020103，2020301，2020401，2020402，西安千禾藥業(yè)股份有限公司。

其他試劑均為分析純，市售。

氣相色譜儀：GC-2010Pro，日本島津公司；十萬分之一電子天平：AT201，Mettler Toledo公司；數(shù)控超聲波清洗儀：KQ-500DE，昆山市超聲儀器有限公司。

1.2 對照品溶液的制備

精密稱取乙酸辛酯對照品適量，配制乙酸辛酯對照品溶液(質(zhì)量濃度為146.21 μg/mL)，將其依次稀釋制成質(zhì)量濃度分別為29.24、36.55、58.49、73.11 μg/mL的溶液，待用。

1.3 供試品溶液的制備

1.3.1 正己烷超聲法

稱取乳康顆粒細(xì)粉8.33 g(相當(dāng)于含乳香藥材0.25 g)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入正己烷25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用正己烷補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，待用。

1.3.2 乙酸乙酯超聲法

稱取乳康顆粒細(xì)粉8.33 g(相當(dāng)于含乳香藥材0.25 g)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙酸乙酯25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用乙酸乙酯補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，待用。

1.3.3 無水乙醇超聲法

稱取乳康顆粒細(xì)粉8.33 g，(相當(dāng)于含乳香藥材0.25 g)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入無水乙醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用無水乙醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，待用。

1.3.4 正己烷索氏提取法

稱取乳康顆粒細(xì)粉8.33 g(相當(dāng)于含乳香藥材0.25 g)，精密稱定，置索氏提取器中加入正己烷適量，提取約3 h(至無色)，提取液揮干溶劑，殘渣加正己烷溶解并定容置25 mL容量瓶中，搖勻，濾過，待用。

1.3.5 乙酸乙酯索氏提取法

稱取乳康顆粒細(xì)粉8.33 g(相當(dāng)于含乳香藥材0.25 g)，精密稱定，置索氏提取器中加入乙酸乙酯適量，提取約3 h(至無色)，提取液揮干溶劑，殘渣加乙酸乙酯溶解并定容置25 mL容量瓶中，搖勻，濾過，待用。

1.3.6 無水乙醇索氏提取法

稱取乳康顆粒細(xì)粉8.33 g(相當(dāng)于含乳香藥材0.25 g)，精密稱定，置索氏提取器中加入無水乙醇適量，提取約3 h(至無色)，提取液揮干溶劑，殘渣加無水乙醇溶解并定容置25 mL容量瓶中，搖勻，濾過，待用。

1.4 陰性樣品溶液制備

取除乳香外的各味藥材，按照處方比例和制法以及供試品溶液的制備方法，自行制備不含乳香的陰性樣品溶液。

1.5 色譜條件

色譜柱：安捷倫DB-WAX(30 mm×0.32 mm×0.50 μm)；氣體流量：氮氣，30.0 mL/min；氫氣，50.0 mL/min；空氣，500.0 mL/min；進(jìn)樣體積：1 μL，分流進(jìn)樣，分流比為10∶1；檢測器：FID(氫火焰離子化檢測器)，氣化室溫度：290 ℃；色譜柱溫度：初始溫度為50 ℃，維持1 min，以10 ℃/min的速率升至200 ℃，保持8 min；檢測器溫度：300 ℃。

1.6 乙酸辛酯的含量測定[5-11]

取1.3制備的供試品溶液，按照1.5色譜條件進(jìn)行測定，計算乙酸辛酯含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取效果比較

將1.3提取方法所制樣品分別按照1.5色譜條件進(jìn)行測定，正己烷超聲樣品中乙酸辛酯的含量為0.191 mg/g，正己烷索氏提取樣品中乙酸辛酯的含量為0.193 mg/g，兩者無明顯差異；其余乙酸乙酯超聲、無水乙醇超聲、乙酯索氏提取、無水乙醇索氏提取樣品中乙酸辛酯的含量，分別為0.122、0.105、0.146、0.128 mg/g。

2.2 超聲提取時間和溶劑用量的確定

按正己烷超聲方法制備樣品，分別加入正己烷25、50 mL，超聲處理30、45、60 min。結(jié)果顯示超聲時間和溶劑用量對乙酸辛酯含量的影響不顯著，隨著時間和溶劑用量的增加，乙酸辛酯含量無明顯增加，故選定25 mL超聲處理30 min。

2.3 專屬性實驗

取對照品、供試品和陰性樣品溶液，按照1.5色譜條件進(jìn)行測定，色譜圖見圖1。

t/min圖1 樣品色譜圖

由圖1可知，供試品溶液在與對照品溶液在保留時間一致的位置有相同的色譜峰且分離度良好，陰性樣品無干擾，表明該法的專屬性良好。

2.4 線性關(guān)系考察

色譜條件同1.5，對照品溶液的制備同1.2。將1.2制備的不同質(zhì)量濃度的溶液分別進(jìn)樣，記錄色譜圖，測定峰面積。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，對照峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖2。

ρ(乙酸辛酯)/(μg·mL-1)圖2 乙酸辛酯線性曲線圖

由圖2可知，ρ(乙酸辛酯)=29.24～146.21 μg/mL線性關(guān)系良好。

2.5 加樣回收率實驗

取已知含量的乳康顆粒樣品4.3 g，共9份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入乙酸辛酯對照品溶液5、10、15 mL各3份，加正己烷稀釋成25 mL，稱定質(zhì)量按照1.3方法制成加樣回收供試液，依照1.5色譜條件測定，并按照公式(1)計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

(1)

表1 加樣回收率實驗結(jié)果

回收率要求為90%～110%，重復(fù)性要求RSD<3%。由表1可知，3個水平9個樣品的回收率及平均值均在要求范圍內(nèi)，平均回收率為104.4%；RSD為2.8%，符合規(guī)定要求。因此，該方法的準(zhǔn)確度和重復(fù)性良好。

2.6 精密度實驗

色譜條件同1.5，精密量取ρ(對照品)=73.11 μg/mL溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，見表2。

表2 測定方法的精密度

由表2可知，乙酸辛酯的峰面積RSD為0.4%，表明色譜系統(tǒng)連續(xù)進(jìn)樣時精密度良好。

2.7 重復(fù)性實驗

按照1.3方法處理制備6份供試品溶液，依照1.5色譜條件測定，并計算w(乙酸辛酯)，見表3。

表3 測定方法的重復(fù)性

由表3可知，w(乙酸辛酯)平均值為0.191 mg/g，RSD為2.9%。因此，該方法的重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性實驗

取供試品，按照1.3方法處理，在儀器連續(xù)運行的情況下分別在0、1、2、6、10、18、24 h依次測定，見表4。

表4 測定方法的穩(wěn)定性

由表4可知，w(乙酸辛酯)的RSD為2.4%，表明該成份在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 樣品的含量測定

將收集到的6批乳康顆粒樣品(規(guī)格：3.0 g/袋)，按1.5色譜條件測定,見表5。

表5 樣品中w(乙酸辛酯)的測定

由表5可知，6批樣品的w(乙酸辛酯)=0.191 3～0.265 3 mg/g，故可將乳康顆粒中乙酸辛酯限度定為每袋不少于0.50 mg。

2.10 檢測限和定量限

將1.2方法制備的對照品溶液進(jìn)行稀釋，依照1.5色譜條件進(jìn)行測定，以基線噪音的3倍計算，乙酸辛酯的檢測限為0.146 22 μg/mL；以基線噪音的10倍計算，乙酸辛酯的定量限為0.438 66 μg/mL。

3 結(jié) 論

乳香具有很強的活血、行氣、止痛之功效[7]，其作為乳康顆粒組方中的主要成分既入血分，又入氣分，能行血中氣滯，化瘀止痛，還能宣通臟腑氣血，通達(dá)經(jīng)絡(luò)[2-3]，對乳康顆粒的功效起著至關(guān)重要的作用；現(xiàn)行生產(chǎn)工藝中乳香需和沒藥、雞內(nèi)金、浙貝母混合粉碎成細(xì)粉，混合細(xì)粉再和濃縮濾液混勻后進(jìn)行減壓干燥，因乳香、沒藥中含有大量的揮發(fā)油，若干燥溫度及干燥時間控制不嚴(yán)格極易造成有效成分的損失，因此，選擇乳香中乙酸辛酯作為乳康顆粒的定量指標(biāo)進(jìn)行控制，能很好地反映出產(chǎn)品質(zhì)量的控制過程。

經(jīng)過方法學(xué)考察，結(jié)果表明，乳康顆粒中乙酸辛酯的含量測定方法穩(wěn)定可靠，簡便可行，重復(fù)性好，專屬性強，可用于乳康顆粒的質(zhì)量控制。