蘆筍老莖中蘆丁的提取和含量測(cè)定

馬凱

摘 要：采用超聲法和索氏提取法對(duì)蘆筍老莖中蘆丁進(jìn)行提取，高效液相色譜法對(duì)蘆丁的含量進(jìn)行測(cè)定。索氏提取法提取的蘆丁含量高于超聲法。高效液相色譜法方便、簡(jiǎn)單、快捷、準(zhǔn)確，可用于蘆筍老莖中蘆丁含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：蘆筍；蘆?。凰魇?；超聲；高效液相

蘆丁，屬于黃酮苷類(lèi)化合物，又稱蕓香苷、槲皮苷，為淡黃色粉末或極細(xì)的淡黃色針狀結(jié)晶，無(wú)臭無(wú)味。蘆丁廣泛用于醫(yī)藥、保健食品中，具有抗菌消炎、抗輻射、調(diào)節(jié)毛細(xì)血管壁的滲透和對(duì)紫外線具有極強(qiáng)的吸收以及很好的抗氧化等作用。蘆筍，學(xué)名石刁柏，具有很高的營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值，是一種食藥兼用的名貴蔬菜。蘆筍過(guò)了收獲季節(jié)后有大量的老莖無(wú)法利用，其中含有豐富的黃酮類(lèi)化合物。本課題研究用超聲和索氏提取的方法，從蘆筍老莖中提取蘆丁，可為蘆丁的提取提供新的資源和工藝，擴(kuò)大蘆筍老莖的綜合利用，變廢為寶。

1儀器與試劑

1.1儀器。美國(guó)Waters公司W(wǎng)aters2695高效液相色譜儀；Waters2996二極管陣列檢測(cè)器；WatersXTerra?MSC18色譜柱（2.1mm×150mm3.5?m）；電子天平（上海恒平）；WK-1200A高速藥物粉碎機(jī)（青州精誠(chéng)）；0.45?m有機(jī)相濾膜（上海興亞）；

1.2材料和試劑。蘆筍（采集于秋季農(nóng)田）；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品鑒定所）；甲醇為色譜醇（美國(guó)天地）；水為純凈水（娃哈哈純凈水經(jīng)20℃超聲處理）；石油醚（天津永大）；無(wú)水乙醇（天津廣成）；石油醚、無(wú)水乙醇均為分析純。

2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1材料處理。蘆筍老莖洗凈，自然晾干后，置于干燥箱中60℃恒溫干燥24h，稱其總重量，再放入烘箱中繼續(xù)干燥，反復(fù)稱量至恒重，粉碎成粉末后保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2蘆筍老莖中蘆丁的提取

2.2.1去除色素。精密稱取粉末10g，置索氏提取器中，加石油醚250ml，水浴回流提取5h，棄去石油醚液，將樣品中殘存的石油醚全部揮去。

2.2.2蘆丁的提取。將樣品分成兩等份，每一份相當(dāng)于原料5g。超聲提取法提取：將另一份樣品置具塞錐形瓶中，加無(wú)水乙醇30ml，超聲提取2h，濾過(guò)，收集濾液，濾渣再加無(wú)水乙醇30ml，重復(fù)提取3次，合并濾液置500ml圓底燒瓶中，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。得樣品1。索氏提取法提?。簩⑵渲幸环輼悠芳訜o(wú)水乙醇250ml，再置索氏提取器中提取5h，放涼，濾過(guò)，置500ml圓底燒瓶中，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。得樣品2。

2.3樣品含量測(cè)定

2.3.1對(duì)照品溶液的配制。精密稱取蘆丁對(duì)照品0.2mg，置10ml容量瓶中用甲醇定容至刻度，搖勻得蘆丁對(duì)照品溶液0.02mg/ml。

2.3.2樣品溶液的配制。向樣品1和樣品2圓底燒瓶中加入甲醇使樣品溶解在甲醇中，濾過(guò)，微孔濾膜過(guò)濾，置50ml容量瓶中定容至刻度，搖勻得樣品溶液0.1g/ml。

2.3.3色譜條件。采用XTerra?MSC18色譜柱（2.1mm×150mm×3.5?m）；流速：0.20ml/min；柱溫：室溫；波長(zhǎng)掃描范圍：260nm～280nm。Waters2996二極管陣列檢測(cè)器；工作站：MassLynxV4.0系統(tǒng)；流動(dòng)相：甲醇-0.2%磷酸溶液梯度洗脫。

2.3.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定。將蘆丁對(duì)照品溶液0.02mg/ml配置成0.00125mg/ml，0.0025mg/l，0.005mg/ml，0.02mg/ml的溶液各2ml，過(guò)0.45m機(jī)相濾膜后置于4個(gè)進(jìn)樣瓶中，高效液相進(jìn)樣量為10 1，在紫外波長(zhǎng)為260nm～280nm范圍內(nèi)掃描檢測(cè)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液，測(cè)定峰面積分別為161987，330961，668672，2092391，4227087得蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品在0.0125～0.4g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性回歸方程為Y=10339265.8x+74569.3，R=0.9995。

2.3.5最低檢出限。將蘆丁對(duì)照品溶液0.02mg/ml不斷稀釋?zhuān)玫綑z測(cè)蘆丁的最低濃度。S/N>3，最低檢出限為0.05mg。

2.3.6穩(wěn)定性試驗(yàn)。精密量取樣品1溶液，分別于2h、12h、24h、36h、48h進(jìn)樣10 1，測(cè)定蘆丁峰面積以考察樣品溶液的穩(wěn)定性，結(jié)果顯示蘆丁在10h內(nèi)穩(wěn)定，RSD=0.58%。

2.3.7加樣回收試驗(yàn)。精密量取樣品1和樣品2溶液各3份，分別加入蘆丁對(duì)照品溶液0.1mg，測(cè)得峰面積得出回收率為樣品1為95.28%，樣品2為98.54%。

2.3.8樣品含量測(cè)定。取配制好的樣品溶液2ml于進(jìn)樣瓶中，按色譜條件進(jìn)樣10 1，連續(xù)進(jìn)樣3次，得到峰面積算出含量樣品1為1.126mg/g，樣品2為1.726mg/g。

3討論

3.1色譜條件的選擇。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道蘆丁在200～600nm的范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，在213nm、258nm、360nm處出現(xiàn)3個(gè)吸收峰，取標(biāo)準(zhǔn)品溶液于260～280nm區(qū)間內(nèi)掃描，得出的主峰高，分離效果好。

梯度洗脫法可以改變流動(dòng)相中各溶劑組成的比例，使樣品種的所有組分可在最短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)最佳分離。很多文獻(xiàn)報(bào)道是采用一種色譜體系，對(duì)于組分復(fù)雜的樣品，很難得到理想的分離結(jié)果。要么分離時(shí)間太長(zhǎng)，要么分離度太差。而在液相中采用梯度洗脫，可以縮短時(shí)間，提高柱效。

3.2超聲法和索氏提取法的比較。超聲波提取法是近年來(lái)藥典收載應(yīng)用較多的一種樣品處理方法，具有提取效率高，處理時(shí)間短，操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。索氏提取法是利用溶劑回流及虹吸原理，使固體物質(zhì)連續(xù)不斷地被純?nèi)軇┹腿?，既?jié)約溶利萃取效率又高。但最大的不足就是耗時(shí)太長(zhǎng)。本實(shí)驗(yàn)中采用索氏提取法提取的蘆丁含量略高于超聲法，由此可見(jiàn)索氏提取法在本實(shí)驗(yàn)中提取的蘆丁含量高，方法較佳，且節(jié)省試劑。

4結(jié)論

使用高效液相色譜法測(cè)定蘆筍老莖中蘆丁含量，該方法快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，結(jié)果可靠，超聲法提取的蘆丁含量為1.126mg/g，索氏提取法提取的蘆丁含量為1.726mg/g。

蘆丁是我國(guó)一種豐富的天然藥物資源，我們?cè)谂R床應(yīng)用方面有著豐富的經(jīng)驗(yàn)積累，從而為蘆丁的開(kāi)發(fā)奠定了良好的基礎(chǔ)。面對(duì)目前蘆丁在醫(yī)藥臨床方面的巨大作用但原料不足的情況，我們從天然藥物中提取蘆丁，擴(kuò)大蘆丁的原料來(lái)源，更好的促進(jìn)蘆丁在心腦血管等方面的作用，改善人類(lèi)的身體健康狀況，具有巨大的現(xiàn)實(shí)意義。

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作者簡(jiǎn)介：

馬凱（1987—），男，本科，畢業(yè)院校泰山醫(yī)學(xué)院，研究方向：分析檢測(cè)工作。