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    海南地區(qū)妊娠期高血壓疾病患者母胎LMP和HLA-DM基因共享率研究

    2021-06-04 07:32:08韓貞艷陳建林關紅瓊
    中國生育健康雜志 2021年3期
    關鍵詞:母胎子癇基因型

    韓貞艷 陳建林 關紅瓊

    妊娠期高血壓疾病是一種常見的妊娠期疾病,嚴重影響孕婦和胎兒的身體健康,也是孕產(chǎn)婦和圍生兒發(fā)病和死亡的主要原因之一。妊娠期高血壓疾病的發(fā)生有特殊的遺傳學和免疫遺傳學因素[1]。研究發(fā)現(xiàn),人類白細胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)特異性的基因表達與妊娠期高血壓的發(fā)生具有密切的關系[2]。巨大多功能蛋白酶體(large multifunctional protease,LMP) 在物理圖譜上與HLA 基因連鎖,其表達產(chǎn)物參與HLA 抗原加工遞呈。研究發(fā)現(xiàn)LMP和HLA-DM與孕婦重度子癇前期發(fā)生有關,且夫妻間的基因共享與疾病發(fā)生具有顯著關系[3]。也有研究發(fā)現(xiàn),母胎共享LMP基因與重度子癇前期有關[4]。但是,母胎LMP和HLA-DM基因共享與妊娠期高血壓疾病發(fā)生是否存在關聯(lián)尚無定論。不同地區(qū)人群存在基因多態(tài)性,基因表達存在一定的差異[5]。本研究針對海南地區(qū)妊娠期高血壓疾病患者母胎LMP和HLA-DM基因共享率進行了相關研究,期望為臨床診斷和治療提供幫助。對于基因篩查,早期疾病預防具有重要的臨床意義。

    對象與方法

    一、研究對象

    選擇2016年8月—2018年8月在海南醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院產(chǎn)科住院分娩的妊娠期高血壓疾病母胎共60對,所有患者依據(jù)《妊娠期高血壓疾病診治指南(2015)》[6]確診為妊娠期高血壓疾病。年齡(26~42)歲,平均年齡(30.1±3.2)歲,平均分娩孕周(35.4±3.7)周。排除糖尿病、慢性高血壓及嚴重心腦血管疾病病史,精神障礙類疾病史,存在不良生活習慣(如吸煙、酗酒、濫用藥物)。另外選擇在同期本院分娩的正常產(chǎn)婦和胎兒200對作為對照組,年齡(23~40)歲,平均年齡(28.6±5.2)歲,平均分娩孕周(36.31±2.88)周。兩組研究對象一般基本資料沒有統(tǒng)計學差異(P>0.05)。

    二、研究方法

    1. DNA提取與保存:所有研究對象進行血樣采集,用EDTA抗凝采血管抽取孕婦靜脈血2 mL及胎盤娩出前臍靜脈血2 mL,離心分離血漿,采用酚/氯法提取外周血白細胞DNA。

    2.基因檢測:首先進行PCR 擴增:引物設計、PCR反應條件如表1所示。PCR擴增后進行基因測序。

    3.基因分型及母胎共享測定:采用LMP和HLA基因數(shù)據(jù)庫,通過Utype分型軟件對測序峰圖進行序列分析確定基本基因型。母胎同時存在相關的LMP和HLA基因型即可認定為母胎共享。

    表1 HLA-DM、LMP各位引物、探針序列及檢測方法Table 1 HLA-DM, LMP primers, probe sequences and detection methods

    結 果

    一、妊娠期高血壓疾病患者與對照組母胎共享HLA-DM和LMP各基因型數(shù)量比較

    通過比較妊娠期高血壓疾病患者和正常產(chǎn)婦母胎共享HLA-DM和LMP各基因型數(shù)量,結果發(fā)現(xiàn),當HLA-DM為2個共享時,妊娠期高血壓疾病組比例明顯高于正常組,具有顯著性差異(P<0.01)。當LMP為4個共享時,妊娠期高血壓疾病比例明顯高于正常組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),具體見表2所示。

    表2 妊娠期高血壓疾病患者與對照組母胎共享HLA-DM和LMP各基因型數(shù)量比較[例(%)]Table 2 Comparison of the number of HLA-DM and LMP genotypes between women with pregnancy-induced hypertension and controls[n(%)]

    二、HLA-DM各位點基因型在兩組母胎間共享率比較

    通過比較HLA-DM各位點基因型在兩組母胎間共享率,結果發(fā)現(xiàn),在HLA-DMB* 0103位點妊娠期高血壓疾病組患者基因共享率最高,與對照組比較具有顯著性差異(P<0.05)。其余位點共享率沒有顯著性差異(P>0.05),如表3所示。

    表3 HLA-DM各位點基因型在兩組母胎間共享率比較[例(%)]Table 3 Comparison of the sharing rate of HLA-DM each genotype between women with pregnancy-induced hypertension and controls[n(%)]

    三、LMP各位點基因型在兩組母胎間共享率比較

    妊娠期高血壓疾病患者LMP2-R/H基因型共享率明顯高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。其他LMP各位點基因共享率沒有統(tǒng)計學差異(P>0.05),如表4所示。

    表4 LMP各位點基因型在兩組母胎間共享率比較[例(%)]

    討 論

    妊娠期高血壓疾病屬于孕婦常見的高危疾病,是孕產(chǎn)婦死亡的主要原因之一。妊娠期高血壓疾病與基因相關。眾所周知,胎兒攜帶一半父親基因,妊娠的正常需要依賴于母體的免疫耐受。在妊娠過程中,基因共享率越高,母胎相容性越大,那么, 母體就不能識別胚胎抗原,就不能產(chǎn)生封閉抗體, 胚胎得不到封閉抗體的保護而遭到了排斥, 即產(chǎn)生病理妊娠, 如:流產(chǎn)、不孕、子癇前期、早產(chǎn)等。因此,研究母胎基因共享率,對于早期預防和診斷孕婦相關疾病具有重要的意義。

    HLA-DM是早期發(fā)現(xiàn)的一個基因位點,具有維持未裝載抗原肽的空MHC-II類分子的穩(wěn)定。同時具有促進MHC-II類分子相關穩(wěn)定和鏈胎的釋放、增強CD4細胞識別和延長抗原肽暴露時間[7]。近年研究發(fā)現(xiàn)HLA-DM與子癇前期的發(fā)生具有一定關系。朱薏[8]等研究發(fā)現(xiàn),子癇前期夫婦雙方共享2個HLA-DM等位基因,子癇前期比例明顯升高,說明HLA-DM夫婦基因共享與子癇前期發(fā)病存在一定關系。但是,HLA-DMA和HLA-DMB的基因共享率與妊娠期高血壓疾病的關系尚不得知。本研究結果發(fā)現(xiàn),妊娠期高血壓患者存在HLA-DM為2個共享的比例更高,同時HLA- DMB* 0103位點的比例也高于正常人,說明如果存在HLA-DM共享且超過2個以上,孕婦出現(xiàn)妊娠期高血壓發(fā)病的風險較高。同時,HLA-DMB* 0103共享率高可能與妊娠期高血壓疾病發(fā)病存在密切關系。

    LMP基因是一種能夠加工抗原酶體的亞基,位于人的第6對染色體上的MHC區(qū)域上。編碼兩個活性蛋白LMP2和LMP7。LMP基因使不同個體對同一抗原的免疫應答表現(xiàn)出個體差異,或保護性免疫傾向,或免疫耐受傾向,或自身免疫傾向[9]。張嵩卉[10]等研究發(fā)現(xiàn),LMP基因多態(tài)性及其在母胎間共享與子癇前期有顯著關聯(lián)。但沒有文獻報道LMP基因與妊娠期高血壓疾病的關系。本研究發(fā)現(xiàn),當LMP為4個共享時,妊娠期高血壓疾病比例顯著高于正常組。同時,妊娠期高血壓疾病患者LMP2-R/H基因型共享率顯著高于對照組。在妊娠期高血壓母胎存在LMP基因共享的比例較高,與妊娠期高血壓疾病發(fā)病存在一定的關系。

    綜上所述,海南地區(qū)妊娠期高血壓疾病發(fā)病與母胎HLA-DM和LMP共享率具有一定的關系,母胎HLA-DM、LMP基因共享率高對妊娠期高血壓疾病的發(fā)病率有重要影響。

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