地塞米松對(duì)骨關(guān)節(jié)炎細(xì)胞模型基質(zhì)金屬蛋白酶的抑制作用

陳光耀，陳嘉琪，姚傳輝，徐 愿，羅 靜，鄢澤然，陶慶文

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京100029；2.中日友好醫(yī)院中醫(yī)風(fēng)濕病科，免疫炎性疾病北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100029）

骨關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis，OA）是一種以關(guān)節(jié)軟骨退變、骨贅形成及軟骨下骨硬化為特征的退行性病變［1］。研究表明OA與年齡、肥胖及關(guān)節(jié)創(chuàng)傷等一系列因素關(guān)系密切［2，3］。目前，越來(lái)越多證據(jù)表明炎癥反應(yīng)與骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生及長(zhǎng)期存在有密切關(guān)系，尤其在OA早期，軟骨細(xì)胞及滑膜細(xì)胞分泌的相關(guān)炎性細(xì)胞因子發(fā)揮了至關(guān)重要的作用［4，5］。軟骨細(xì)胞在白介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等炎性細(xì)胞因子的刺激下，通過(guò)PI3K/AKT、MAPK及NF-κB等途徑刺激分泌OA相關(guān)的基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMPs），并進(jìn)一步造成軟骨基質(zhì)降解是軟骨退變發(fā)生的重要因素［6，7］。

SW1353細(xì)胞最初由美國(guó)模式培養(yǎng)物集存庫(kù)（American type culture collection，ATCC）從一名原發(fā)軟骨肉瘤患者肱骨處提取，該細(xì)胞系在保留了相關(guān)軟骨細(xì)胞特性的同時(shí)能夠無(wú)限增殖。研究表明，該細(xì)胞與人的軟骨細(xì)胞均能夠被炎性因子誘導(dǎo)產(chǎn)生MMPs，因此廣泛用于OA相關(guān)研究［8］。地塞米松（DEX）屬于甾體類(lèi)抗炎藥物，可抑制前列腺素等花生四烯酸代謝產(chǎn)物，同時(shí)促進(jìn)黏多糖合成并抑制其降解酶從而發(fā)揮保護(hù)細(xì)胞間基質(zhì)的作用，在臨床中廣泛用于自身免疫性炎癥性疾病、過(guò)敏性疾病的治療［9，10］。本研究擬通過(guò)地塞米松干預(yù)IL-1β致炎的SW1353 OA細(xì)胞模型，探究地塞米松潛在的軟骨保護(hù)作用，為通過(guò)關(guān)節(jié)腔注射甾體抗炎藥預(yù)防OA提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑

SW1353細(xì)胞（ATCC來(lái)源）購(gòu)買(mǎi)于北京中科質(zhì)檢生物技術(shù)有限公司。其他試劑有：Leibovitiz′s L-15培養(yǎng)基（Gibco，美國(guó)），胎牛血清（ScienCell，美國(guó)），地塞米松（Sigma，美國(guó)），［3-（4，5-dimethylthiazol-2-yl）-5-（3-carboxymethoxyphenyl）-2-（4-sulfo -phenyl）-2H-tetrazolium inner salt，MTS］（Promga，美國(guó)），IL-1β（Peprotech，美國(guó)），磷酸緩沖鹽溶液（Hyclone，美國(guó)），MMP-1抗體（10371-2-AP，Proteintech,美國(guó)），MMP-3抗體（ab53015，Abcam，英國(guó)），MMP-13抗體（ab39012，Abcam，英國(guó)），小鼠抗β-actin抗體（TA-09，中杉金橋，中國(guó)），山羊抗小鼠IgG/辣根酶標(biāo)記（ZB-5305，中杉金橋，中國(guó)），山羊抗兔IgG/辣根酶標(biāo)記（ZB-2301，中杉金橋，中國(guó)），10%變性預(yù)制膠（普利萊，中國(guó)），膜封閉液（索萊寶，中國(guó)），一抗二抗稀釋液（普利萊，中國(guó)），PVDF膜（Millipore，美國(guó)），ECL發(fā)光液（Millipore，美國(guó)），逆 轉(zhuǎn) 錄 試 劑 盒（A 3500，Promga，美 國(guó)），SYBR Green Realtime PCR Master Mix（QPK-201，TOYOBO，日本），Ripa裂解液（索萊寶，中國(guó)），PMSF（索萊寶，中國(guó)），HiPure Total RNA Mini Kit（美基公司，中國(guó)），MMP-1、MMP-3、MMP-13、β-actin引物（擎科生物科技），具體序列見(jiàn)表1。

表1 實(shí)時(shí)定量PCR引物序列Tab 1 Primer sequences of PCR

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)

SW1353于含90%L-15培養(yǎng)基、10%胎牛血清、100μ/mL青霉素及100 mg/mL鏈霉素的完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)，密閉瓶口放置于37℃孵箱中，待細(xì)胞長(zhǎng)滿培養(yǎng)瓶后使用胰酶將細(xì)胞消化后收集細(xì)胞。細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)時(shí)將細(xì)胞種植于96孔板并設(shè)置4個(gè)副孔（每孔2萬(wàn)個(gè)細(xì)胞），PCR及Western Blot實(shí)驗(yàn)將細(xì)胞種植于6孔板中（每孔50萬(wàn)個(gè)細(xì)胞），給予不同濃度地塞米松和（或）10 ng/mL IL-1β進(jìn)行干預(yù)，干預(yù)后使用封口膜封閉培養(yǎng)板。

1.2 MTS法檢測(cè)地塞米松、IL-1β對(duì)SW1353細(xì)胞活性的影響

將收集到的未干預(yù)細(xì)胞加入完全培養(yǎng)基稀釋成20萬(wàn)個(gè)細(xì)胞/mL，充分混勻后將96孔板每孔加入100μL含細(xì)胞培養(yǎng)基，分別加入地塞米松溶液使培養(yǎng)基中地塞米松最終濃度為101～108nmol/L，未加地塞米松溶液組別作為空白對(duì)照組，使用封口膜封閉96孔板于37℃孵箱中培養(yǎng)12 h，每孔加入20μL MTS，1 h后將96孔板置于酶標(biāo)儀中檢測(cè)490 nm波長(zhǎng)下的光密度值。將空白對(duì)照組細(xì)胞活力設(shè)定為100%，并以此為基礎(chǔ)計(jì)算其余各組細(xì)胞活力。104、106、107nmol/L地塞米松組加入或不加入10 ng/mL IL-1β，計(jì)算各組細(xì)胞活力并與空白對(duì)照組比較。

1.3 實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)MMP-1、MMP-3、MMP-13的mRNA表達(dá)

將收集到的細(xì)胞加入完全培養(yǎng)基稀釋成25萬(wàn)個(gè)細(xì)胞/mL，充分混勻后6孔板每孔加入2 mL含細(xì)胞培養(yǎng)基。取不做特殊處理的組別作為空白對(duì)照組，其余各組均加入10 ng/mL IL-1β。IL-1β組不加地塞米松，其余各組分別加入地塞米松，使溶液中 地 塞 米 松 最 終 濃 度 分 別 為101、102、103、104、105、106、107nmol/L，使用封口膜封閉6孔板于37℃孵箱中培養(yǎng)12 h，采用HiPure Total RNA Mini Kit試劑盒進(jìn)行柱式法提取總RN，并進(jìn)一步將1μg總RNA逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA，將SYBR Green Realtime PCR Master Mix、cDNA及引物配置成20μL反應(yīng)體 系，以β-actin作 為 內(nèi) 參 檢 測(cè)MMP-1、MMP-3、MMP-13 mRNA相對(duì)表達(dá)量。

1.4 Western Blot法 檢 測(cè)MMP-1、MMP-3、MMP-13蛋白表達(dá)

實(shí)驗(yàn)分組及干預(yù)方法同PCR實(shí)驗(yàn)，干預(yù)結(jié)束后將1%PMSF加入Ripa裂解液中，棄去培養(yǎng)基后每孔加入Ripa裂解液250μL于冰上裂解25 min，10 000 r/min離心5 min取上清液。將上清液與上樣緩沖液以4∶1的比例進(jìn)行混合，煮沸后離心10 000 r/min離心5 min，取上清液上樣。使用10%變性預(yù)制膠及自帶Hepes電泳緩沖液進(jìn)行電泳，使用70 v電壓進(jìn)行60 min轉(zhuǎn)膜至PVDF膜上，膜封閉液進(jìn)行封閉1 h后，加入相應(yīng)稀釋后的一抗（MMP-1 1∶5 000、MMP-3 1∶1 000、MMP-13 1∶1 000、β-actin 1∶1 000）后4℃進(jìn)行過(guò)夜，使用TBST進(jìn)行清洗后加入相應(yīng)的稀釋后的山羊抗小鼠（兔）IgG/辣根酶標(biāo)記二抗（1∶5 000）孵育1 h，使用TBST清洗后滴加ECL發(fā)光液后進(jìn)行曝光。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用IBM SPSS Statistics 25.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；不同濃度地塞米松組間比較采用單因素方差分析，多重比較采用Dunnett法；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MTS法檢測(cè)地塞米松對(duì)SW1353細(xì)胞的抑制作用

MTS增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示101～107nmol/L地塞米松對(duì)細(xì)胞活性無(wú)明顯影響，108nmol/L地塞米松對(duì)細(xì)胞具有明顯的抑制作用（圖1、表2）；在0、104、106、107nmol/L不同濃度地塞米松干預(yù)下，加入或不加入10 ng/mL IL-1β對(duì)其細(xì)胞活性未見(jiàn)明顯影響（圖2、表3）。因此，本研究選擇地塞米松濃度為101～107nmol/L作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)工作濃度。

2.2 PCR法 檢 測(cè)MMP-1、MMP-3、MMP-13的mRNA表達(dá)

當(dāng)SW1353細(xì)胞加入10 ng/mL的IL-1β后，MMP-1、MMP-3、MMP-13 mRNA的表達(dá)水平明顯升高（6～14倍）。PCR結(jié)果提示使用不同濃度的地塞米松干預(yù)IL-1β誘導(dǎo)的SW1353細(xì)胞后，MMP-1、MMP-3、MMP-13 mRNA的表達(dá)水平有所降低，并呈現(xiàn)出一定的劑量依賴效應(yīng)。如圖3、表4所示，加入102～107nmol/L地塞米松進(jìn)行干預(yù)后，MMP-1的mRNA表達(dá)水平明顯降低，和僅加入IL-1β組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；104～107nmol/L地塞米松干預(yù)后，MMP-3的mRNA表達(dá)明顯減少，和僅加入IL-1β組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.01）；101～107nmol/L地塞米松干預(yù)后，MMP-13的mRNA表達(dá)明顯減少，和僅加入IL-1β組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.01）。加入104nmol/L地塞米松組與加入103nmol/L地塞米松組相比，MMP-1、MMP-3、MMP-13 mRNA表達(dá)水平明顯降低，推測(cè)該濃度的地塞米松可能是適宜于 干預(yù)IL-1β誘導(dǎo)的SW1353細(xì)胞的最適宜濃度。

圖1 不同濃度地塞米松干預(yù)SW1353細(xì)胞12 h后細(xì)胞活力Fig 1 Cell viability of SW 1353 cells 12 h after treatment of dexamethasone at different concentrations

圖2 加入或不加入IL-1β不同濃度地塞米松培養(yǎng)SW1353細(xì)胞12 h細(xì)胞活力Fig 2 Cell viability of SW1353 cells 12 h after treatment of dexamethasone with or without IL-1β

表2 101～108 nmol/L地塞米松培養(yǎng)SW1353細(xì)胞12 h后細(xì)胞活力（±s）Tab 2 Cell viability of SW1353 cells 12 h after treatment of 101～108 nmol/L dexamethasone（±s）

表2 101～108 nmol/L地塞米松培養(yǎng)SW1353細(xì)胞12 h后細(xì)胞活力（±s）Tab 2 Cell viability of SW1353 cells 12 h after treatment of 101～108 nmol/L dexamethasone（±s）

注：q：Dunnett檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量。#不同濃度地塞米松（DEX）組分別與空白對(duì)照組比較。

指標(biāo)細(xì)胞活力q P#空白對(duì)照組100.00±9.29 101 DEX 102 DEX 103 DEX 104 DEX 105 DEX 106 DEX 107 DEX 108 DEX 69.18±10.04 4.49 0.001--101.21±10.48 0.18 1.000 101.93±13.81 0.28 1.000 101.88±12.98 0.27 1.000 101.80±4.06 0.26 1.000 98.40±5.27 0.23 1.000 100.96±7.76 0.14 1.000 99.16±9.48 0.12 1.000

表3 加入或不加入IL-1β不同濃度地塞米松（101～107 nmol/L）培養(yǎng)SW1353細(xì)胞12 h細(xì)胞活力（±s）Tab 3 Cell viability of SW1353 cells 12 h after treatment of 101～107 nmol/L dexamethasone with or without 10 ng/m L IL-1β（±s）

表3 加入或不加入IL-1β不同濃度地塞米松（101～107 nmol/L）培養(yǎng)SW1353細(xì)胞12 h細(xì)胞活力（±s）Tab 3 Cell viability of SW1353 cells 12 h after treatment of 101～107 nmol/L dexamethasone with or without 10 ng/m L IL-1β（±s）

注：△加入10 ng/m L IL-1β干預(yù)，q：Dunnett檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量，#不同濃度地塞米松（DEX）組分別與空白對(duì)照組比較。

指標(biāo)空白對(duì)照組IL-1β組104 DEX 104△DEX 106 DEX 106△DEX 107 DEX 107△DEX細(xì)胞活力100.00±9.29 101.86±7.36 101.80±4.06 97.3±12.88 99.16±9.48 103.34±6.73 69.18±10.04 68.62±3.37 5.26 0.000 q P#--0.31 1.000 0.30 1.000 0.45 0.997 0.14 1.000 0.56 0.991 5.16 0.000

圖3 101～107 nmol/L地塞米松干預(yù)IL-1β誘導(dǎo)后的SW1353細(xì)胞MMP-1、MMP-3、MMP-13 mRNA表達(dá)水平（n=3）Fig 3 Expression level of MMP-1、MMP-3、MMP-13 mRNA of SW1353 cells treated with 101-107 nmol/L dexamethasone and 10 ng/m L IL-1β（n=3）

表4 101～107nmol/L地塞米松溶液干預(yù)IL-1β刺激后的SW1353細(xì)胞MMP-1、MMP-3、MMP-13mRNA表達(dá)（±s）Tab4 ExpressionlevelofMMP-1、MMP-3、MMP-13mRNAof10ng/mLIL-1βinducedSW1353cellstreatedwith101-107nmol/L dexamethasone（±s）

表4 101～107nmol/L地塞米松溶液干預(yù)IL-1β刺激后的SW1353細(xì)胞MMP-1、MMP-3、MMP-13mRNA表達(dá)（±s）Tab4 ExpressionlevelofMMP-1、MMP-3、MMP-13mRNAof10ng/mLIL-1βinducedSW1353cellstreatedwith101-107nmol/L dexamethasone（±s）

注：*q為Dunnett檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量，☆白介素-1β（IL-1β）組與空白對(duì)照組采用t檢驗(yàn)。#不同濃度地塞米松（DEX）組分別與IL-1β組進(jìn)行比較。

指標(biāo)MMP-1mRNA q P#ˉMMP-3mRNA q P#MMP-13mRNA q P#107DEX 1.70±0.35 13.42 0.000 4.20±0.57 11.08 0.000 1.18±0.14 18.10 0.000空白對(duì)照組1.00±0.00--1.00±0.00--1.00±0.00--IL-1β組7.28±0.79 13.79☆0.005 12.63±0.89 22.75☆0.002 13.10±1.53 13.70☆0.005 101DEX 6.62±0.72 1.57 0.486 11.25±1.23 1.81 0.347 9.57±1.12 5.35 0.000 102DEX 5.69±0.62 3.82 0.008 12.26±1.34 0.49 0.996 9.16±1.07 5.98 0.000 103DEX 4.99±0.54 5.51 0.000 10.77±1.18 2.45 0.122 6.26±0.62 10.38 0.000 104DEX 2.19±0.24 12.22 0.000 6.25±0.69 8.37 0.000 1.84±0.22 17.09 0.000 105DEX 1.96±0.21 12.79 0.000 5.78±0.63 9.00 0.000 1.63±0.14 17.41 0.000 106DEX 1.80±0.20 13.16 0.000 4.57±0.50 10.59 0.000 1.55±0.08 17.53 0.000

2.3 Westernblot法 檢 測(cè)MMP-1、MMP-3、MMP-13的蛋白表達(dá)水平

Westernblot結(jié)果顯示，相對(duì)于空白對(duì)照組，使用10ng/mLIL-1β刺激后，SW1353細(xì)胞MMP-1、MMP-3、MMP-1水平明顯增高；使用104nmol/L的地塞米松干預(yù)后，和僅添加IL-1β組SW1353細(xì)胞比，MMP-1、MMP-3、MMP-1蛋白表達(dá)水平明顯降低。見(jiàn)表5，圖4、5。

表5 104nmol/L地塞米松溶干預(yù)IL-1β刺激后的SW1353細(xì)胞后MMP-1、MMP-3、MMP-1蛋白表達(dá)westernblot灰度值（±s）Tab5 GreyvalueofMMP-1，MMP-3，MMP-13proteinof IL-1βinducedSW1353cellstreatedwith104nmol/Ldexamethasone（±s）

表5 104nmol/L地塞米松溶干預(yù)IL-1β刺激后的SW1353細(xì)胞后MMP-1、MMP-3、MMP-1蛋白表達(dá)westernblot灰度值（±s）Tab5 GreyvalueofMMP-1，MMP-3，MMP-13proteinof IL-1βinducedSW1353cellstreatedwith104nmol/Ldexamethasone（±s）

注：#白介素-1β（IL-1β）組和空白對(duì)照組比較，DEX（地塞米松）組和IL-1β組比較。

指標(biāo)MMP-1蛋白t P#MMP-3蛋白t P#MMP-13蛋白t P#空白對(duì)照組1.00±0.00--104DEX 3.533±0.57 2.92 0.043 1.24±0.07 8.91 0.001 1.50±0.21 3.98 0.016 1.00±0.00--1.00±0.00--IL-1β組5.267±0.86 8.62 0.013 2.74±0.28 10.62 0.009 2.94±0.59 5.68 0.030

圖4 104nmol/L的地塞米松干預(yù)IL-1β誘導(dǎo)SW1353細(xì)胞后MMP-1、MMP-3、MMP-13蛋白表達(dá)水平Fig4 ExpressionlevelofMMP-1、MMP-3、MMP-13proteinsofSW1353cellstreatedwith104nmol/LdexamethasoneandIL-1β

圖5 104nmol/L地塞米松溶干預(yù)IL-1β誘導(dǎo)SW1353細(xì)胞后MMP-1、MMP-3、MMP-13蛋白表達(dá)westernblot灰度值Fig5 GreyvalueofMMP-1，MMP-3，MMP-13proteinofIL-1βinducedSW1353cellstreatedwith104nmol/Ldexamethasone

3 討論

活細(xì)胞中產(chǎn)生的還原型輔酶Ⅱ（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH）及煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸，能夠?qū)TS還原為有色的甲臢，通過(guò)檢測(cè)其在490 nm的背景吸光度值可間接反映出活細(xì)胞數(shù)量［11］。本研究通過(guò)MTS實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，101～107nmol/L地塞米松對(duì)SW1353細(xì)胞活性未見(jiàn)明顯的影響，當(dāng)?shù)厝姿蓾舛仍黾拥?08nmol/L后細(xì)胞活性明顯被抑制，故本研究將地塞米松實(shí)驗(yàn)濃度設(shè)定在101～107nmol/L。

細(xì)胞外基質(zhì)與細(xì)胞之間存在相互作用并對(duì)組織結(jié)構(gòu)進(jìn)行支持，因此在機(jī)體生理過(guò)程中發(fā)揮重要作用［12，13］。軟骨由少量軟骨細(xì)胞及大量細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)成，在相關(guān)蛋白酶的催化作用下，細(xì)胞外基質(zhì)平衡被打破導(dǎo)致軟骨被降解是OA發(fā)生的關(guān)鍵因素［14，15］。MMPs依賴Ca2+、Zn2+等金屬離子作為輔助因子進(jìn)行活化，與細(xì)胞外基質(zhì)降解有密切關(guān)聯(lián)，其中膠原酶MMP-1、MMP-13及基質(zhì)溶解素酶MMP-3與OA關(guān)系最為密切［16-18］。本研究表明SW1353細(xì) 胞 被IL-1β誘 導(dǎo) 后，MMP-1、MMP-3、MMP-13在mRNA及蛋白表達(dá)水平均明顯上升，與之前研究結(jié)果一致。

在使用不同濃度地塞米松進(jìn)行干預(yù)后發(fā)現(xiàn)，較低濃度的地塞米松（MMP-13 10 nmol/L、MMP-1 100 nmol/L、MMP-3 1 000 nmol/L）即可對(duì)MMP具有一定的抑制作用，且具有明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。其中使用104nmol/L地塞米松進(jìn)行干預(yù)后，MMP-1、MMP-3、MMP-13 mRNA的 表 達(dá) 量 較10、102、103nmol/L地塞米松干預(yù)后明顯降低，結(jié)合105～107nmol/L地塞米松實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測(cè)在本實(shí)驗(yàn)中104nmol/L濃度的地塞米松可能是達(dá)到較大抑制MMPs mRNA表達(dá)效果的最小劑量。進(jìn)一步使用104nmol/L濃度的地塞米松對(duì)MMP-1、MMP-3、MMP-13 mRNA蛋白水平的干預(yù)作用進(jìn)行探究，Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，該濃度的地塞米松可以明顯抑制MMP-1、MMP-3、MMP-13 mRNA在蛋白水平的表達(dá)。

關(guān)節(jié)外傷及類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者滑膜等組織產(chǎn)生IL-1β、TNF-α等炎性細(xì)胞因子［19，20］，進(jìn)入關(guān)節(jié)腔后可以誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞產(chǎn)生MMP-1、MMP-3、MMP-13，從而導(dǎo)致軟骨基質(zhì)平衡破壞，進(jìn)而造成OA的發(fā)生。本研究結(jié)果提示，小劑量的地塞米松即可延緩這些炎癥反應(yīng)的發(fā)生。推測(cè)在炎癥反應(yīng)初期進(jìn)行小劑量的甾體抗炎藥注射或可有效阻止OA的進(jìn)展，但需動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床研究進(jìn)一步驗(yàn)證。

本試驗(yàn)通過(guò)IL-1β致炎SW1353細(xì)胞制造OA細(xì)胞模型，并使用PCR、Western Blot方法檢測(cè)地塞米松干預(yù)造模細(xì)胞后基質(zhì)金屬蛋白酶的變化，探索了地塞米松潛在的軟骨保護(hù)作用。本文未對(duì)與骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的其他細(xì)胞因子進(jìn)行檢測(cè)，也未能更進(jìn)一步地通過(guò)通路探索地塞米松抑制MMPs的具體機(jī)制。