抑瘤素M、Id?1、Foxp3在胃癌組織中的表達(dá)及與病理特征的相關(guān)性

黃莎莎 韓崢 譚潔 劉蒙 田霞

武漢大學(xué)附屬同仁醫(yī)院（武漢市第三醫(yī)院）消化內(nèi)科（武漢430060）

胃癌是臨床常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，具有高發(fā)病率、高病死率的特點(diǎn)，被列為十大惡性腫瘤首位［1-2］。據(jù)相關(guān)流行病學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，我國(guó)胃癌發(fā)病率一直居高不下，每年新增病例連年上升［3］。中老年人群為胃癌發(fā)病主要人群，但是近年來(lái)我國(guó)胃癌患者年齡逐漸趨于年輕化，引起廣大專(zhuān)家學(xué)者的重視［4］。胃癌發(fā)病早期無(wú)特異性、明顯臨床癥狀，難以引起患者重視，致使胃癌癥狀早期診斷率較低，確診時(shí)病情已出現(xiàn)惡化現(xiàn)象，導(dǎo)致治療難度變大，患者預(yù)后較差，因此早診斷、早治療對(duì)胃癌患者臨床治療以及預(yù)后改善具有重要意義［5-6］。本研究中對(duì)胃癌患者手術(shù)切除癌組織標(biāo)本中抑瘤素M、Id?1、Foxp3 表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，旨在探究抑瘤素M、Id?1、Foxp3 在胃癌組織中的表達(dá)及與病理特征相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2019年6月?2020年6月于我院進(jìn)行手術(shù)治療的胃癌患者72 例，包括男46 例，女26 例，年齡45 ～67 歲，平均年齡（56.2±8.9）歲。72例胃癌患者包括Ⅰ期患者26例，Ⅱ期患者27 例，Ⅲ期患者11 例，Ⅳ期患者8 例；漿膜內(nèi)浸潤(rùn)患者47 例，漿膜外浸潤(rùn)患者25 例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者27 例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者45 例；癌組織分化程度：高分化41 例，中分化22 例，低分化9 例。本研究所有患者及家屬均知情同意，并獲我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)對(duì)胃癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)［7］，無(wú)手術(shù)禁忌癥，均接受手術(shù)治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）病歷資料不全者；（2）心、肝、腎、肺等功能不全者；（3）3 個(gè)月內(nèi)接受過(guò)相關(guān)治療者；（4）并發(fā)其他消化系統(tǒng)疾病患者；（5）接受過(guò)放化療治療患者。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集、免疫組化染色手術(shù)切除胃癌患者癌組織、距癌組織5 cm 癌旁組織制作標(biāo)本，4%中性福爾馬林固定、石蠟包埋，厚度3 μm，連續(xù)切片作免疫組化標(biāo)記。待測(cè)標(biāo)本脫蠟、水化處理后浸泡于0.01 mol/L、95 ℃枸櫞酸緩沖液中，3%H2O2環(huán)境下培育10 min，滴入山羊血清，26 ℃環(huán)境中培養(yǎng)30 min，抽離封閉液、添加一抗，5 ℃環(huán)境過(guò)夜培養(yǎng)，次日加入二抗，37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)0.5 h，清洗后進(jìn)行DAB 顯色、封片。

1.2.2 抑瘤素M、Id?1、Foxp3相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)使用Western blot 法檢測(cè)。提取50 μg 蛋白，煮沸5 min使蛋白變性后用SDS?PAGE 凝膠電泳，然后依據(jù)蛋白分子大小把凝膠切開(kāi)并轉(zhuǎn)移至PVDF 膜上，用Western 封閉液把待測(cè)蛋白和內(nèi)參蛋白封閉90 min在室內(nèi)，按1∶1 000 加到待測(cè)蛋白抗體，內(nèi)參抗體以1∶2 000 加入抗體，孵育過(guò)夜，使用Western 洗滌液洗滌5次，每10 min 1次。按1∶5 000加入稀釋山羊抗兔IgG，孵育60 min 室溫水平搖床，Western 洗滌液洗滌5 次，每10 min 1 次。經(jīng)過(guò)ECL 顯色和曝光后，進(jìn)行BIO?RAD 成像，使用Image J 圖像分析系統(tǒng)檢測(cè)條帶的灰度值，以?xún)?nèi)參條帶灰度值與蛋白比值為結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理使用SPSS 26.0 軟件，計(jì)量資料以（）描述，多組對(duì)比行F檢驗(yàn)，組間對(duì)比行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P＜0.05 具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。相關(guān)性采用Pearson 相關(guān)性分析。

2 結(jié)果

2.1 抑瘤素M、Id?1、Foxp3 在胃癌組織、癌旁組織中的表達(dá)對(duì)比如表1、圖1、2 所示，與癌旁組織相比，胃癌組織中抑瘤素M、Id?1 相對(duì)表達(dá)量較高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與癌旁組織相比，胃癌組織中Foxp3 相對(duì)表達(dá)量較低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 抑瘤素M、Id?1、Foxp3 表達(dá)與胃癌患者病理特征的關(guān)系如表2 所示，與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者相比，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌患者抑瘤素M、Id?1 相對(duì)表達(dá)量較高，F(xiàn)oxp3 相對(duì)表達(dá)量較低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與漿膜內(nèi)浸潤(rùn)患者相比，漿膜外浸潤(rùn)胃癌患者抑瘤素M、Id?1 相對(duì)表達(dá)量較高，F(xiàn)oxp3 相對(duì)表達(dá)量較低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與Ⅰ、Ⅱ期患者相比，Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者抑瘤素M、Id?1 相對(duì)表達(dá)量較高，F(xiàn)oxp3 相對(duì)表達(dá)量較低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與高分化患者相比，中分化胃癌患者抑瘤素M、Id?1 相對(duì)表達(dá)量較高，F(xiàn)oxp3 相對(duì)表達(dá)量較低；與中分化患者相比，低分化胃癌患者抑瘤素M、Id?1 相對(duì)表達(dá)量較高，F(xiàn)oxp3 相對(duì)表達(dá)量較低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 抑瘤素M、Id?1、Foxp3 在胃癌組織、癌旁組織中的表達(dá)對(duì)比Tab.1 The expression contrast of oncostatin M，Id?1 and Foxp3 between gastric cancer tissues and adjacent tissues x±s

2.3 胃癌組織中抑瘤素M、Id?1、Foxp3 表達(dá)相關(guān)性如圖3 所示，對(duì)胃癌組織中抑瘤素M、Id?1、Foxp3 表達(dá)相關(guān)性進(jìn)行分析。胃癌組織中抑瘤素M、Id?1 表達(dá)呈正相關(guān)（r= 0.310，P= 0.008）；胃癌組織中抑瘤素M、Foxp3 表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.422，P= 0.001）；胃癌組織中Id?1、Foxp3 表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.308，P=0.009）。

圖1 抑瘤素M、Id?1、Foxp3 在癌旁組織中表達(dá)免疫組化染色圖Fig.1 Immunohistochemical staining of tumor suppressor m，Id?1 and Foxp3 in paracancerous tissues

圖2 抑瘤素M、Id?1、Foxp3 在癌組織中表達(dá)免疫組化染色圖Fig.2 Immunohistochemical staining of tumor suppressor m，Id?1 and Foxp3 in cancer tissue

3 討論

臨床醫(yī)學(xué)將發(fā)生于機(jī)體胃粘膜組織的惡性腫瘤統(tǒng)稱(chēng)為胃癌，具有發(fā)病率高、惡性程度高、治療難度大、病死率高的特點(diǎn)。世界衛(wèi)生組織調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，胃癌發(fā)病率、病死率均高居所有惡性腫瘤前兩位［8-9］。目前胃癌發(fā)病機(jī)制尚未明確，有研究表示，家族遺傳、生活環(huán)境、癌前病變、飲食習(xí)慣等均為胃癌發(fā)病危險(xiǎn)因素［10］。胃癌患者發(fā)病早期無(wú)明顯臨床癥狀，早期診斷率較低，隨著病情的不斷發(fā)展和惡化，胃癌患者主要臨床表現(xiàn)為上腹部疼痛、不適、消化道出血、貧血、消瘦等，嚴(yán)重影響患者身體健康和生活質(zhì)量，而此時(shí)臨床治療難度大幅提升，對(duì)患者臨床治療和預(yù)后造成嚴(yán)重影響［11-12］。因此，越來(lái)越多的專(zhuān)家學(xué)者開(kāi)始通過(guò)分子生物學(xué)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)等途徑對(duì)胃癌發(fā)病機(jī)制進(jìn)行研究［13-14］。

作為一種多功能細(xì)胞因子，抑瘤素M 是IL?6細(xì)胞因子家族的重要組成成員，主要由機(jī)體巨噬細(xì)胞、T 細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等分泌產(chǎn)生，在細(xì)胞多種生物學(xué)行為中均具有重要作用［15-16］。有研究表示，抑瘤素M 與其受體相結(jié)合，介導(dǎo)信號(hào)傳導(dǎo)，對(duì)細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)等生物學(xué)行為以及機(jī)體炎癥反應(yīng)、免疫系統(tǒng)變化以及細(xì)胞外基質(zhì)重塑中均具有重要作用。近年來(lái)，越來(lái)越多的學(xué)者致力于抑瘤素M表達(dá)變化與惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)性的研究。有研究表示，抑瘤素M 在不同惡性腫瘤組織中具有不同的作用，在宮頸癌、卵巢癌等婦科惡性腫瘤中，抑瘤素M 能夠促進(jìn)癌細(xì)胞增殖、侵襲，對(duì)疾病發(fā)展起到促進(jìn)作用，但是關(guān)于抑瘤素M 表達(dá)變化與胃癌發(fā)生演進(jìn)相關(guān)性的研究還鮮有報(bào)道。本文研究結(jié)果顯示，相比癌旁組織，胃癌癌組織中抑瘤素M 相對(duì)表達(dá)量較高，說(shuō)明抑瘤素M 在胃癌中呈現(xiàn)異常高表達(dá)，可能參與胃癌的發(fā)生發(fā)展。本文研究還發(fā)現(xiàn)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、漿膜外浸潤(rùn)、Ⅲ、Ⅳ期、低分化胃癌患者抑瘤素M 相對(duì)表達(dá)量較高，這一研究結(jié)果說(shuō)明抑瘤素M 表達(dá)變化與胃癌組織淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)程度、病理分期、分化程度等臨床特征具有一定的相關(guān)性，參與胃癌的發(fā)生演進(jìn)過(guò)程因此，抑瘤素M 能夠作為胃癌潛在的診斷指標(biāo)和治療靶點(diǎn)，為胃癌癥狀的診斷、臨床治療提供新的研究方向。

表2 抑瘤素M、Id?1、Foxp3 表達(dá)與胃癌患者病理特征的關(guān)系Tab.2 Relationship between expression of oncostatin M，Id?1 and Foxp3 and pathological features of gastric cancer patients x±s

圖3 胃癌組織中抑瘤素M、Id?1、Foxp3 表達(dá)相關(guān)性Fig.3 Correlation between expression of oncostatin M，Id?1 and Foxp3 in gastric cancer

Id?1 是DNA 結(jié)合抑制因子家族的重要組成成員［17-18］。有研究表示，Id?1 具有永生性基因的特性，具有調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、周期分布的作用。大量實(shí)驗(yàn)研究表示，Id?1 在肝癌、乳腺癌等惡性腫瘤中呈現(xiàn)異常高表達(dá)，并且其表達(dá)變化與癌組織分化程度具有一定相關(guān)性［19-20］。本文研究結(jié)果顯示，相比癌旁組織，胃癌癌組織中Id?1 相對(duì)表達(dá)量較高，說(shuō)明Id?1 在胃癌中呈現(xiàn)異常高表達(dá)，可能參與胃癌的發(fā)生發(fā)展。本文研究中還對(duì)Id?1 在不同臨床病理特征胃癌中的表達(dá)進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、漿膜外浸潤(rùn)、Ⅲ、Ⅳ期、低分化胃癌患者Id?1 相對(duì)表達(dá)量較高，這一研究結(jié)果說(shuō)明Id?1表達(dá)變化與胃癌癌組織淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)程度、病理分期、分化程度等臨床特征具有一定的相關(guān)性，參與胃癌的發(fā)生演進(jìn)過(guò)程。因此，本研究認(rèn)為Id?1可作為胃癌潛在的診斷指標(biāo)和治療靶點(diǎn)，檢測(cè)Id?1表達(dá)對(duì)胃癌的診斷、臨床治療具有重要意義。

Foxp3 是Fox 家族的重要組成成員，具有調(diào)節(jié)Treg 細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育的作用［21-23］。大量研究結(jié)果表明，F(xiàn)oxp3 在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)出現(xiàn)異常，因此Foxp3表達(dá)變化與腫瘤組織發(fā)生發(fā)展之間相關(guān)性成為許多專(zhuān)家學(xué)者的研究方向。有研究表明，F(xiàn)oxp3 在乳腺癌、肺癌等惡性腫瘤中均呈異常表達(dá)，其表達(dá)變化與癌組織細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移具有密切聯(lián)系［24-25］。本文研究結(jié)果顯示，相比癌旁組織，胃癌癌組織中Foxp3 相對(duì)表達(dá)量較低，說(shuō)明Foxp3 表達(dá)變化參與胃癌的發(fā)生發(fā)展。本文研究還發(fā)現(xiàn)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、漿膜外浸潤(rùn)、Ⅲ、Ⅳ期、低分化胃癌患者Foxp3相對(duì)表達(dá)量較低，這一研究結(jié)果說(shuō)明Foxp3 低表達(dá)與胃癌癌組織淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)程度、病理分期、分化程度等臨床特征具有一定的相關(guān)性，參與胃癌的發(fā)生演進(jìn)過(guò)程，F(xiàn)oxp3 能夠作為胃癌潛在的診斷指標(biāo)和治療靶點(diǎn)，為胃癌癥狀的診斷、臨床治療提供了新的研究方向。

本文研究還對(duì)抑瘤素M、Id?1、Foxp3 在胃癌組織中表達(dá)相關(guān)性進(jìn)行研究，結(jié)果顯示，抑瘤素M、Id?1、Foxp3 在胃癌組織中具有一定相關(guān)性，說(shuō)明抑瘤素M、Id?1、Foxp3 可能共同參與胃癌的發(fā)展演進(jìn)。

綜上所述，抑瘤素M、Id?1、Foxp3 在胃癌中均呈異常表達(dá)，三者相對(duì)表達(dá)量變化與胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、浸潤(rùn)程度、TNM 分期、分化程度相關(guān)，三者表達(dá)之間具有一定相關(guān)性，共同參與胃癌發(fā)展演進(jìn)過(guò)程，并且抑瘤素M、Id?1、Foxp3 能夠作為胃癌潛在的診斷指標(biāo)和治療靶點(diǎn)，為胃癌的診斷、治療提供新的研究方向。