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    微生物在地下水污染修復(fù)中的應(yīng)用研究進(jìn)展*

    2021-06-01 10:04:24梁永平鄒勝章周長(zhǎng)松樊連杰繆雄誼
    環(huán)境污染與防治 2021年5期
    關(guān)鍵詞:菌群污染物生物

    李 軍 梁永平 鄒勝章 周長(zhǎng)松 樊連杰,3 # 繆雄誼 謝 浩

    (1.中國(guó)地質(zhì)科學(xué)院巖溶地質(zhì)研究所,自然資源部/廣西巖溶動(dòng)力學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣西 桂林 541004;2.河北建筑工程學(xué)院,河北省水質(zhì)工程與水資源綜合利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,河北 張家口 075000;3.桂林理工大學(xué)環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院,廣西 桂林 541006)

    微生物修復(fù)是指利用天然存在的或可培養(yǎng)的功能微生物菌群[1],在適宜環(huán)境條件下通過(guò)自身代謝作用,將污染物降解成無(wú)毒或低毒物質(zhì)的一種修復(fù)技術(shù)。目前,地下水的微生物修復(fù)研究主要包括自然衰減修復(fù)和生物刺激修復(fù)。自然衰減修復(fù)是指地下水中天然存在的微生物通過(guò)代謝作用在合理時(shí)間段內(nèi)實(shí)現(xiàn)污染物濃度和總量的減少[2],當(dāng)自然衰減不足以應(yīng)對(duì)污染場(chǎng)地修復(fù)要求時(shí),就需人為添加修復(fù)劑或功能菌群進(jìn)行環(huán)境調(diào)控,即生物刺激修復(fù)。生物刺激修復(fù)通過(guò)向污染地下水中添加修復(fù)劑,為功能菌群提供足夠的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、能量和電子等以達(dá)到污染物快速降解的目的[3-6]。

    本研究重點(diǎn)介紹微生物在地下水污染自然衰減修復(fù)和生物刺激修復(fù)中的關(guān)鍵問(wèn)題和研究進(jìn)展,特別是針對(duì)地下水不同類型污染物特點(diǎn)的修復(fù)研究,以期為地下水污染修復(fù)的基礎(chǔ)研究和實(shí)際應(yīng)用提供新思路。

    1 自然衰減修復(fù)

    自然衰減修復(fù)的目的是在綠色修復(fù)理念基礎(chǔ)上將地下水中污染物的數(shù)量、可移動(dòng)性、毒性降低到可接受風(fēng)險(xiǎn)水平,該修復(fù)過(guò)程相對(duì)其他修復(fù)工程,除必要的污染地下水體控制、微生物和污染物監(jiān)測(cè)與評(píng)價(jià)以外,無(wú)需實(shí)施人為工程。目前,監(jiān)測(cè)自然衰減(MNA)是國(guó)際上應(yīng)用比較廣泛的一種自然衰減修復(fù)技術(shù)研究方法,但由于早期分子生物學(xué)技術(shù)的限制,多數(shù)研究停留在對(duì)污染物質(zhì)量和環(huán)境地球化學(xué)信息方面的檢測(cè)上?,F(xiàn)代分子生物學(xué)和生物信息學(xué)快速發(fā)展,為揭示MNA的高級(jí)證據(jù)微生物提供支撐。利用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè)微生物菌群,揭示地下水中污染物自然衰減過(guò)程和功能菌群特征,以明確自然衰減機(jī)理,評(píng)估自然衰減能力。通常監(jiān)測(cè)自然衰減方法包括污染地下水的原位微生物檢測(cè)和室內(nèi)自然衰減模擬與定量檢測(cè)[14]1190。

    1.1 原位微生物檢測(cè)

    地下水污染物無(wú)害化自然降解過(guò)程中,必須要有能夠降解目標(biāo)污染物的微生物菌群[15],因此原位微生物檢測(cè)是證明自然衰減能力的重要方法。多數(shù)情況下,原位微生物檢測(cè)并不是在污染場(chǎng)地直接進(jìn)行微生物定量檢測(cè)分析,通常需采集樣品及時(shí)送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)分析,該過(guò)程很大程度上依賴現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)和生物信息學(xué)分析水平。微生物多樣性與組成方面,通過(guò)對(duì)16S rRNA擴(kuò)增子測(cè)序,揭示降解污染物的功能菌群的存在及其豐度,可直接說(shuō)明微生物具有降解污染物的潛力[16]137。同時(shí),污染區(qū)微生物菌群多樣性差異也能反映出污染物對(duì)微生物群落結(jié)構(gòu)產(chǎn)生的影響[17],已有研究表明,污染物的存在會(huì)強(qiáng)化部分菌群[18],導(dǎo)致污染區(qū)微生物群落多樣性通常較非污染區(qū)偏低[19];功能基因方面,利用宏基因組測(cè)序不僅可揭示與污染物轉(zhuǎn)化相關(guān)功能基因信息[20],而且可預(yù)測(cè)菌群相關(guān)代謝潛力[21]。此外,功能基因芯片也可直接揭示污染地下水中功能基因組成與結(jié)構(gòu)以及代謝潛力[22],但該技術(shù)并不能發(fā)現(xiàn)未知的功能基因;關(guān)鍵菌群和功能基因的存在只能說(shuō)明微生物具有降解污染物的潛力,并不能說(shuō)明基因表達(dá)情況,從環(huán)境微生物mRNA入手進(jìn)行宏轉(zhuǎn)錄組研究,可揭示污染地下水體中功能基因的表達(dá)情況和表達(dá)差異,從轉(zhuǎn)錄水平為自然衰減提供微生物代謝活動(dòng)和驅(qū)動(dòng)生物地球化學(xué)循環(huán)的證據(jù)。

    此外,由于地下水樣品運(yùn)輸、保存等過(guò)程并不能實(shí)現(xiàn)真正意義上的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè),CHANDLER等[23]將DNA擴(kuò)增、標(biāo)記、雜交步驟整合為一體,設(shè)計(jì)出一款單步的微流體裝置,即放大的便攜式生物芯片,可用于污染地下水的微生物原位檢測(cè),但該技術(shù)相對(duì)室內(nèi)檢測(cè)通量較低,也不能檢測(cè)出未知的微生物信息。

    1.2 室內(nèi)自然衰減模擬與定量檢測(cè)

    室內(nèi)模擬相對(duì)天然地下水系統(tǒng),水文地質(zhì)條件更易控制,地下水污染狀態(tài)更易調(diào)節(jié),污染物自然衰減、微生物菌群變化更易監(jiān)測(cè)和定量分析,這有利于地下水污染物自然衰減的跟蹤研究和定量化評(píng)估。目前,室內(nèi)模擬地下水污染自然衰減常用的裝置包括砂箱和砂柱2種,砂箱模擬一般多用于污染物持續(xù)性的自然衰減監(jiān)測(cè),實(shí)驗(yàn)周期通常較長(zhǎng)[24];而砂柱模擬常用于揭示單一變量對(duì)自然衰減的影響,在控制變量條件下,往往需要利用多組砂柱來(lái)設(shè)置變量的梯度差異[25]。室內(nèi)自然衰減模擬裝置中降解污染物的功能菌群可來(lái)源于原始污染的地下水,即土著微生物,也可采集其他菌群物質(zhì)或投放專門經(jīng)培養(yǎng)馴化的外源功能菌群。

    檢測(cè)進(jìn)出水污染物濃度變化是判斷模擬裝置自然衰減能力和衰減持續(xù)時(shí)間最直接的手段,而揭示污染物自然衰減機(jī)制需要從微生物菌群的角度出發(fā)。除原位微生物檢測(cè)常用的分子生物學(xué)技術(shù)外,對(duì)微生物特定物質(zhì)(如核酸序列、多肽、蛋白質(zhì)等)進(jìn)行標(biāo)記,能較好地跟蹤污染物自身降解過(guò)程和與污染物降解過(guò)程的相關(guān)微生物活動(dòng);應(yīng)用熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qPCR)技術(shù)可識(shí)別與污染物轉(zhuǎn)化相關(guān)的功能基因的存在與數(shù)量,該技術(shù)受引物數(shù)量限制,并不能一次檢測(cè)多個(gè)基因,但定量檢測(cè)特定的基因較為實(shí)用;此外,今后有可能通過(guò)基因工程技術(shù)構(gòu)建降解能力和適應(yīng)能力更強(qiáng)的工程菌,可進(jìn)一步在地下水污染模型中進(jìn)行菌群降解能力的評(píng)價(jià)[26],有利于更好地發(fā)揮微生物在修復(fù)地下水污染中的作用。

    2 生物刺激修復(fù)

    生物刺激修復(fù)通常從兩方面入手,一方面向污染地下水中添加修復(fù)劑,通過(guò)環(huán)境調(diào)控來(lái)提高土著微生物降解污染物的能力;另一方面向污染地下水中添加經(jīng)實(shí)驗(yàn)室馴化的功能菌群來(lái)降解污染物。相對(duì)土壤而言,向地下水中添加功能菌群的應(yīng)用明顯較少。地下水環(huán)境具有無(wú)光、低溫、低氧等特點(diǎn),是一個(gè)近似極端的環(huán)境[27]3,外源菌群在污染地下水中的存活難度、降解污染物的效率和時(shí)效性等不易保證。而土著微生物在污染地下水中本身已具有較強(qiáng)的適應(yīng)能力,相對(duì)而言,溫度、pH等多數(shù)環(huán)境因子并不需要過(guò)多人工調(diào)控,因此,多數(shù)研究集中在盡可能不改變地下水環(huán)境下如何刺激土著微生物降解污染物方面。

    2.1 添加劑選取

    添加劑一般為微生物代謝必需的營(yíng)養(yǎng)、能量和代謝過(guò)程所需的電子受供體等物質(zhì),通過(guò)強(qiáng)化微生物代謝能力和菌群豐度,以加速污染物的降解、轉(zhuǎn)化作用。添加劑選取需符合一定要求:不應(yīng)對(duì)生命體和環(huán)境產(chǎn)生毒害作用;對(duì)地下水環(huán)境的改變盡可能小;能夠?yàn)槲⑸锕δ芫禾峁┹^多營(yíng)養(yǎng)、能量和電子等。目前常用的添加劑信息詳見(jiàn)表1。多數(shù)添加劑相對(duì)環(huán)保,為對(duì)生命體無(wú)毒害作用的有機(jī)物,同時(shí)在地下水中具有良好的遷移性。但針對(duì)高錳酸鈉這類具有強(qiáng)氧化性的添加劑,其本身具有一定的殺菌作用,使用時(shí)應(yīng)結(jié)合地下水污染的具體情況綜合考慮。

    表1 生物刺激修復(fù)中常用的添加劑

    2.2 溶解氧(DO)調(diào)節(jié)

    地下水DO與氣壓、水溫、水質(zhì)關(guān)系密切,同時(shí)還受水體中微生物數(shù)量、有機(jī)物濃度等綜合影響,通常地下水DO不超過(guò)純水(9 mg/L)。微生物可分為好氧微生物、兼性厭氧微生物和厭氧微生物,其代謝過(guò)程和代謝速率存在較大差異。適量、充足的氧氣是原位好氧微生物修復(fù)污染水體的關(guān)鍵所在,通常可通過(guò)人工曝氣和添加釋氧劑增加地下水含氧量。人工曝氣方法在地下水污染修復(fù)中應(yīng)用較早,但其施工量較大。部分研究嘗試用H2O2作為地下水釋氧劑,而H2O2釋放氧氣過(guò)程僅能持續(xù)幾分鐘到幾小時(shí),同時(shí),其強(qiáng)氧化性容易導(dǎo)致土著微生物失活而降低污染修復(fù)效果。目前使用較多的是固相氧氣緩慢釋放劑(ORC),常用的ORC有CaO2、MgO2和Na2CO3,其中,CaO2在地下水中生物刺激修復(fù)中應(yīng)用較多,因?yàn)镃aO2釋放氧氣時(shí)間較長(zhǎng),持續(xù)釋放時(shí)間一般介于6個(gè)月至1年以上[38],可為地下水好氧微生物降解作用持續(xù)供氧。CaO2投放到地下水中發(fā)生如下反應(yīng)[39]:

    CaO2+2H2O → H2O2+Ca(OH)2

    (1)

    2H2O2→2H2O+O2

    (2)

    H2O2+e-→ OH+OH-

    (3)

    地下水常用增氧方法見(jiàn)表2。

    表2 地下水常用增氧方法

    3 微生物在地下水污染修復(fù)中的應(yīng)用

    地下水中常見(jiàn)污染物通常可劃分為無(wú)機(jī)氮、有機(jī)物和金屬元素3大類,微生物對(duì)不同類型污染物的修復(fù)過(guò)程不同,其修復(fù)方法的選擇存在一定差異。

    地下水無(wú)機(jī)氮污染范圍通常較大而不適合實(shí)施工程,當(dāng)前研究多處在自然衰減模擬階段,但針對(duì)污染嚴(yán)重的點(diǎn)源可酌情利用微生物進(jìn)行刺激修復(fù)。多數(shù)有機(jī)物本身可作為微生物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)而被降解,最早利用微生物進(jìn)行地下水污染物自然衰減的便是有機(jī)物,而當(dāng)?shù)孜锊蛔銜r(shí),則需人工調(diào)節(jié)以促進(jìn)有機(jī)物的快速降解。針對(duì)地下水中金屬元素,其不可被微生物利用性和自然衰減速率遠(yuǎn)小于遷移速率,基本無(wú)法單獨(dú)實(shí)現(xiàn)自然衰減修復(fù),利用微生物進(jìn)行刺激修復(fù)成為降低水體金屬濃度研究的重點(diǎn)。

    3.1 無(wú)機(jī)氮污染的微生物修復(fù)

    3.2 有機(jī)物污染的微生物修復(fù)

    部分有機(jī)物本身即是微生物必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),這為地下水有機(jī)污染的微生物修復(fù)提供可能。早在20世紀(jì)50年代,美國(guó)科學(xué)家ZOBELL[48]發(fā)現(xiàn)微生物對(duì)環(huán)烴、苯系物、脂肪烴、芳香烴等有機(jī)物具有一定降解作用。此后,歐美國(guó)家開(kāi)始利用多種手段監(jiān)測(cè)微生物降解地下水中有機(jī)物。ANNESER等[16]140研究顯示,高度專一的降解菌不僅可自然降解地下水中的BTEX(苯系物),同時(shí)能調(diào)控低濃度有機(jī)污染暈的邊界范圍。從定性識(shí)別到定量評(píng)估,是地下水有機(jī)物污染自然衰減修復(fù)研究的重要?dú)v程。CHOI等[49]針對(duì)韓國(guó)某軍械廠地下水BTEX和苯污染,利用電子受體貢獻(xiàn)率判別出不同的微生物作用降解污染物貢獻(xiàn)率,并實(shí)現(xiàn)定量計(jì)算BTEX和苯自然衰減速率及修復(fù)所需時(shí)間。而當(dāng)微生物自然降解有機(jī)物所需時(shí)長(zhǎng)不能達(dá)到修復(fù)要求時(shí),便需要采取相應(yīng)的修復(fù)措施刺激土著微生物。微生物降解污染物受限往往是因?yàn)榈孜锊蛔銓?dǎo)致,LIEN等[50]研究發(fā)現(xiàn)燃油泄漏位置的地下水中石油發(fā)生微生物自然衰減同時(shí),TCE的生物修復(fù)作用也被強(qiáng)化,原因是石油可作為微生物主要底物增強(qiáng)其代謝能力,從而加速了TCE的脫氯作用。因此,該場(chǎng)地可通過(guò)添加石油替代性底物以獲得地下水TCE持續(xù)脫氯效果。此外,隨著國(guó)內(nèi)外對(duì)地下水微污染研究的關(guān)注,越來(lái)越多的學(xué)者致力于綠色生態(tài)的修復(fù)方法來(lái)去除微污染,而自然衰減修復(fù)成為首要考慮的環(huán)保方法。ALDAS VARGAS等[27]2針對(duì)農(nóng)藥引起的地下水微污染,調(diào)查并提供了與地球化學(xué)參數(shù)相關(guān)的微生物菌群組成和分布信息,這些信息有助于認(rèn)識(shí)微生物對(duì)微污染自然衰減的過(guò)程和能力。

    3.3 金屬污染的微生物修復(fù)

    金屬元素并不像有機(jī)物一樣可被微生物直接利用,微生物通常通過(guò)氧化還原、甲基化去甲基化、生物礦化、分泌物絡(luò)合等方式降低地下水中有毒金屬毒性或固定有毒金屬[7]5。由于地下水中金屬元素濃度相對(duì)低的多,地下水中微生物對(duì)金屬污染的自然衰減能力往往較弱,而不適合利用微生物實(shí)施自然衰減修復(fù)。如何提高微生物活性來(lái)降低地下水中金屬元素的毒性成為當(dāng)前研究的重點(diǎn)。針對(duì)地下水較多出現(xiàn)的Cr(Ⅵ)污染,采用的原位生物修復(fù)技術(shù)通常包括生物還原法、生物吸附法和生物累計(jì)法,耐Cr微生物的大量發(fā)現(xiàn)使得生物還原法成為當(dāng)前研究的重點(diǎn)。陳國(guó)才[51]利用專門馴化的實(shí)驗(yàn)菌群進(jìn)行地下水Cr污染去除模擬,通過(guò)零價(jià)鐵和微生物協(xié)同作用達(dá)到去除目的,一方面零價(jià)鐵的強(qiáng)還原性能有效將Cr(Ⅵ)還原為Cr(Ⅲ),同時(shí)零價(jià)鐵厭氧環(huán)境與H2O反應(yīng)產(chǎn)生的H2可刺激嗜氫微生物,進(jìn)一步還原Cr(Ⅵ)。FAYBISHENKO等[31]在美國(guó)華盛頓漢福德基地進(jìn)行了為期約3.5年的Cr污染地下水生物刺激修復(fù)工程,通過(guò)添加釋氫化合物(HRC)提高生物通量來(lái)影響電子受供體,最終顯著降低了地下水中溶解態(tài)的Cr(Ⅵ)。此后,ZHANG等[52]針對(duì)該污染場(chǎng)地,鑒定了在HRC刺激下與Cr(Ⅵ)還原相關(guān)的功能微生物和基因,這為設(shè)計(jì)Cr(Ⅵ)污染地下水的持續(xù)性生物刺激修復(fù)方案提供依據(jù)。

    4 展 望

    微生物修復(fù)是一種基于微生物自身代謝功能降解污染物的技術(shù),通過(guò)利用和刺激土著微生物菌群,實(shí)現(xiàn)其對(duì)地下水中多種污染物的降解作用,達(dá)到地下水污染修復(fù)目的。針對(duì)地下水中無(wú)機(jī)氮、有機(jī)物和金屬元素3大類污染修復(fù),往往需要考慮污染物種類、污染地下水體分布情況、污染程度、修復(fù)要求等因素,綜合判定微生物修復(fù)是否適用。同時(shí),應(yīng)用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù),從微生物群落多樣性、組成、功能基因、轉(zhuǎn)錄表達(dá)等方面揭示功能微生物菌群降解污染物過(guò)程,為制定地下水污染長(zhǎng)期的微生物修復(fù)方案提供依據(jù)。

    微生物在地下水污染修復(fù)應(yīng)用研究中仍存在一些急需解決的關(guān)鍵問(wèn)題:(1)充足的底物供應(yīng)是微生物降解的必要條件,如何保證在地下水弱電導(dǎo)環(huán)境中功能菌群具有足夠的底物和電子供體;(2)如何盡可能保證修復(fù)后地下水中不產(chǎn)生新的污染物,特別是添加劑、微生物通量和降解過(guò)程產(chǎn)生的二次產(chǎn)物;(3)目前我國(guó)多數(shù)研究處于室內(nèi)模擬,如何將微生物修復(fù)技術(shù)從實(shí)驗(yàn)階段大量轉(zhuǎn)化為實(shí)地修復(fù),仍會(huì)面臨諸多問(wèn)題;(4)由于地下水環(huán)境的復(fù)雜性,分子生物學(xué)技術(shù)在地下水污染修復(fù)中應(yīng)用并不多,這對(duì)揭示微生物群落結(jié)構(gòu)與功能對(duì)污染響應(yīng)關(guān)系和污染物降解機(jī)理不利,未來(lái)應(yīng)加強(qiáng)對(duì)此領(lǐng)域的深入研究。

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