H9N2亞型禽流感病毒感染對(duì)小鼠腸道菌群的影響

李靜云，連朋敬，白 玉，奚柳青，張子卉，牛小飛，楊俊琦，喬 健*

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京 100193；2.河北工程大學(xué)生命科學(xué)與食品工程學(xué)院，邯鄲 056038)

禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)可感染人和多種動(dòng)物，嚴(yán)重威脅著人和動(dòng)物健康，并造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。其中，H9N2亞型禽流感病毒(H9N2 subtype AIV，H9N2 AIV)廣泛流行于中國(guó)養(yǎng)殖場(chǎng)雞群中，可導(dǎo)致雞群產(chǎn)蛋量下降以及表現(xiàn)出呼吸道和消化道癥狀，給養(yǎng)禽業(yè)造成一定的經(jīng)濟(jì)損失[1]。此外，H9N2 AIV雖然屬于低致病性禽流感病毒，但其具有廣泛的宿主適應(yīng)性，可感染雞、鴨、鵪鶉等多種宿主，也可跨物種傳播感染豬、雪貂和人等哺乳動(dòng)物[2-4]。而且多項(xiàng)血清流行病學(xué)調(diào)查顯示，在我國(guó)有13.7%～37.2%的人可能曾感染過H9N2 AIV[5-7]。在大多數(shù)情況下，H9N2 AIV感染人往往導(dǎo)致輕度的臨床癥狀[8-9]，因此容易被忽視，這就有可能使得H9N2 AIV在人體內(nèi)逐漸適應(yīng)，并與其他流感病毒亞型發(fā)生基因重組，形成可能造成全球流感大流行的新型流感病毒。

人腸道中存在著與人體內(nèi)細(xì)胞等量的共生菌[10]，并在機(jī)體代謝、營(yíng)養(yǎng)和免疫等過程中都起著重要作用[11]。而且腸道菌群不僅在抵抗腸道病原感染發(fā)揮重要作用，其對(duì)抵抗腸道外部位如肺部的病原感染也發(fā)揮重要作用[12]。通過補(bǔ)充益生菌等方法改善腸道微生物群可有利于肺部感染性疾病的治療，而抗生素等引起的腸道菌群失調(diào)會(huì)通過“腸-肺軸”導(dǎo)致肺部免疫應(yīng)答受損從而促進(jìn)肺部病原感染[13-14]。反之，當(dāng)機(jī)體存在肺部病原感染時(shí)，也可影響腸道菌群的微生態(tài)平衡，例如，近年來，越來越多的研究表明，肺部的病原感染，如肺結(jié)核分枝桿菌[15]、呼吸道合胞病毒[16]、嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2[17-18]以及流感病毒(H1N1[19]、H5N1[20]、H7N9[21-22])等的感染都可影響到腸道菌群的穩(wěn)態(tài)。

然而，關(guān)于H9N2 AIV呼吸道感染對(duì)腸道菌群的影響還未見有研究報(bào)道。而且由于糞便易獲取以及糞便中近60%的固體物質(zhì)為來自于腸道的共生菌群[23]，大部分的研究都是采用糞便中的菌群來代表腸道菌群。因此，本研究通過收集小鼠感染H9N2 AIV前和感染后的糞便，利用16S rRNA測(cè)序技術(shù)，來探究小鼠感染H9N2 AIV后其腸道菌群的動(dòng)態(tài)變化，以期為進(jìn)一步研究H9N2 AIV的感染、腸道菌群和機(jī)體的免疫這三者的相互作用提供一些參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 H9N2 AIV 由本實(shí)驗(yàn)室于2008年從河北某規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)的雞群中分離得到，命名為A/Chicken/Hebei/4/2008(H9N2)，GenBank登錄號(hào)為FJ499463～FJ499470。之前實(shí)驗(yàn)室的研究結(jié)果已經(jīng)表明，A/Chicken/Hebei/4/2008(H9N2)對(duì)它本來的宿主雞致病性較弱(其只能在雞氣管和肺有效復(fù)制，并不引起雞死亡)，但卻對(duì)哺乳動(dòng)物小鼠具有很強(qiáng)的致病性(其能在小鼠除腦部之外的各個(gè)臟器有效復(fù)制，以肺組織內(nèi)病毒滴度最高，并且能引起小鼠死亡[24])。在給小鼠鼻腔接種H9N2 AIV前，將原始病毒液經(jīng)10日齡的SPF雞胚培養(yǎng)24～72 h，收集雞胚尿囊液，充分混勻后,分裝,并于-80 ℃ 冰箱保存，待后續(xù)試驗(yàn)使用。通過使用MDCK(Madin-Darby canine kidney)細(xì)胞進(jìn)行空斑形成試驗(yàn)測(cè)定保存的含H9N2 AIV尿囊液中的病毒滴度。測(cè)得其病毒滴度為1.4×108PFU·mL-1。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)BALB/c小鼠，雄性，6～8周齡，體重為18～20 g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。

1.1.3 主要試劑 生理鹽水購(gòu)自石家莊四藥有限公司，異氟烷購(gòu)自河北一品制藥股份有限公司，DNA提取試劑盒購(gòu)自O(shè)mega Bio-tek公司，F(xiàn)astPfu聚合酶購(gòu)自北京全式金公司，2%瓊脂糖凝膠購(gòu)自Biowest公司，AxyPrep DNA凝膠回收試劑盒購(gòu)自Axygen Biosciences公司。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 將24只BALB/c小鼠隨機(jī)分為2組，分別為對(duì)照組和感染組，每組12只。對(duì)照組小鼠鼻腔接種50 μL用生理鹽水稀釋60倍后的不含H9N2 AIV的尿囊液，感染組小鼠鼻腔接種50 μL用生理鹽水稀釋60倍后含有1.2×105PFU H9N2 AIV的尿囊液。

1.2.2 鼻腔接種 接種時(shí)，用異氟烷麻醉小鼠后，取50 μL接種液置于小鼠鼻尖處，小鼠本能性吸入，然后將小鼠豎直放置1～2 min，以確保接種液進(jìn)入下呼吸道。

1.2.3 糞便樣本收集 考慮到哺乳動(dòng)物腸道微生物的時(shí)間節(jié)律性變化，因此，應(yīng)盡量在取材日的同一時(shí)間采樣。在第0和33天收集對(duì)照組小鼠的糞便，在H9N2 AIV感染后第4、8、21和33天收集感染組小鼠的糞便，收集時(shí)避免尿液污染糞便。小鼠糞便收集后立即放入-80 ℃冰箱中保存待用。

1.2.4 DNA提取、PCR擴(kuò)增和測(cè)序 根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行糞便中總DNA提取。DNA濃度和純度利用NanoDrop2000進(jìn)行檢測(cè)，利用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA提取質(zhì)量。之后用338F (5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3′) 和806R (5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′) 引物對(duì)V3-V4可變區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，用AxyPrep DNA凝膠回收試劑盒切膠回收PCR產(chǎn)物，再用Tris-HCl緩沖液洗脫，定量，Illumina MiSeq PE300測(cè)序(由上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司完成)，最后進(jìn)行微生物多樣性的生物信息分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié) 果

2.1 H9N2 AIV感染后小鼠體重變化

BALB/c小鼠(6～8周齡)感染H9N2 AIV(1.2×105PFU·只-1)后,從第3天開始逐漸表現(xiàn)為精神沉郁，活動(dòng)較少，被毛粗亂，失去光澤，弓背，扎堆等，在感染后第6天表現(xiàn)最為嚴(yán)重，但未有小鼠死亡，之后小鼠逐漸恢復(fù)至對(duì)照組小鼠的狀態(tài)。體重方面，與對(duì)照組小鼠相比較，感染組小鼠在感染后第3天其體重就開始顯著降低(P<0.05)，至感染的第6天體重降至最低點(diǎn)(P<0.001)，之后體重慢慢恢復(fù)，到第10天時(shí)已與對(duì)照組小鼠體重相比較差異不顯著(圖1)。這說明通過給予BALB/c小鼠鼻腔接種1.2×105PFU·只-1劑量的H9N2 AIV可使小鼠表現(xiàn)出感染癥狀，并使得小鼠體重短時(shí)間下降。

***.P<0.001圖1 BALB/c小鼠感染H9N2 AIV后的體重Fig.1 Body weight of BALB/c mice infected with H9N2 AIV

2.2 測(cè)序信息統(tǒng)計(jì)

測(cè)序樣本數(shù)為18個(gè)，分別是對(duì)照組小鼠在第0和33天的糞便樣本和感染組小鼠在感染后第4、8、21和33天的糞便樣本，每組各3個(gè)樣本?？偣矞y(cè)得原始序列1 452 493×2條，總堿基數(shù)為874 400 786 bp。優(yōu)化序列后，有效序列數(shù)為849 528條，有效堿基數(shù)為370 810 923 bp，平均每條序列的堿基數(shù)約為436 bp。

2.3 對(duì)照組小鼠在第0、33天的腸道菌群alpha多樣性比較

alpha多樣性是指樣本群落內(nèi)的物種多樣性，其包含群落的兩個(gè)方面信息:1)群落豐富度(community richness)，即物種數(shù)目；2)群落多樣性(community diversity)，其既包括物種數(shù)，也包括群落全部物種數(shù)量分配的均勻程度。描述群落豐富度的指數(shù)主要包括Sobs指數(shù)、Chao1指數(shù)和ACE指數(shù)等，其中，Sobs指數(shù)表征實(shí)際觀測(cè)到的物種數(shù)，其值越大，表明對(duì)應(yīng)的群落的豐富度越高；描述群落多樣性的指數(shù)主要包括Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)等，其中Shannon指數(shù)越大，表明對(duì)應(yīng)的群落的多樣性越高。由表1可知，對(duì)照組小鼠在第0、33天的腸道菌群的Sobs指數(shù)和Shannon指數(shù)都沒有顯著差異，說明對(duì)照組小鼠在第0、33天的腸道菌群的alpha多樣性(即物種的數(shù)目)沒有明顯變化。

表1 對(duì)照組小鼠和感染組小鼠腸道菌群的alpha多樣性指數(shù)比較Table 1 Comparison of the alpha diversity index of the gut flora of control mice and infection mice

2.4 對(duì)照組小鼠在第0、33天的腸道菌群的物種差異

可操作分類單元(operational taxonomic units,OUT)是將測(cè)序后得到的成千上萬條序列(測(cè)序得到的每1條序列來自1個(gè)菌株)按照彼此的相似性分為的許多小組。1個(gè)小組就是1個(gè)OTU。因?yàn)?6S rRNA基因的變異率在3%以內(nèi)，因此，序列相似性超過97%就被認(rèn)為是同一個(gè)物種。根據(jù)得到的樣本群落中不同物種的豐度(序列數(shù))數(shù)據(jù)，運(yùn)用嚴(yán)格的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，對(duì)不同組微生物群落之間的物種進(jìn)行假設(shè)檢驗(yàn)，評(píng)估物種相對(duì)豐度差異的顯著性水平，可獲得在門、綱、目、科、屬、種、OUT等不同分類水平的組間顯著性差異物種。但由于16S rRNA的基因序列只是細(xì)菌基因組上極小的1段序列，利用16S rRNA的基因序列進(jìn)行細(xì)菌分類鑒定只能鑒定到屬水平。因此,經(jīng)16S rRNA基因的測(cè)序后，通常選擇在門、屬和OUT這3個(gè)分類水平上進(jìn)行物種相對(duì)豐度的組間顯著性差異檢驗(yàn)。由圖2可知，對(duì)照組小鼠在第0、33天的腸道菌群各物種的相對(duì)豐度無論是在門水平、屬水平上還是在OUT水平上都沒有顯著性差異。說明對(duì)照組小鼠在第0、33天的腸道菌群各物種的相對(duì)豐度沒有明顯變化。

圖2 對(duì)照組小鼠在第0和33天的腸道菌群在門水平(A)、屬水平(B)和OUT水平(C)上的物種相對(duì)豐度Fig.2 The relative abundance of gut bacterial species of the control group mice at day 0 and day 33 at the phylum level (A),genus level (B) and OUT level (C)

2.5 H9N2 AIV感染后小鼠腸道菌群的alpha多樣性比較

從以上結(jié)果可知，對(duì)照組小鼠在第0、33天的腸道菌群群落結(jié)構(gòu)是穩(wěn)定的。因此，以對(duì)照組小鼠第0天的腸道菌群作為對(duì)照，再與感染組小鼠在感染后第4、8、21和33天的腸道菌群作比較。由表1可知，Sobs指數(shù)和Shannon指數(shù)在對(duì)照組小鼠和感染后第4、8、21和33天的感染組小鼠之間均沒有顯著性差異。說明小鼠感染H9N2 AIV后第4、8、21和33天的腸道菌群的alpha多樣性(即物種數(shù))同樣沒有明顯變化。

2.6 H9N2 AIV感染后小鼠腸道菌群的物種差異

由圖3A可知，在門水平上，對(duì)照組小鼠腸道菌群和感染組小鼠在感染后第4、8、21和33天的腸道菌群中的厚壁菌門(Firmicutes)細(xì)菌和擬桿菌門(Bacteroidetes)細(xì)菌的相對(duì)豐度都存在顯著性差異(P<0.001)，具體表現(xiàn)為與對(duì)照組小鼠腸道菌群相比較，感染組小鼠腸道菌群中的厚壁菌門(Firmicutes)細(xì)菌相對(duì)豐度在感染后第4天時(shí)減少，之后逐漸增多；而擬桿菌門(Bacteroidetes)細(xì)菌的相對(duì)豐度在感染后第4天時(shí)增多，之后逐漸減少。由圖3B可知，在屬水平上，相對(duì)豐度排名前15的菌屬中，對(duì)照組小鼠腸道菌群和感染組小鼠在感染后第4、8、21和33天的腸道菌群中排名第1、2、3、10、11、12和15的菌屬都存在顯著性差異(P<0.05，P<0.01，P<0.05，P<0.05，P<0.05，P<0.001，P<0.01)，分別為norank_f_Bacteroidales_S24-7_group、Lachnospiraceae_NK4A136_group、Alistipes、Ruminococcaceae_UCG-014、Ruminiclostridium、Alloprevotella和Oscillibacter。由圖3C可知，在OUT水平上，相對(duì)豐度排名前15的OTU中，對(duì)照組小鼠腸道菌群和感染組小鼠在感染后第4、8、21和33天的腸道菌群中排名第1、3、6、11和14的OTU都存在顯著性差異(P<0.05，P<0.01，P<0.05，P<0.001，P<0.05)。此外，在OUT水平上進(jìn)行PCoA分析(principal co-ordinates analysis)，可用來研究樣本群落組成的相似性和差異性。PCoA圖中的每個(gè)點(diǎn)代表1個(gè)樣本，相同顏色的點(diǎn)表示為同1組。圖中兩點(diǎn)之間的距離越近，表明相對(duì)應(yīng)的兩個(gè)樣本之間的微生物群落結(jié)構(gòu)相似度越高；反之，圖中兩點(diǎn)之間的距離越遠(yuǎn)，表明相對(duì)應(yīng)的兩個(gè)樣本之間的微生物群落結(jié)構(gòu)相似度越低。由圖3D(圖中兩點(diǎn)之間距離算法為unweighted_UniFrac)可知，對(duì)照組小鼠和感染組小鼠在感染后第4、8、21和33天的樣本點(diǎn)可以明顯區(qū)分開，而且采用相似性分析(ANOSIM)和非參數(shù)多元方差分析(Adonis) 對(duì)組間差異進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果顯示均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義：ANOSIM的R值為0.491 9，P值等于0.002，Adonis的R2值為0.413 2，P值等于0.001(ANOSIM中R值越接近1表示組間差異越大于組內(nèi)差異；Adonis分析中R2值代表分組因素對(duì)樣本差異的解釋度，R2越大表示分組對(duì)差異的解釋度越高；P值小于0.05說明本次檢驗(yàn)的可信度高)。以上結(jié)果說明，小鼠感染H9N2 AIV后第4、8、21和33天的腸道菌群的群落結(jié)構(gòu)發(fā)生了明顯改變，并且在感染第33天后仍未恢復(fù)，而且這主要是由于各物種的相對(duì)豐度發(fā)生了明顯改變。

3 討 論

機(jī)體處于健康狀態(tài)時(shí)，腸道菌群與宿主間通過精密的調(diào)控機(jī)制處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)。本研究結(jié)果也表明對(duì)照組小鼠的腸道菌群的群落結(jié)構(gòu)在33 d內(nèi)是穩(wěn)定的。而機(jī)體的內(nèi)在因素(如遺傳背景等)、外在因素(如飲食習(xí)慣、生活方式、藥物的使用等)以及環(huán)境因素等都可影響腸道菌群的組成。近年來，越來越多的研究表明，肺部感染性疾病也可導(dǎo)致腸道菌群發(fā)生變化。例如，Hu等[15]研究發(fā)現(xiàn)，感染了肺結(jié)核分枝桿菌的病人其腸道菌群alpha多樣性下降。Zuo 等[17]研究則表明，新冠肺炎患者的腸道菌群的組成發(fā)生了顯著變化，表現(xiàn)為條件致病菌增多，有益共生菌減少。此外，近些年來，已有多個(gè)研究表明流感病毒感染后可引起機(jī)體腸道菌群的變化。

Qin等[21]和Hu等[22]研究均發(fā)現(xiàn)感染了H7N9病毒的病人腸道菌群的Shannon指數(shù)降低，表明H7N9病毒感染人可導(dǎo)致腸道菌群的多樣性降低。然而，本研究的結(jié)果表明，感染了H9N2 AIV的小鼠第4、8、21和33天時(shí)其腸道菌群的Shannon指數(shù)沒有顯著變化；Yildiz等[20]的研究結(jié)果同樣表明，低致病性H5N1病毒(A/Viet Nam/1203/2004)感染小鼠第3、5、7、14和28天，小腸中菌群的Shannon指數(shù)沒有明顯變化，表明H9N2 AIV和低致病性H5N1病毒不導(dǎo)致小鼠腸道菌群的多樣性發(fā)生明顯改變。

小鼠和人腸道菌群在門水平上是相似的，均以厚壁菌門(Firmicutes)和擬桿菌門(Bacteroidetes)這兩大類細(xì)菌為主。而當(dāng)使用抗生素等原因?qū)е戮菏д{(diào)時(shí)，變形菌門(Proteobacteria)細(xì)菌的相對(duì)豐度就會(huì)增加[25-26]。Qin等[21]研究表明，感染了H7N9病毒的病人其腸道菌群中擬桿菌門細(xì)菌的相對(duì)豐度減少而變形菌門細(xì)菌的相對(duì)豐度增加。Deriu等[19]研究同樣表明，H1N1病毒(A/Puerto Rico/8/34)感染小鼠9 d后，小鼠腸道菌群中擬桿菌門細(xì)菌(如分節(jié)絲狀菌)的相對(duì)豐度減少，而變形菌門細(xì)菌(如腸桿菌科細(xì)菌)的相對(duì)豐度增加。類似地，Wang等[27]研究表明，感染了H1N1病毒(A/Puerto Rico/8/34)的小鼠，感染7 d后腸道菌群中厚壁菌門的乳酸桿菌和擬桿菌門的分節(jié)絲狀菌的豐度減少，而變形菌門腸桿菌科的細(xì)菌(特別是大腸桿菌)的豐度增多。然而，Yildiz等[20]研究則表明，低致病性的H5N1病毒(A/Viet Nam/1203/2004)感染小鼠后糞便中的菌群沒有明顯變化，而其小腸中的菌群發(fā)生了明顯改變；感染7 d后，小腸中的厚壁菌門細(xì)菌的相對(duì)豐度增加，而擬桿菌門細(xì)菌的相對(duì)豐度減少。本研究結(jié)果則表明，H9N2 AIV感染小鼠第4、8、21和33天小鼠腸道菌群中的厚壁菌門細(xì)菌相對(duì)豐度先減少后逐漸增多，擬桿菌門細(xì)菌的相對(duì)豐度則先增多后逐漸減少，而變形菌門細(xì)菌的相對(duì)豐度則沒有明顯改變。綜上可知，流感病毒可引起腸道菌群發(fā)生改變，并且這種改變與感染的流感病毒亞型、感染對(duì)象(人和小鼠)、取樣部位(糞便和小腸)和時(shí)間等有關(guān)。

擬桿菌門細(xì)菌相對(duì)豐度的增加與體重的降低有一定的相關(guān)性，肥胖人群進(jìn)行低卡路里飲食后，其體重下降，腸道中擬桿菌門細(xì)菌的相對(duì)豐度也逐漸增加[28]。本研究結(jié)果表明，小鼠感染H9N2 AIV后其體重從第3天就開始顯著降低，而在第4天時(shí)其腸道菌群中的厚壁菌門細(xì)菌相對(duì)豐度減少而擬桿菌門細(xì)菌的相對(duì)豐度增多，這也佐證了擬桿菌門細(xì)菌相對(duì)豐度增加與體重降低的相關(guān)性。此外，大多數(shù)擬桿菌門細(xì)菌對(duì)pH較敏感，并且在酸性環(huán)境中幾乎不能增殖，厚壁菌門細(xì)菌則與之相反[29]，而炎癥反應(yīng)的發(fā)生可以降低相應(yīng)部位的pH[30]。因此，當(dāng)發(fā)生炎癥反應(yīng)時(shí)，可使厚壁菌門細(xì)菌的相對(duì)豐度增多，而擬桿菌門細(xì)菌的相對(duì)豐度減少。本研究結(jié)果表明，小鼠感染H9N2 AIV第8天后腸道菌群中的厚壁菌門細(xì)菌相對(duì)豐度逐漸增多，而擬桿菌門細(xì)菌的相對(duì)豐度則逐漸減少，這可能與H9N2 AIV的肺部感染導(dǎo)致腸道中炎癥反應(yīng)的發(fā)生有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)室之前的研究表明，H9N2 AIV感染小鼠7 d后可引起小鼠腸道損傷[31]。Wang等[27]研究表明，小鼠感染H1N1病毒(A/Puerto Rico/8/34)后的第7、9天都發(fā)生了腸道損傷，而且這主要是由于TH17細(xì)胞免疫反應(yīng)增強(qiáng)，分泌大量的IL-17A導(dǎo)致的。因此,H9N2 AIV感染后期引起的腸道部位炎癥反應(yīng)的發(fā)生有可能使得腸道的pH降低，進(jìn)而使得腸道菌群中厚壁菌門細(xì)菌相對(duì)豐度增加而擬桿菌門細(xì)菌相對(duì)豐度減少。另外，Sencio等[32]研究表明，小鼠感染流感病毒(H3N2和H1N1)后，由于其采食量降低，改變了小鼠的腸道菌群的組成以及減少了腸道菌群產(chǎn)生的短鏈脂肪酸，進(jìn)而通過降低肺泡巨噬細(xì)胞的殺菌活性來促進(jìn)肺炎鏈球菌的繼發(fā)感染。本研究結(jié)果表明，H9N2 AIV可導(dǎo)致小鼠腸道菌群群落結(jié)構(gòu)的改變，也有可能促進(jìn)細(xì)菌的繼發(fā)感染，這有待于后續(xù)試驗(yàn)證實(shí)。

*.P<0.05;**.P<0.01;***.P<0.001圖3 H9N2 AIV感染后小鼠腸道菌群在門水平(A)、屬水平(B)和OUT水平(C)上的物種相對(duì)豐度以及PCoA分析(D)Fig.3 The relative abundance of gut bacterial species of mice infected with H9N2 AIV at the phylum level (A),genus level (B) and OUT level (C) and principal co-ordinates analysis (D)

鑒于流感病毒感染可改變腸道菌群的穩(wěn)態(tài)，而且腸道菌群穩(wěn)態(tài)的破壞使得機(jī)體肺部抵抗力降低，可以考慮將可恢復(fù)腸道菌群穩(wěn)態(tài)從而提高肺部抵抗力的方法(如補(bǔ)充益生菌等)作為預(yù)防和治療流感病毒感染的輔助手段。Zhang等[33]研究表明，小鼠感染H7N9病毒后可通過增加腸道內(nèi)的動(dòng)物雙歧桿菌等細(xì)菌的數(shù)量從而促進(jìn)輔酶A等的生物合成來抵抗流感病毒感染，而且通過灌胃補(bǔ)充雙歧桿菌可以提高小鼠對(duì)流感病毒感染的抵抗力。因此，通過將16S rRNA基因的測(cè)序結(jié)果與其他組學(xué)(如宏基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)和代謝組學(xué)等)的結(jié)果聯(lián)合分析，明確是哪一類細(xì)菌及其代謝產(chǎn)物在疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起作用，之后針對(duì)其進(jìn)行補(bǔ)充或是阻斷，就可以更好地預(yù)防和治療疾病。

4 結(jié) 論

H9N2 AIV感染可引起B(yǎng)ALB/c小鼠腸道菌群的群落結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯改變，并且在感染33 d后仍未恢復(fù)，而且這主要是由于各物種的相對(duì)豐度發(fā)生了明顯改變，在門水平上主要表現(xiàn)為H9N2 AIV感染后小鼠腸道菌群中的厚壁菌門細(xì)菌相對(duì)豐度先減少后逐漸增多，而擬桿菌門細(xì)菌的相對(duì)豐度則先增多后逐漸減少。