茵梔黃注射液聯(lián)合甘草酸二胺對慢性乙型肝炎肝纖維化患者血清活性氧、DJ-1和肝功能的影響研究Δ

董巧云，劉曉紅，哈斯塔娜，王 燕，武 娜，宋愛云

(1.巴彥淖爾市醫(yī)院消化科，內(nèi)蒙古 巴彥淖爾015000； 2.巴彥淖爾市醫(yī)院中醫(yī)科，內(nèi)蒙古 巴彥淖爾 015000； 3.巴彥淖爾市醫(yī)院胃腸外科，內(nèi)蒙古 巴彥淖爾015000； 4.巴彥淖爾市醫(yī)院腫瘤科，內(nèi)蒙古 巴彥淖爾 015000； 5.巴彥淖爾市醫(yī)院檢驗科，內(nèi)蒙古 巴彥淖爾015000)

乙型肝炎屬于臨床常見的傳染性疾病之一，對于慢性乙型肝炎患者而言，病程較長，乙型肝炎病毒DNA大量復(fù)制，持續(xù)對肝細胞造成損傷，因此極易出現(xiàn)肝纖維化[1-2]。西醫(yī)認為，肝纖維化是指在慢性肝臟疾病發(fā)展過程中，肝細胞被反復(fù)破壞后再生，糖蛋白、膠原以及蛋白多糖等細胞外基質(zhì)在肝臟中彌漫、過度沉積和異常分布，是肝臟對慢性損傷的病理性修復(fù)反應(yīng)[3-4]。中醫(yī)將肝纖維化歸屬于“助痛”“積聚”范疇，認為肝纖維化是正氣虛弱、濕熱邪毒入侵機體導(dǎo)致的氣滯血虛、脈絡(luò)不通以及血瘀于肝[5]。針對乙型肝炎肝纖維化，一方面需進行抗病毒治療，另一方面需實施抗纖維化治療[6]。甘草酸二胺具有較強的抗炎、保護肝細胞以及改善肝功能的作用，對多種具有肝毒性的化學(xué)藥所導(dǎo)致的肝臟損傷均能發(fā)揮防治作用，對于復(fù)合致病因子引起的慢性肝損害，可顯著提高患者的存活率以及改善肝功能[7]。茵梔黃注射液具有清熱、解毒、利濕以及退黃的功效，并且對急性、遷延性以及慢性肝炎均能發(fā)揮良好的治療效果[8]。對于乙型肝炎肝纖維化患者采用茵梔黃注射液和甘草酸二胺聯(lián)合治療是否可提高治療效果，目前臨床尚無統(tǒng)一結(jié)論。本研究對茵梔黃注射液聯(lián)合甘草酸二胺治療慢性乙型肝炎肝纖維化的臨床效果進行研究，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 資料來源

選擇2016年10月至2019年10月在巴彥淖爾市醫(yī)院確診并進行治療的82例慢性乙型肝炎肝纖維化患者為研究對象。診斷標(biāo)準(zhǔn)：(1)B超、CT以及肝臟超聲波檢查結(jié)果提示，肝臟出現(xiàn)纖維化改變；(2)Ⅲ型前膠原(PC-Ⅲ)、Ⅳ型膠原(Ⅳ-C)、層粘連蛋白(LN)以及透明質(zhì)酸(HA)水平檢測提示，肝臟存在纖維化改變。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)全部患者經(jīng)臨床診斷，均符合慢性乙型肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)B超、CT等檢查提示出現(xiàn)肝纖維化表現(xiàn)[9]；(2)近期未進行抗病毒治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)伴有其他肝炎病毒類型者；(2)存在肝硬化或肝癌等疾病者；(3)伴有心腦血管嚴(yán)重病變者；(4)對本研究用藥存在過敏癥狀者；(5)存在嚴(yán)重認知功能障礙，無法正常進行言語交流者。采取隨機數(shù)字排列表法將82例患者分為對照組(41例)以及研究組(41例)。對照組、研究組患者中男性患者分別為35、34例，女性患者分別為6、7例；平均年齡分別為(52.29±3.91)、(52.48±4.28)歲；平均病程分別為(8.81±2.08)、(8.94±2.23)年。兩組患者的基線資料相似，具有可比性。本研究入選患者或其家屬均在了解本研究的相關(guān)條款和內(nèi)容后簽署了知情同意書，同時本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核通過。

1.2 方法

全部患者入院后均完善相關(guān)檢查，予以對照組患者甘草酸二胺膠囊[規(guī)格：50 mg(以C42H68N2O16計)]口服治療，1次150 mg，1日3次。予以研究組患者茵梔黃注射液以及甘草酸二胺治療，其中甘草酸二胺使用方法與對照組相同；將茵梔黃注射液(規(guī)格：每支裝10 ml)20 ml與10%葡萄糖注射液250 ml充分混合后靜脈滴注，1日1次。兩組患者均持續(xù)治療8周。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)分別于治療前后采集患者空腹上臂靜脈血樣本5 ml，將其放置在3 000 r/min的離心機中進行持續(xù)10 min的離心處理，選擇上層血清進行活性氧(ROS)水平檢測，采用比色法進行檢測，檢測試劑盒采購至南京建成生物工程研究所。(2)分別于治療前后穿刺并采集患者肝臟組織標(biāo)本，DJ-1蛋白水平通過免疫組化染色法檢測，并利用酶標(biāo)儀繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算相應(yīng)濃度值[10]。(3)分別于治療前后檢測兩組患者血清學(xué)指標(biāo)，包含丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、凝血酶時間(TT)以及總膽紅素(TBIL)。(4)分別于治療前后檢測每組患者肝纖維化指標(biāo)，包含PC-Ⅲ、LN、HA以及Ⅳ-C。(5)分析血清ROS與DJ-1蛋白的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組患者治療前后血清ROS水平和DJ-1蛋白水平變化情況比較

治療前，兩組患者的血清ROS和DJ-1蛋白水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；研究組患者治療后的血清ROS、DJ-1蛋白水平明顯低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組患者治療前后血清ROS水平和DJ-1蛋白水平變化情況比較Tab 1 Comparison of changes in serum ROS and DJ-1 protein levels between two groups before and after

2.2 兩組患者治療前后血清學(xué)指標(biāo)水平變化情況比較

研究組患者治療后的ALT、AST以及TBIL水平明顯低于對照組，TT明顯長于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩組患者治療前后血清學(xué)指標(biāo)水平變化情況比較Tab 2 Comparison of changes of serum indicators between two groups before and after

2.3 兩組患者治療前后肝纖維化指標(biāo)水平變化情況比較

研究組患者治療后的PC-Ⅲ、LN、HA以及Ⅳ-C水平明顯低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 兩組患者治療前后肝纖維化指標(biāo)水平變化情況比較Tab 3 Comparison of changes of liver fibrosis indicators between two groups before and after

2.4 慢性乙型肝炎肝纖維化患者血清ROS水平與DJ-1表達水平的相關(guān)性

Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，慢性乙型肝炎肝纖維化患者血清ROS水平與DJ-1表達水平呈較明顯的正相關(guān)性(r=0.686，P<0.05)。ROS：平均值為67.003 2，標(biāo)準(zhǔn)差為12.535 7；DJ-1：平均值為1.688 5，標(biāo)準(zhǔn)差為0.284 9。相關(guān)性曲線見圖1。

圖1 慢性乙型肝炎肝纖維化患者血清ROS水平與DJ-1表達水平的相關(guān)性Fig 1 Correlation of serum ROS and DJ-1 expression levels in patients with chronic hepatitis B hepatic fibrosis

2.5 慢性乙型肝炎肝纖維化患者血清ROS、DJ-1表達水平與肝纖維化指標(biāo)的相關(guān)性

慢性乙型肝炎肝纖維化患者血清ROS、DJ-1表達水平與肝纖維化指標(biāo)(PC-Ⅲ、LN、HA以及Ⅳ-C)均呈現(xiàn)正相關(guān)性(P<0.05)，見表4。

表4 慢性乙型肝炎肝纖維化患者血清ROS、DJ-1表達水平與肝纖維化指標(biāo)的相關(guān)性Tab 4 Correlation between serum ROS and DJ-1 expression levels and liver fibrosis indicators in patients with chronic hepatitis B hepatic fibrosis

3 討論

肝纖維化是指因致病因子導(dǎo)致肝內(nèi)結(jié)締組織異常增生。任何肝臟損傷在肝臟修復(fù)愈合過程中都會存在肝纖維化過程，若損傷因素長期不能去除，纖維化過程長時間持續(xù)則會發(fā)展成肝硬化，對患者生命安全產(chǎn)生嚴(yán)重威脅[11-12]。肝炎是引起肝纖維化的重要因素之一，因此，對于乙型肝炎病毒感染患者，采取有效措施治療對改善其肝纖維化程度具有積極意義[13-14]。

正常情況下，DJ-1蛋白大部分存在于膜間隙以及細胞質(zhì)中，當(dāng)受到氧化應(yīng)激反應(yīng)刺激后，DJ-1蛋白可向線粒體轉(zhuǎn)位，隨著刺激的進一步加重，可持續(xù)向細胞核移位，進而發(fā)揮抗氧化效果[15]。甘草酸二胺是從中藥甘草中提取的有效成分，可調(diào)節(jié)患者肝細胞代謝，增強肝細胞活性，進而促進肝功能恢復(fù)。其一方面可發(fā)揮抗炎效果，進而避免肝炎對患者肝細胞造成持續(xù)損傷；另一方面可發(fā)揮較高的抗氧化效果，阻礙纖維生成細胞大量增生，進而發(fā)揮抗纖維化作用[16]。肝纖維化的發(fā)展與氧化應(yīng)激密切相關(guān)，過量的活性氧簇堆積是氧化應(yīng)激的主要特征。蔡熙等[8]的研究結(jié)果顯示，茵梔黃注射液可改善患者ALT、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶以及AST等指標(biāo)水平，提高疾病治療效果。本研究中，研究組患者治療后的血清ROS、DJ-1蛋白水平明顯低于對照組；ALT、AST以及TBIL水平明顯低于對照組，TT明顯長于對照組；PC-Ⅲ、LN、HA以及Ⅳ-C水平明顯低于對照組，上述差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，慢性乙型肝炎肝纖維化患者血清ROS水平與DJ-1表達水平呈較明顯的正相關(guān)性，慢性乙型肝炎肝纖維化患者血清ROS、DJ-1表達水平與肝纖維化指標(biāo)PC-Ⅲ、LN、HA以及Ⅳ-C水平均呈現(xiàn)正相關(guān)性。有文獻報道，敲除DJ-1基因可引起線粒體形態(tài)以及功能改變，DJ-1蛋白表達水平降低可使肝細胞氧自由基水平降低，同時減少吞噬細胞和炎癥細胞的浸潤，從而延緩了肝纖維化的進展[17]。

有研究結(jié)果顯示，單一使用甘草酸二胺進行治療，雖然可發(fā)揮一定治療效果，但是相關(guān)指標(biāo)的改善程度不及聯(lián)合其他方法治療組，且聯(lián)合組患者在治療過程中未發(fā)現(xiàn)明顯的不良反應(yīng)，具有較高的安全性[18]。茵梔黃注射液中包含黃芩、梔子以及茵陳，其中黃芩可發(fā)揮清熱瀉火的功效；梔子具有護肝利膽的效果；茵陳可發(fā)揮利濕清熱的效果，還可促進膽汁分泌以及排泄，使血液中膽紅素水平降低，并發(fā)揮抗菌作用[19]。茵梔黃注射液與甘草酸二胺聯(lián)合應(yīng)用，可顯著提高治療效果，改善患者的肝功能以及肝纖維化指標(biāo)水平。

綜上所述，對慢性乙型肝炎肝纖維化患者采用茵梔黃注射液聯(lián)合甘草酸二胺治療，可改善患者機體血清ROS、DJ-1蛋白水平以及肝功能，延緩肝纖維化進程，提高治療效果。