長(zhǎng)治地區(qū)人群中HLA-B*1502基因頻率分析

黎紅，王玉芬，楊陽(yáng)，李小梅

(1.長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院研究生學(xué)院，山西 長(zhǎng)治 046000；2.長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院附屬和平醫(yī)院，山西 長(zhǎng)治 046000)

卡馬西平(CMZ)是一種電壓依賴性鈉通道阻滯劑，能夠使動(dòng)作電位興奮期延長(zhǎng)，因此能夠抑制丘腦腹前核至額葉神經(jīng)沖動(dòng)的傳導(dǎo)。臨床上常用于治療癲癇、三叉神經(jīng)痛、躁郁癥及慢性疼痛等，藥效明顯且價(jià)格低廉，但其有效血藥濃度范圍窄，藥物不良反應(yīng)發(fā)生率高，嚴(yán)重時(shí)甚至可能致死[1-2]。卡馬西平導(dǎo)致的皮膚不良反應(yīng)是一種涉及皮膚黏膜的全身綜合征，通常起病急，臨床表現(xiàn)為全身皮膚黏膜的剝脫。2014年，世界變態(tài)反應(yīng)組織(WAO)按皮膚剝脫面積占體表總面積的比例，將卡馬西平導(dǎo)致的皮膚不良反應(yīng)分為以下3類：史蒂芬斯-強(qiáng)森綜合征(SJS)(累及皮膚面積<10%)、SJS/中毒性表皮壞死松解癥(TEN)(累及皮膚面積10%～30%)、TEN(累及皮膚面積>30%)。目前認(rèn)為SJS/TEN是對(duì)藥物的遲發(fā)型超敏反應(yīng)，該病臨床罕見(jiàn)，發(fā)病率約為5.76 例/百萬(wàn)人，亞裔和非裔人群的發(fā)病率為白種人群的兩倍，無(wú)性別差異，1～10 歲兒童和80 歲以上患者發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)最高。而在亞洲人群中，卡馬西平是最常引發(fā)SJS/TEN的藥物，占藥物引發(fā)皮膚不良反應(yīng)的25%～33%[3]。2004年Chung等[4]首次報(bào)道卡馬西平致SJS/TEN與人類白細(xì)胞抗原(HLA)-B*1502基因具有關(guān)聯(lián)性。HLA基因是由一組緊密連鎖的復(fù)等位基因位點(diǎn)組成，具有高度多態(tài)性，主要功能是將藥物及其代謝產(chǎn)物包裝，呈遞給T細(xì)胞，使T胞活化，從而使自身淋巴細(xì)胞或皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞發(fā)生凋亡[5]。目前全國(guó)各地(多為南方地區(qū))的科研人員對(duì)卡馬西平所致SJS/TEN與HLA-B*1502的相關(guān)性進(jìn)行研究，證實(shí)了卡馬西平所致的皮膚不良反應(yīng)與該基因有強(qiáng)烈相關(guān)性，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)各地區(qū)該基因的頻率存在很大差異[6-14]。例如在東南亞國(guó)家，HLA-B*1502的基因頻率為1%～8%，而在亞洲東北部和歐洲地區(qū)，HLA-B*1502的基因頻率則低于0.4%[15-16]。目前我國(guó)很多地區(qū)，尤其是北方地區(qū)尚缺乏對(duì)HLA-B*1502流行性的明確研究，未有研究分析過(guò)山西地區(qū)HLA-B*1502等位基因的基因頻率。本文采用兩種方法對(duì)347 例需服用卡馬西平的患者及100名健康人進(jìn)行HLA-B*1502基因篩查，旨在了解和分析長(zhǎng)治地區(qū)人群中HLA-B*1502的基因頻率，探討在日常臨床實(shí)踐中進(jìn)行HLA-B*1502篩查的必要性，為研究中國(guó)不同地區(qū)該基因頻率提供參考數(shù)據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

在2018年10月—2019年3月就診的患者中篩選研究對(duì)象。若患者診斷為糖尿病周?chē)窠?jīng)痛、癲癇、三叉神經(jīng)痛或者其他疾病導(dǎo)致的神經(jīng)痛，不考慮其是否正在服用卡馬西平，且不考慮其是否正在服用其他藥物即入選為觀察組。共347 例患者符合條件，其中糖尿病周?chē)窠?jīng)痛197 例(男114 例，女83 例)，癲癇78 例(男49 例，女29 例)，三叉神經(jīng)痛53 例(男26 例，女27 例)及其他神經(jīng)痛19 例(男9 例，女10 例)。另外隨機(jī)抽取健康人100 名，設(shè)為對(duì)照組，其中男52 例，女48 例。所有研究對(duì)象均采集靜脈血作為樣本，以乙二胺四乙酸(EDTA)作為抗凝劑，提取DNA。同時(shí)記錄研究對(duì)象的臨床診斷、性別、年齡以及樣本編號(hào)。

1.2 HLA-B*1502基因型的檢測(cè)

采用熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)溶解曲線法(PCR法)和核酸序列測(cè)定法(測(cè)序法)檢測(cè)每份樣本。HLA-B*1502基因檢測(cè)試劑盒(廈門(mén)致善生物科技股份有限公司提供)采用熒光PCR熔解曲線法，首先用引物擴(kuò)增人HLA-B基因，然后進(jìn)行熔解曲線分析，最后根據(jù)不同基因型模板與特定探針雜交體熔解過(guò)程中的DNA熔解溫度(Tm值)的差異來(lái)判斷樣本是否帶有HLA-B*1502基因。核酸序列測(cè)定是目前臨床上DNA突變檢測(cè)的參比方法，同時(shí)在HLA-B*1502基因檢測(cè)中廣泛使用，可以檢測(cè)出基因突變的具體位點(diǎn)和堿基變化，從而直接得到基因型，不僅分辨率高，而且可大規(guī)模進(jìn)行。此外，其精確度可滿足本研究的要求。

1.3 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，分類數(shù)據(jù)使用兩獨(dú)立樣本的卡方檢驗(yàn)分析其相關(guān)性，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。HLA-B*1502陽(yáng)性率=HLA-B*1502陽(yáng)性樣本數(shù)/樣本總數(shù)×100%，HLA-B*1502基因頻率=HLA-B*1502等位基因數(shù)/(2×樣本總數(shù))×100%。測(cè)序法是國(guó)際組織相容性工作組(IHWG)公布的基因序列分析方法，精確度高，因此作為金標(biāo)準(zhǔn)來(lái)評(píng)價(jià)PCR法的診斷性能，以靈敏度、特異性、準(zhǔn)確性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值及Kappa值作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。

2 結(jié) 果

觀察組中HLA-B*1502陽(yáng)性9 例，對(duì)照組中HLA-B*1502陽(yáng)性3 例。通過(guò)計(jì)算可得出：在長(zhǎng)治地區(qū)，需服用卡馬西平的患者中HLA-B*1502的陽(yáng)性率為2.59%，基因頻率為0.013，而這兩項(xiàng)數(shù)據(jù)在健康人中分別為3.00%與0.015，在長(zhǎng)治地區(qū)總研究人群中為2.68%與0.013(見(jiàn)表1)。入選樣本中，男性HLA-B*1502陽(yáng)性率為3.20%，女性為2.03%。年齡、性別及臨床診斷等因素對(duì)HLA-B*1502陽(yáng)性率的影響比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見(jiàn)表2)。

以測(cè)序法為金標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)比較PCR法檢測(cè)結(jié)果與測(cè)序法的一致性評(píng)價(jià)其檢測(cè)性能，對(duì)比結(jié)果見(jiàn)表3。經(jīng)比較得出：PCR的臨床靈敏度(真陽(yáng)性率)=12/12×100%=100%，95%置信區(qū)間為1；臨床特異性(真陰性率)=435/435×100%=100%，95%置信區(qū)間為1；總符合率=(12+435)/447×100%=100%，95%置信區(qū)間為1；對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行Kappa一致性檢驗(yàn)，計(jì)算Kappa值。與測(cè)序法結(jié)果比對(duì)：PA=(435+12)/435=1；Pe=[(435+0)(435+0)+(12+0)(12+0)]/4 472=0.95，Kappa=1，其中PA為“實(shí)際一致率”，Pe為“理論一致率”。

目前關(guān)于HLA-B*1502基因頻率的研究多為區(qū)域性調(diào)查，缺乏對(duì)該基因明確的流行性研究?，F(xiàn)將中國(guó)報(bào)道過(guò)的地區(qū)及世界部分國(guó)家報(bào)道過(guò)的HLA-B*1502基因頻率的結(jié)果總結(jié)于表4和表5。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在不同的國(guó)家和不同地區(qū)之間HLA-B*1502基因頻率是不同的。從世界范圍來(lái)看，中國(guó)、印度、菲律賓、泰國(guó)及印度尼西亞的人群中HLA-B*1502基因頻率較高，歐美及日韓該基因頻率較低。從中國(guó)范圍來(lái)看，南方地區(qū)人群HLA-B*1502基因頻率普遍高于北方地區(qū)[17]。

3 討 論

由本文可知，在不同國(guó)家和不同地區(qū)之間HLA-B*1502基因頻率是不同的，其中中國(guó)漢族人在世界范圍內(nèi)屬于基因頻率較高人群。2007年美國(guó)食品和藥物管理局(FDA)建議亞裔人群在使用卡馬西平前需篩查HLA-B*1502等位基因，之后，各國(guó)的用藥指南也紛紛給出在服用卡馬西平

表1 所有研究人群中HLA-B*1502的陽(yáng)性率及基因頻率

表2 相關(guān)影響因素及其P值

表3 兩種方法的方法學(xué)比較

表4 中國(guó)部分地區(qū)人群HLA-B*1502的基因頻率

表5 部分國(guó)家人群HLA-B*1502的基因頻率[17]

前進(jìn)行基因篩查的建議。研究[18]顯示中國(guó)臺(tái)灣地區(qū)的HLA-B*1502篩查已經(jīng)大大降低了卡馬西平導(dǎo)致的SJS/TEN發(fā)病率，從0.24%(2005年—2008年)下降至0(2008年—2011年)。如今HLA-B*1502基因雖然被認(rèn)為是中國(guó)漢族人群中CBZ-SJS/TEN的基因標(biāo)志物，但大部分中國(guó)內(nèi)陸尚未對(duì)首次服用卡馬西平的患者開(kāi)展HLA-B*1502等位基因的檢測(cè)。HLA-B*1502陽(yáng)性的患者服用卡馬西平發(fā)生嚴(yán)重皮膚不良反應(yīng)的概率較高，且致死率也較高，應(yīng)該引起臨床醫(yī)生的重視，建議患者在首次服用卡馬西平治療之前，進(jìn)行HLA-B*1502等位基因的檢測(cè)，以預(yù)防嚴(yán)重皮膚不良反應(yīng)的發(fā)生，促進(jìn)臨床合理用藥。

本研究使用兩種方法進(jìn)行HLA-B*1502的基因測(cè)定，一種是定性的PCR法，一種是測(cè)序法。結(jié)果顯示，在檢測(cè)的447 例樣本中沒(méi)有出現(xiàn)不一致性。PCR法與金標(biāo)準(zhǔn)測(cè)序法相比，HLA-B*1502基因臨床靈敏度為100%，特異性為100%，總符合率為100%，Kappa系數(shù)為1。說(shuō)明PCR法與測(cè)序法有較高的一致性。PCR法由于取材方便、操作較簡(jiǎn)便、檢測(cè)速度較快、成本較低，更適用于臨床大批量的快速篩查工作。