肺結(jié)核感染患者中TRF、IAP及HMGB1的表達(dá)及意義

王月彩 戎燕筱 王顯雷 張敬美 孫揚(yáng) 蘇圓圓★

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的慢性傳染疾病，以肺部感染最為常見(jiàn)。盡管運(yùn)用SBAR（Situation，Background，Assessment，Recommendation）溝通模式可以提高抗結(jié)核藥不良反應(yīng)的早期識(shí)別率，然而仍有部分患者病情控制不理想，因此尋求新的治療靶點(diǎn)成為臨床關(guān)注焦點(diǎn)［1］。血清轉(zhuǎn)鐵蛋白（transferrin，TRF）是結(jié)合桿菌與宿主相互作用機(jī)制研究中的重要指標(biāo)，而免疫抑制酸性蛋白（Immunousuppressive Acidic Protein，IAP）是一種對(duì)細(xì)胞、體液免疫均具有強(qiáng)烈抑制作用的蛋白，兩者在肺部疾病中的應(yīng)用價(jià)值一直是研究的熱點(diǎn)［2］。細(xì)胞外高遷移率族蛋白B1（high mobility group box-1，HMGB1）作為重要的炎性介質(zhì)和炎性因子，可介導(dǎo)肺部炎癥反應(yīng)［3］。目前有關(guān)HMGB1 與結(jié)核病關(guān)系的報(bào)道較少，本研究就TRF、IAP 及HMGB1 在肺結(jié)核感染患者中的表達(dá)及意義進(jìn)行分析，旨在為臨床監(jiān)測(cè)療效提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年6月至2019年6月本院收治的142 例肺結(jié)核患者，作為觀(guān)察組。其中男89 例，女53 例，平均年齡（46.95±7.53）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì)制定的《肺結(jié)核診斷和治療指南》［4］中的診斷標(biāo)準(zhǔn)。②臨床資料完整無(wú)缺失。排除標(biāo)準(zhǔn)：①入組前有激素使用史者；②合并其他非結(jié)核性肺部疾患；③合并免疫系統(tǒng)、血液系統(tǒng)等疾病者；④移植術(shù)后以及自身免疫病等。其中肺結(jié)核病灶進(jìn)展期46 例、吸收好轉(zhuǎn)期53例、穩(wěn)定期43 例。分期標(biāo)準(zhǔn)［5］：活動(dòng)進(jìn)展期：凡具備下列1 項(xiàng)者屬活動(dòng)進(jìn)展期：新發(fā)現(xiàn)活動(dòng)性結(jié)核病灶；新出現(xiàn)空洞；空洞增大；病灶較前惡化；痰結(jié)核分支桿菌陽(yáng)性。吸收好轉(zhuǎn)期：凡具備下列1 項(xiàng)者屬好轉(zhuǎn)期：結(jié)核病灶較前吸收好轉(zhuǎn)；空洞閉合或縮小；痰結(jié)核分支桿菌陰轉(zhuǎn)。穩(wěn)定期：凡具備下列1 項(xiàng)者屬穩(wěn)定期：病變無(wú)活動(dòng)性；空洞閉合；痰結(jié)核分支桿菌連續(xù)陰性（每個(gè)月至少查痰3 次）達(dá)6月以上，如有空洞存在，則痰結(jié)核分支桿菌須連續(xù)陰性1年以上。選取同期于本院體檢且臨床資料完整的100 例健康者作為對(duì)照組，其中男66 例，女34 例，平均年齡（46.81±7.49）歲。兩組性別、年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究已獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有受試者均簽署知情同意書(shū)。

1.2 研究方法

收集所有研究對(duì)象臨床資料，包括年齡、性別、機(jī)械通氣、肝損害、復(fù)發(fā)情況、治療情況、基礎(chǔ)疾病、吸煙史、急性生理及慢性健康狀況Ⅱ（acute physiology and chronic health evaluation scoring system，APACHEⅡ）［6］（評(píng)分范圍0～30 分，分?jǐn)?shù)越高表示病情越危急）等，采用非條件Logistic回歸模型分析影響肺結(jié)核患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

1.3 觀(guān)察指標(biāo)

收集所有研究對(duì)象空腹靜脈血，離心（3 500 r/min，5 min，離心半徑8 cm）后取分離血清。分離出血清后采用免疫透射比濁法檢測(cè)TRF 水平，試劑盒購(gòu)自羅氏公司，檢測(cè)儀器為美國(guó)Arry-360 特定蛋白分析儀，按照使用說(shuō)明書(shū)操作，TRF 試劑盒正常值范圍：2.20～4.0 g/L。IAP 檢測(cè)采用瓊脂擴(kuò)散法，試劑盒購(gòu)自上海雄科實(shí)業(yè)有限公司，IAP 試劑盒正常值范圍：250 μg/mL～500 μg/mL。HMGB1水平采用超敏酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行測(cè)定，試劑盒購(gòu)自深圳晶美生物工程有限公司，HMGB1 試劑盒正常值范圍2.5～80.0 ng/mL。療效分為無(wú)效、有效［6］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用（±s）描述，組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用F檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料通過(guò)n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；影響肺結(jié)核患者預(yù)后的相關(guān)因素采用非條件單因素和多因素Logistic回歸分析；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組TRF、IAP 及HMGB1 水平比較

觀(guān)察組TRF、IAP 及HMGB1 水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組TRF、IAP 及HMGB1 水平比較（±s）Table 1 Comparison of TRF，IAP and HMGB1levels between 2 groups（±s）

表1 兩組TRF、IAP 及HMGB1 水平比較（±s）Table 1 Comparison of TRF，IAP and HMGB1levels between 2 groups（±s）

組別觀(guān)察組對(duì)照組t 值P 值n 142 100 TRF（g/L）12.52±5.43 1.09±0.74 13.400＜0.001 IAP（μg/mL）841.26±152.30 302.69±90.12 31.662＜0.001 HMGB1（ng/mL）99.55±7.32 4.02±1.60 20.856＜0.001

2.2 不同肺結(jié)核病灶進(jìn)展情況患者TRF、IAP 及HMGB1 水平比較

進(jìn)展期患者TRF、IAP 及HMGB1 水平均高于吸收好轉(zhuǎn)期及穩(wěn)定期患者，吸收好轉(zhuǎn)期患者TRF、IAP 及HMGB1 水平高于穩(wěn)定期患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 不同肺結(jié)核病灶進(jìn)展情況患者TRF、IAP 及HMGB1水平比較（±s）Table 2 Comparison of TRF，IAP and HMGB1 levels in patients with different pulmonary tuberculosis lesion progression（±s）

表2 不同肺結(jié)核病灶進(jìn)展情況患者TRF、IAP 及HMGB1水平比較（±s）Table 2 Comparison of TRF，IAP and HMGB1 levels in patients with different pulmonary tuberculosis lesion progression（±s）

組別進(jìn)展期吸收好轉(zhuǎn)期穩(wěn)定期F 值P 值n 46 53 43 TRF（μmol/L）14.63±2.82 11.33±1.79 6.41±1.07 184.100＜0.001 IAP（μg/mL）915.60±100.87 836.94±149.52 763.80±140.92 10.510＜0.001 HMGB1（ng/mL）125.67±2.75 108.95±4.66 92.08±5.65 620.340＜0.001

2.3 142 例肺結(jié)核患者預(yù)后轉(zhuǎn)歸情況

截止治療結(jié)束，142 例肺結(jié)核患者治療無(wú)效者41 例，有效者101 例，治療有效率為71.13%。

2.4 影響肺結(jié)核患者預(yù)后的單因素分析

機(jī)械通氣、復(fù)發(fā)、APACHEⅡ評(píng)分、TRF、IAP、HGMB1 水平與肺結(jié)核患者預(yù)后呈正相關(guān)（P＜0.05），規(guī)范化治療與肺結(jié)核患者預(yù)后呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 影響肺結(jié)核患者預(yù)后的單因素分析［n（%），（±s）］Table 3 single factor analysis of prognosis of patients with pulmonary tuberculosis［n（%），（±s）］

表3 影響肺結(jié)核患者預(yù)后的單因素分析［n（%），（±s）］Table 3 single factor analysis of prognosis of patients with pulmonary tuberculosis［n（%），（±s）］

臨床特征年齡（歲）預(yù)后χ2/t 值P 值20～35 36～60＞60 0.312 0.856性別1.066 0.302復(fù)發(fā)63.561＜0.001規(guī)范化治療58.218＜0.001合并基礎(chǔ)疾病0.006 0.940吸煙史2.554 0.110機(jī)械通氣96.861＜0.001肝損害男女有無(wú)是否有無(wú)有無(wú)有無(wú)有無(wú)例數(shù)（n=142）49 50 43 89 53 50 92 84 58 52 90 80 62 48 94 51 91 APACHEⅡ評(píng)分（分）TRF（μmol/L）IAP（μg/mL）HMGB1（ng/mL）有效組（n=101）34（33.66）37（36.63）30（29.71）66（65.35）35（34.65）15（14.85）86（85.15）80（79.21）21（20.79）37（36.63）64（63.37）51（50.50）50（49.50）9（8.91）92（91.09）33（32.67）68（67.33）18.05±2.63 63.17±14.56 471.26±85.98 56.57±1.59無(wú)效組（n=41）15（36.58）13（31.71）13（31.71）23（56.10）18（43.90）35（85.37）6（14.63）4（9.76）37（90.24）15（36.59）26（63.41）29（70.73）12（29.27）39（95.12）2（4.88）18（43.90）23（56.10）26.18±2.71 75.84±14.61 786.09±142.03 106.08±5.49 1.598 16.548 4.695 16.178 82.837 0.206＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001

2.5 影響肺結(jié)核患者預(yù)后的多因素分析

復(fù)發(fā)（有）、規(guī)范化治療（否）、APACHEⅡ評(píng)分（≥25 分）、TRF 異常、IAP 異常及HMGB1 異常水平是影響肺結(jié)核患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 影響肺結(jié)核患者預(yù)后的多因素分析Table 4 multivariate analysis of prognosis of patients with pulmonary tuberculosis

3 討論

近年因合并艾滋病感染、結(jié)核多耐藥菌株的產(chǎn)生，肺結(jié)核的發(fā)病率、死亡率直線(xiàn)上升，肺結(jié)核患者中結(jié)核分枝桿菌的感染機(jī)制及引起的免疫反應(yīng)成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者共同探討的問(wèn)題［7］。

結(jié)核桿菌是胞內(nèi)感染菌，其免疫主要是以T 細(xì)胞為主的細(xì)胞免疫［8-9］。TRF 作為結(jié)核桿菌新陳代謝中的主要參與因子，不僅可促進(jìn)中性粒細(xì)胞或小吞噬細(xì)胞的吞噬、中性粒細(xì)胞的增殖作用，還作為血漿中主要含鐵蛋白質(zhì)穿梭于細(xì)胞外液體和內(nèi)體之間，避開(kāi)溶酶體快速傳遞細(xì)胞生長(zhǎng)所需的鐵［10-11］。同樣的，IAP 主要來(lái)源于巨噬、單核、粒細(xì)胞和肝臟，實(shí)驗(yàn)證明IAP 能抑制植物血凝素誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞，導(dǎo)致輔助T 細(xì)胞和抑制性T 細(xì)胞間比例失調(diào)，抑制免疫應(yīng)答［12］。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者在腫瘤疾病的研究中發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤患者體內(nèi)IAP 水平明顯升高［13］。本研究數(shù)據(jù)提示肺結(jié)核病患者血清TRF、IAP 異常升高可能是導(dǎo)致肺結(jié)核發(fā)生、發(fā)展的原因之一，并且與病情及預(yù)后存在明顯相關(guān)性。

HMGB1 因其在凝膠電泳中有很高的遷移率而得名，是廣泛存在于真核細(xì)胞核中重要的非組蛋白核蛋白，具有多種核外生物學(xué)功能。研究顯示，HGMB1 可刺激炎癥細(xì)胞活化并向炎癥部位聚集，促進(jìn)炎性因子分泌造成細(xì)胞損傷，故其在炎性呼吸道疾病中與氣道高反應(yīng)性及氣道重構(gòu)密切相關(guān)［14］。目前有關(guān)HMGB1 與結(jié)核病關(guān)系的報(bào)道較少。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，HGMB1 可能為組織感染或細(xì)胞損傷的信號(hào)，以及機(jī)體免疫反應(yīng)增強(qiáng)的標(biāo)志［15］。本研究采用非條件多因素Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)HGMB1 水平在肺結(jié)核患者中顯著升高，且該因子水平的異常是影響肺結(jié)核患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示HGMB1 對(duì)機(jī)體免疫應(yīng)答機(jī)制的作用可能加速肺結(jié)核病情的發(fā)展，對(duì)肺結(jié)核患者病情評(píng)估、預(yù)后評(píng)價(jià)等方面有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

此外，本組研究發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)（有）、規(guī)范化治療（否）、APACHEⅡ評(píng)分（≥25 分）為影響肺結(jié)核預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，其原因可能在于復(fù)發(fā)、未規(guī)范化治療易引發(fā)結(jié)核多耐藥菌株的產(chǎn)生，影響治療療效。而APACHEⅡ評(píng)分作為判斷患者預(yù)后情況及死亡率的重要工具，其評(píng)分越高，患者預(yù)后效果越差，死亡風(fēng)險(xiǎn)越大。在臨床工作中，運(yùn)用SBAR 溝通模式可以早期識(shí)別抗結(jié)核藥物的不良反應(yīng)，同時(shí)需加強(qiáng)對(duì)合并危險(xiǎn)因素患者的干預(yù)，以改善其預(yù)后。

綜上所述，TRF、IAP 及HMGB1 水平在肺結(jié)核患者中顯著升高，三者與患者預(yù)后轉(zhuǎn)歸關(guān)系密切，可作為病情監(jiān)測(cè)及預(yù)后評(píng)估的有效指標(biāo)。