APN、TNF-α及Fibroscan受控衰減參數(shù)在非酒精性脂肪肝中的變化

高美麗 何文艷 安紅杰 田雪梅 徐金鳳 任艷平

非酒精性脂肪肝是遺傳-環(huán)境-代謝應(yīng)激相關(guān)性疾病，是指除外酒精和其他明確肝臟損傷因素所致的，以彌漫性肝細(xì)胞大泡性脂肪變性為病理特征的，與肥胖、高胰島素血癥、2 型糖尿病密切相關(guān)的臨床病理綜合征［1］。脂聯(lián)素（adiponectin，APN）在增強(qiáng)胰島素敏感性、改善肝細(xì)胞脂肪變和減輕炎癥反應(yīng)等方面發(fā)揮著重要作用，與非酒精性脂肪肝聯(lián)系密切［2］。肝臟瞬時(shí)彈性硬度檢查（Fibroscan，F(xiàn)S）即肝硬度檢測(cè)，可利用脂肪影響超聲波的傳播，通過(guò)可控衰減參數(shù)（Controlled Altenuation Parameter，CAP）檢測(cè)和定量脂肪變，可有效地檢出5%以上的肝脂肪變，同時(shí)區(qū)分輕度脂肪變與中-重度脂肪變和評(píng)價(jià)脂肪變性和纖維化［3］。調(diào)節(jié)腸道菌群是治療非酒精性脂肪肝的重要舉措，布拉氏酵母菌主要用于抗腸道中毒素。目前關(guān)于布拉氏酵母菌治療非酒精性脂肪肝的研究較少，本研究將通過(guò)探討布拉氏酵母菌對(duì)非酒精性脂肪肝患者APN、腫瘤壞死因子-α（Tumor necrosis factorα，TNF-α）及Fibroscan 受控衰減參數(shù)的影響來(lái)反映微生態(tài)制劑在非酒精性脂肪肝患者治療中的應(yīng)用價(jià)值現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年12月至2020年12月于本院肝病門(mén)診及體檢中心確診的非酒精性脂肪肝患者，納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡18～70 歲，性別不限；②符合《2018年非酒精性脂肪肝診療指南》中診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］；③肝臟彩超診斷明確脂肪肝者；④60＜谷丙轉(zhuǎn)氨酶≤250 U/L［5］。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有飲酒史（男性飲酒量＞140 g/周，女性＞70 g/周）的脂肪肝患者；②自身免疫性肝病及其他可致肝脂肪變的疾??；③肝功能?chē)?yán)重衰竭，膽道疾病、感染及惡性腫瘤；④近3 個(gè)月服用減肥藥、調(diào)脂降糖藥、保肝藥或其他可能致肝臟酶學(xué)改變的中、西藥物；⑤1 個(gè)月內(nèi)使用益生菌制劑、免疫抑制劑、抗生素等影響腸道菌群的藥物或食物。最終納入100 例患者，根據(jù)醫(yī)囑制定的干預(yù)方案的差異分為研究組（n=53）和對(duì)照組（n=47），兩組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性，見(jiàn)表1。本研究已獲得院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò)，所有受試者均簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

對(duì)照組僅進(jìn)行生活及行為方式的干預(yù)，主要為飲食控制及運(yùn)動(dòng)，修正不良行為。飲食要求粗、細(xì)糧搭配、定時(shí)進(jìn)餐、避免進(jìn)食過(guò)飽；以易于長(zhǎng)期堅(jiān)持、低強(qiáng)度、能耐受的動(dòng)態(tài)運(yùn)動(dòng)即有氧運(yùn)動(dòng)為主，如慢跑、中快速步行（115～125 步/分）、游泳等運(yùn)動(dòng)項(xiàng)目，每天30 min，同時(shí)做8～10 組阻抗訓(xùn)練，每周2 次。研究組患者在對(duì)照組的基礎(chǔ)上，給予布拉氏酵母菌（法國(guó)百科達(dá)制藥廠，批準(zhǔn)文號(hào)：S20150051，規(guī)格：0.25 g×6 袋），用法：0.5 g 每日2 次共服12 周。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 肝功能和APN

全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)兩組治療前后血清APN、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Alanine transaminase，ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate transaminase，AST）、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（γ-glutamyltransferase，GGT）、血清總膽紅素（The total bilirubin，TBIL）。

1.3.2 炎性因子

腫瘤壞死因子-α（Tumor necrosis factorα，TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（（interleukin，IL-6）及白細(xì)胞介素-10（（interleukin，IL-10）水平，治療前、治療后12 周后抽取所有患者清晨空腹靜脈血3 mL，離心（3 500 r/min，5 min，離心半徑8 cm）后取分離血清。通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法法測(cè)定兩組的TNF-α、IL-6、IL-10 濃度，由北京美康生物技術(shù)研究中心有限責(zé)任公司提供檢測(cè)所用的試劑，根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟操作。

表1 兩組一般資料比較［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of general data between 2 groups［n（%），（±s）］

表1 兩組一般資料比較［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of general data between 2 groups［n（%），（±s）］

組別研究組對(duì)照組χ2/t 值P 值n 性別男30（56.60）28（59.57）0.090 0.764女53 47 23（43.40）19（40.43）年齡（歲）62.54±4.31 62.41±4.35 0.150 0.881病程（年）5.74±1.29 5.78±1.32 0.153 0.879病情輕度14（26.42）12（25.53）0.036 0.982中度23（43.40）20（42.55）重度16（30.18）15（31.92）

1.3.3 Fibroscan 受控衰減參數(shù)測(cè)定脂肪肝

使用Fibroscan-502 機(jī)型（法國(guó)Echosens 公司）M 探頭進(jìn)行肝臟脂肪變定量檢測(cè)，以CAP 表示，單位為dB/m，每例對(duì)象成功檢測(cè)10 次，以所有有效檢測(cè)結(jié)果的中位數(shù)為最終結(jié)果，所有測(cè)量值的四分位間距與中位數(shù)的比值（IQR/med）＜30%，且成功率（成功檢測(cè)次數(shù)/總檢測(cè)次數(shù)）＞60%為有效測(cè)量［6］。

1.3.4 血脂

甘油三酯（Triglyceride，TG）、高密度脂蛋白膽固醇（High density lipoprotein cholesterol，HDL-C）及低密度脂蛋白膽固醇（Low density lipoprotein cholesterin，LDL-C），于治療前、治療12 周后凌晨抽取所有研究對(duì)象空腹靜脈血，實(shí)驗(yàn)室靜置30 min 后離心去上清液，然后使用東芝TBA 120 型全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行測(cè)算。

1.3.5 體質(zhì)指數(shù)（Body Mass Index，BMI）

治療前、治療12 周后測(cè)量?jī)山M患者身高、體重，計(jì)算BMI=體重（kg）÷身高（m2）［7］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用（±s）描述，行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，行χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組肝功能和APN 比較

兩組TBIL、DBIL、ALB、PTA、APN 的水平在治療前比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療后，研究組的TBIL 和DBIL 水平較對(duì)照組低，APN、ALB、PTA 水平較對(duì)照組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

2.2 兩組炎性因子比較

治療前兩組炎性指標(biāo)濃度比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），治療后研究組TNF-α、IL-6 均低于對(duì)照組，IL-10 高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

2.3 兩組TG、HDL-L，LDL-C,CAP 及BMI 比較

兩組治療前TG、HDL-C、LDL-C、CAP 及BMI水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），治療后研究組TG、CHOL、HDL-C、CAP 及BMI 水較治療前及對(duì)照組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表2 兩組治療前后TBIL、DBIL、ALB、PTA 的水平（±s）Table 2 the levels of TBIL，DBIL，ALB and PTA in the two groups before and after treatment（±s）

表2 兩組治療前后TBIL、DBIL、ALB、PTA 的水平（±s）Table 2 the levels of TBIL，DBIL，ALB and PTA in the two groups before and after treatment（±s）

組別研究組對(duì)照組t 值P 值n 53 47 TBIL（μmol/L）治療前321.59±114.76 326.40±114.58 0.209 0.835治療后96.39±36.74 185.63±87.63 6.776＜0.001 DBIL（μmol/L）治療前257.96±96.37 256.87±95.78 0.057 0.955治療后68.63±19.60 103.65±37.26 9.382＜0.001 ALB（g/L）治療前21.79±9.34 21.85±9.39 0.032 0.975治療后48.63±11.85 36.75±10.23 5.333＜0.001 PTA（%）治療前35.98±12.47 35.81±12.45 0.068 0.946治療后68.09±13.71 50.97±13.06 6.372＜0.001 APN（g/L）治療前4.06±1.25 4.13±1.26 0.278 0.781治療后7.96±1.39 5.98±1.21 7.552＜0.001

表3 兩組治療前后TNF-α、IL-6 及IL-10 比較（±s，pg/mL）Table 3 Comparison of TNF-α，IL-6 and IL-10 before and after treatment between the two groups（±s，pg/mL）

表3 兩組治療前后TNF-α、IL-6 及IL-10 比較（±s，pg/mL）Table 3 Comparison of TNF-α，IL-6 and IL-10 before and after treatment between the two groups（±s，pg/mL）

組別研究組對(duì)照組t 值P 值n 53 47 TNF-α治療前36.59±5.38 36.57±5.45 0.018 0.985治療后10.79±4.22 18.53±4.71 8.668＜0.001 IL-6治療前39.81±11.57 39.56±11.55 0.108 0.914治療后14.47±4.39 20.88±5.71 6.332＜0.001 IL-10治療前13.08±5.31 13.12±5.39 0.037 0.970治療后26.78±6.85 20.33±6.71 4.745＜0.001

表4 兩組入院時(shí)TG、HDL-C，CAP 和BMI 比較（±s）Table 4 Comparison of TG、HDL-C，CAP 和BMI between the 2 groups（±s）

表4 兩組入院時(shí)TG、HDL-C，CAP 和BMI 比較（±s）Table 4 Comparison of TG、HDL-C，CAP 和BMI between the 2 groups（±s）

組別研究組對(duì)照組t 值P 值n 53 47 TG（mmol/L）治療前5.26±0.63 5.21±0.51 0.433 0.666治療后2.07±0.42 3.88±0.56 18.409＜0.001 HDL-C（mmol/L）治療前2.63±0.86 2.68±0.85 0.292 0.771治療后0.76±0.31 1.88±0.42 15.282＜0.001 LDL-C（mmol/L）治療前5.63±0.85 5.69±0.88 0.347 0.730治療后2.03±0.52 2.94±0.61 8.052＜0.001 CAP（g/L）治療前278.63±12.85 278.79±12.89 0.062 0.951治療后235.41±10.13 249.80±11.65 6.607＜0.001 BMI（kg/）治療前31.63±1.15 31.65±1.19 0.085 0.932治療后26.96±1.03 28.52±1.15 7.156＜0.001

3 討論

非酒精性脂肪肝是當(dāng)前臨床及生活中最常見(jiàn)的慢性肝臟疾病，迄今尚無(wú)特效治療藥物。最近一系列研究顯示，腸道細(xì)菌對(duì)宿主起著免疫保護(hù)、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收、黏膜屏障、抗癌等多種作用［8］。當(dāng)腸道菌群失調(diào)時(shí)，革蘭陰性菌過(guò)度生長(zhǎng)、死亡，產(chǎn)生大量的內(nèi)毒素，內(nèi)毒素通過(guò)直接損傷肝臟及激活炎癥反應(yīng)，促使肝臟炎性損傷及脂肪變性，加速非酒精性脂肪肝發(fā)生［9］?；謴?fù)腸道微生態(tài)平衡則可能防治非酒精性脂肪肝，因此微生態(tài)制劑在非酒精性脂肪肝的治療中的作用越來(lái)越受到關(guān)注。微生態(tài)制劑包括益生菌、益生元和合生元三種，其中以益生菌應(yīng)用最多［10］。布拉氏酵母菌是益生菌的一種，可通過(guò)調(diào)節(jié)腸道菌群減少菌群失調(diào)的發(fā)生，并改善腸道防御屏障功能，減輕氧化應(yīng)激和炎癥損傷，改善肝功能和胰島素抵抗［11］。此外，布拉氏酵母菌在體內(nèi)代謝過(guò)程中產(chǎn)生的多種有機(jī)酸可下調(diào)腸道pH值并改善腸道蠕動(dòng)，促進(jìn)腸道內(nèi)產(chǎn)生的毒素排除，減輕內(nèi)毒素血癥［12］。

脂聯(lián)素是一種新發(fā)現(xiàn)的由脂肪細(xì)胞分泌的激素，具有降血脂、降血糖、改善胰島素敏感性以及拮抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用，與肥胖、2型糖尿病和胰島素抵抗密切相關(guān)［13］。因此，臨床上常利用血清脂聯(lián)素水平反映非酒精性脂肪肝病情進(jìn)展程度。本研究結(jié)果表明布拉氏酵母菌對(duì)防治非酒精性脂肪肝并阻止其發(fā)展有重要價(jià)值。此外，益生菌可減輕肝臟氧化應(yīng)激和炎癥損傷。國(guó)外研究提示，口服亞油酸和雙歧桿菌患者肝臟及脂肪組織中不飽和脂肪酸含量明顯增多，炎癥細(xì)胞因子TNF-α 及干擾素γ 含量下降［14］。這與本研究結(jié)果基本一致，說(shuō)明益生菌不僅能改變宿主脂肪酸的合成，還能降低炎癥因子的含量。

FS 利用脂肪影響超聲波的傳播，通過(guò)CAP 來(lái)檢測(cè)和定量脂肪變，可有效地檢出5%以上的肝脂肪變，是診斷和隨訪脂肪肝較好的手段［15］。本研究結(jié)果表明布拉氏酵母菌對(duì)阻止非酒精性脂肪肝病情發(fā)展有重大臨床意義，有望成為該癥防治的新亮點(diǎn)。此外值得注意的是，為避免嚴(yán)重不良反應(yīng)的發(fā)生、提高臨床療效，在服用布拉氏酵母菌時(shí)需避免與抗真菌藥物服用，并做好生活及行為方式的干預(yù)［16］。

綜上所述，經(jīng)布拉氏酵母菌治療的非酒精性脂肪肝患者APN、炎癥因子、血脂水平得到改善，且肝功能明顯好轉(zhuǎn)。