CD133、HER2及PODXL水平變化與胃癌病理特征、預(yù)后關(guān)系

楊明 邢坤 王曉艷 宋艷芳

胃癌是起源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤。近年來(lái)，胃癌死亡率呈上升趨勢(shì)，發(fā)病年齡有明顯的年輕化趨勢(shì)［1］。早期胃癌多無(wú)特異性臨床癥狀，這也是早期診斷率不高的原因之一［2］。CD133 是目前研究較多的腫瘤標(biāo)志物。既往研究發(fā)現(xiàn)，CD133在胃腸腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移中可能具有重要作用［3］。人表皮生長(zhǎng)因子受體2（human epidermalgrowth factor receptor 2，HER2）也是腫瘤標(biāo)志物之一，其陽(yáng)性表達(dá)可使細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)活化，加快癌細(xì)胞增殖、分化［4］。而足糖萼蛋白（podocalyxin-like protein，PODXL）是CD34 家族唾液酸糖蛋白，臨床相關(guān)文獻(xiàn)顯示該因子與多種腫瘤的侵襲、浸潤(rùn)及不良預(yù)后具有一定相關(guān)性［5］。本研究將對(duì)CD133、HER2 及PODXL 蛋白表達(dá)與胃癌病理特征關(guān)系及對(duì)其預(yù)后生存的預(yù)測(cè)價(jià)值進(jìn)行探討，以期為胃癌患者靶向治療提供幫助。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析本院2017年6月至2019年6年收治且經(jīng)病理活檢確診的胃癌患者的臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均符合胃癌診斷標(biāo)準(zhǔn)［6］；②臨床資料完整，無(wú)缺損或丟失；③均行胃癌根治術(shù)；④所有患者均自愿參與本次研究且簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并肝腎功能缺陷；②術(shù)后3 個(gè)月內(nèi)死亡者；③合并精神疾病者；④合并慢性系統(tǒng)疾病者。

最終共納入80 例患者，男性46 例，女性34例，年齡37～67 歲，平均年齡（62.14±11.58）歲；TNM 分期［7］：Ⅰ～Ⅱ期17 例，Ⅲ～Ⅳ期63 例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移58 例；遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移7 例。同期選取在本院進(jìn)行健康體檢的74 例健康體檢者作為對(duì)照組，男性41例，女性33 例，年齡36～68 歲，平均年齡（62.97±11.88）歲，兩組患者一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

采用鏈霉素抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶（Streptomycin avidin peroxidase，S-P）免疫組化染色，標(biāo)本均用甲醛溶液浸泡，常規(guī)脫水、透明、浸蠟、石蠟包埋，4.0 μm 厚度連續(xù)切片。主要試劑：兔抗人CD133 單克隆抗體、兔抗人HER2 單克隆抗體；PODXL 蛋白采用GTVisionⅢ抗鼠/兔通用型免疫組化檢測(cè)試劑盒。上述抗體及SP 法超敏試劑盒均由福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司生產(chǎn)。檢測(cè)過(guò)程嚴(yán)格按照說(shuō)明進(jìn)行。一抗陰性對(duì)照使用PBS（磷酸鹽緩沖液）進(jìn)行代替。

染色結(jié)果判斷［8］：根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞百分比、染色強(qiáng)度判定。0 分、1 分、2 分、4 分。染色強(qiáng)度判定：無(wú)色為0 分，淡黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3分。總積分：上述2 項(xiàng)評(píng)分的乘積。綜合判定結(jié)果為顯色與陽(yáng)性細(xì)胞比例量化指標(biāo)乘積：0～3 分為陰性（-），4～5 分為弱陽(yáng)性（+），6～7 分為中度陽(yáng)性（++），8～12 分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。

1.3 觀察指標(biāo)

①比較不組別CD133、HER2 及PODXL 蛋白表達(dá)情況。②分析CD133、HER2 及PODXL 蛋白表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系。③對(duì)患者進(jìn)行1年電話(huà)隨訪，分析其預(yù)后生存情況，并分析CD133、HER2 及PODXL 蛋白表達(dá)對(duì)胃癌患者預(yù)后生存的預(yù)測(cè)價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以（±s）描述，采用t檢驗(yàn)；采用多元Logistic 回歸分析影響胃癌患者預(yù)后生存的獨(dú)立危險(xiǎn)因素；采用ROC 曲線分析CD133、HER2 及PODXL 對(duì)胃癌患者預(yù)后生存的預(yù)測(cè)價(jià)值；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組別CD133、HER2 及PODXL 蛋白表達(dá)

胃癌組CD133、HER2及PODXL陽(yáng)性表達(dá)率均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1、圖1。

圖1 CD133、HER2 及PODXL 蛋白在不同人群中的表達(dá)情況（SP，×400）Figure 1 expression of CD133，HER2 and podxl proteins in different populations（SP，×400）

2.2 CD133、HER2 及PODXL 蛋白表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系

CD133 陽(yáng)性與陰性表達(dá)者年齡、性別、腫瘤位置比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但CD133陽(yáng)性與陰性表達(dá)者腫瘤直徑、分化程度、TNM 分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。PODXL 陽(yáng)性表達(dá)者腫瘤分化程度、TNM 分期均明顯高于PODXL 陰性表達(dá)者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 影響胃癌患者預(yù)后死亡的危險(xiǎn)因素分析

術(shù)后對(duì)患者進(jìn)行1年隨訪，其中死亡13 例，死亡率為16.25%。多元Logistic 回歸分析結(jié)果顯示，腫瘤分化程度低、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ、合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、CD133、HER2 及PODXL 陽(yáng)性表達(dá)是影響胃癌患者預(yù)后死亡的危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

2.4 CD133、HER2 及PODXL 單項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)胃癌患者預(yù)后生存的預(yù)測(cè)價(jià)值

ROC 曲線分析示，以CD133、HER2 及PODXL聯(lián)合檢測(cè)曲線下面積最大，為0.871。見(jiàn)表4、圖2。

表2 CD133、HER2 及PODXL 蛋白表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系［n（%）］Table 2 Relationship between CD133，HER2 and podxl protein expression and clinicopathological features of gastric cancer［n（%）］

表3 影響胃癌患者預(yù)后死亡的危險(xiǎn)因素分析Table 3 Analysis of risk factors affecting the prognosis and death of gastric cancer patients

表4 CD133、HER2 及PODXL 蛋白單項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)胃癌患者預(yù)后生存的預(yù)測(cè)價(jià)值Table 4 The predictive value of single and combined detection of CD133,HER2 and podxl on prognosis and survival of patients with gastric cancer

3 討論

據(jù)相關(guān)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，全球每年胃癌病例正逐年增加，該病對(duì)人類(lèi)的生命安全造成嚴(yán)重威脅［9］。隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷進(jìn)步與發(fā)展，胃癌的治療水平逐漸提升，但仍有大部分患者死于復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移。因此，早期診斷和尋找合適的生物標(biāo)志物，對(duì)患者預(yù)后具有重要意義。近年來(lái)，CD133、HER2 及PODXL 蛋白等生物分子檢驗(yàn)成為了臨床的熱門(mén)研究［10］。

CD133 是一個(gè)相對(duì)分子量為120×103的5 次跨膜糖蛋白，在不同腫瘤組織或胚胎組織中的表達(dá)情況存在一定差異［11］。Maiti 等［12］研究發(fā)現(xiàn)，CXCR4能通過(guò)PI3K/A kt 通路上調(diào)腫瘤起始細(xì)胞標(biāo)志物CD133 的表達(dá)；而CD133+細(xì)胞可增強(qiáng)胃癌增殖與侵襲能力。本組研究發(fā)現(xiàn)胃癌組CD133 陽(yáng)性表達(dá)率更高，表明陽(yáng)性表達(dá)率越高，CD133 蛋白含量越高；且腫瘤直徑越大、分化程度高、TNM 分期越高、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，其CD133 陽(yáng)性表達(dá)率越高，與Roy 等［13］報(bào)道基本相符。

HER2 是腫瘤重要的生物標(biāo)記物之一。其在胃癌中的陽(yáng)性表達(dá)率不盡一致。Park 等［14］研究顯示HER2 陽(yáng)性表達(dá)率為22.1%。HER2 表達(dá)與胃癌的部分臨床病理特征可能具有一定關(guān)系。Mitsuda等［15］報(bào)道發(fā)現(xiàn)，分化程度低、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者HER2陽(yáng)性表達(dá)率更高。本組研究與上述文獻(xiàn)報(bào)道相符，這可能與HER-2 通過(guò)多種信號(hào)途徑介導(dǎo)惡性腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為有關(guān)。

PODXL 是富含負(fù)電荷的唾液酸糖蛋白。近年來(lái)，大量研究顯示PODXL 蛋白在多種腫瘤的轉(zhuǎn)移、發(fā)展中具有重要作用，其具體機(jī)制尚未明確［16］。本組研究通過(guò)分析不同組織中PODXL 表達(dá)發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中PODXL 陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于正常胃組織。說(shuō)明PODXL 在胃癌發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。進(jìn)一步分析PODXL 表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，其陽(yáng)性表達(dá)率與腫瘤分化程度、TNM 分期關(guān)系密切?？梢?jiàn)PODXL 蛋白在高中分化及后期的患者中表達(dá)水平較高，推測(cè)PODXL 蛋白通過(guò)介導(dǎo)侵襲，參與了胃癌細(xì)胞的生存及凋亡。

為深入了解胃癌患者預(yù)后情況，本研究對(duì)80例胃癌患者預(yù)后情況進(jìn)行相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤分化程度低、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ、合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、CD133、HER2 及PODXL 陽(yáng)性表達(dá)均是影響胃癌患者預(yù)后死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，這可能與臨床分期增高，患者病情加重，疾病進(jìn)展嚴(yán)重，影響治療效果有關(guān)。而通過(guò)ROC 曲線分析顯示，CD133、HER2 及PODXL 聯(lián)合對(duì)胃癌患者預(yù)后生存的預(yù)測(cè)價(jià)值最佳，進(jìn)一步提示聯(lián)合檢測(cè)三指標(biāo)可作為預(yù)測(cè)患者預(yù)后生存的有效手段。此外，本研究中存在一些不足之處在于納入樣本量較少，研究結(jié)果難免存在偏倚，后續(xù)仍將繼續(xù)深入研究。

綜上所述，CD133、HER2 及PODXL 在胃癌中陽(yáng)性表達(dá)率高，推測(cè)CD133、HER2 及PODXL 參與了胃癌組織增生、分化及發(fā)展過(guò)程，臨床上可通過(guò)檢測(cè)三者表達(dá)情況對(duì)患者病情進(jìn)展及預(yù)后進(jìn)行評(píng)估。