組織miR-1243、LGR5、miR-146a在PTC腫瘤惡性生物學(xué)特征評估中價值

游慶華 葉慧英 王佳 徐冬香

甲狀腺乳頭狀癌（Papillary thyroid carcinoma，PTC）約占全部甲狀腺癌的80%～90%，大多預(yù)后良好，但存在腫瘤局部侵襲和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者治療效果及預(yù)后較差，威脅患者生命安全，因此準(zhǔn)確評估PTC 腫瘤惡性生物學(xué)特征意義重大［1］。微小RNA（microRNA，miR）是廣泛存在于生物體內(nèi)的非編碼小分子RNA，可調(diào)控機體60%蛋白質(zhì)編碼基因的轉(zhuǎn)錄翻譯，從而調(diào)控細胞分化、增殖、凋亡［2］。其中miR-1243 在PTC 組織中表達顯著降低［3］，miR-146a 與癌細胞增殖、侵襲、遷移有關(guān)［4］。富含亮氨酸重復(fù)序列的G 蛋白偶聯(lián)受體5（Leucine-rich repeat-containing G-protein-coupled receptor 5，LGR5）是具有七次跨膜結(jié)構(gòu)受體超家族成員，能通過上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化等途徑影響多種惡性腫瘤的侵襲性［5］。本研究采用自身癌組織、癌旁組織對照研究的方法，探討miR-1243、LGR5、miR-146a在PTC 腫瘤惡性生物學(xué)特征評估中價值，為臨床治療決策等提供參考，報告如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取2017年1月至2020年8月本院收治的104例PTC 患者組織為癌組織組，取其癌旁組織（癌旁2 cm）為癌旁組織組，其中女87 例，男17 例；平均年齡（40.27±8.09）歲；體質(zhì)量指數(shù)，平均（23.15±1.42）kg/m2；腫瘤直徑＜2 cm 38 例，≥2 cm 66 例；分化程度低分化18 例，中分化30 例，高分化56 例；T 分期T1期21 例，T2 期39 例，T3 期28 例，T4 期16 例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無74 例，有30 例。采用分化程度、T 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移評估PTC 惡性生物學(xué)特征［1］。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合PTC 診斷標(biāo)準(zhǔn)［6］；②首次確診，無PTC 相關(guān)治療史。③所有患者及家屬均知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他系統(tǒng)原發(fā)性惡性腫瘤者；②伴有血液系統(tǒng)疾病者；③妊娠期、哺乳期患者；④凝血4 項異常者；⑤合并感染疾病者。

1.2 方法

入組患者標(biāo)本獲取前均未接受抗PTC 治療，采用實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測組織miR-1243、miR-146a 表達，以U6 作為內(nèi)參，miR-1243、miR-146a 表達量用2-△△Ct計算；采用免疫組化檢測組織LGR5 表達，染色強度評分［6］：未著色、淺黃色、棕黃色、棕褐色依次取0、1、2、3 分；陽性細胞比例：≤5%、5%（不包含）～25%、25%（不包含）～50%、＞50%依次取0、1、2、3 分，LGR5 陽性標(biāo)準(zhǔn)為染色強度評分與陽性細胞比例評分之積≥2 分，分值越高，LGR5 表達水平越高。

1.3 觀察指標(biāo)

①比較癌組織和癌旁組織miR-1243、LGR5、miR-146a 表達。②分析miR-1243、LGR5、miR-146a之間的相關(guān)性。③比較不同病理特征患者癌組織miR-1243、miR-146a 表達。④比較不同病理特征患者癌組織LGR5 陽性率。⑤分析癌組織miR-1243、LGR5、miR-146a 與腫瘤惡性生物學(xué)特征的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0 處理數(shù)據(jù)，計量資料以（±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析；計數(shù)資料用n（%）表示，行χ2檢驗，用Pearson 分析miR-1243、LGR5、miR-146a 之間的相關(guān)性，Spearman 分析miR-1243、LGR5、miR-146a 與病理特征的關(guān)系。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組miR-1243、LGR5、miR-146a表達水平比較

癌組織miR-1243 表達低于癌旁組織，LGR5、miR-146a 表達高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；癌組織LGR5 陽性率為62.50%（65/104），顯著高于癌旁組織的4.81%（5/104）（χ2=77.516，P＜0.001）。見表1。

表1 兩組miR-1243、LGR5、miR-146a 表達水平比較（±s）Table 1 Comparison of the expression levels of miR-1243，LGR5，and miR-146a between the two groups（±s）

表1 兩組miR-1243、LGR5、miR-146a 表達水平比較（±s）Table 1 Comparison of the expression levels of miR-1243，LGR5，and miR-146a between the two groups（±s）

組別癌組織癌旁組織t 值P 值n 104 104 miR-1243 1.31±0.12 1.85±0.24 20.523＜0.001 LGR5（分）4.15±1.03 1.34±0.51 24.933＜0.001 miR-146a 1.24±0.30 0.66±0.13 18.091＜0.001

2.2 miR-1243、LGR5、miR-146a 之間的相關(guān)性

以癌組織miR-1243、LGR5、miR-146a 表達為源數(shù)據(jù)進行Pearson 相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，miR-1243 與LGR5（r=-0.570，P＜0.001）、miR-146a（r=-0.708，P＜0.001）呈負相關(guān)，LGR5 與miR-146a 呈正相關(guān)（r=0.726，P＜0.001）。見圖1。

圖1 miR-1243、LGR5、miR-146a 之間的相關(guān)性Figure 1 Correlation among miR-1243，LGR5，miR-146a

2.3 不同病理特征患者癌組織miR-1243、miR-146a 比較

不同年齡、體質(zhì)量指數(shù)、性別、腫瘤直徑、分化程度患者癌組織miR-1243、miR-146a 表達比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；不同T 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者癌組織miR-1243、miR-146a 表達比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

2.4 不同病理特征患者癌組織LGR5 比較

不同年齡、體質(zhì)量指數(shù)、性別、腫瘤直徑、分化程度患者癌組織LGR5 陽性率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；不同T 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者癌組織LGR5 陽性率比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

2.5 癌組織miR-1243、LGR5、miR-146a 與腫瘤惡性生物學(xué)特征的相關(guān)性

采用Spearman 進行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，miR-1243 與T 分期呈負相關(guān)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負相關(guān)（r1=-0.515，r2=-0.479，P＜0.05）；LGR5、miR-146a 與T 分期呈正相關(guān)（r1=0.603，r2=0.482，P＜0.05），與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（r1=0.652，r2=0.493，P＜0.05）。

3 討論

miR-1243 系miR 家族成員之一，目前關(guān)于miR-1243 在惡性腫瘤領(lǐng)域的研究較少，仍處于探索階段［7］。體外培養(yǎng)的PTC 細胞，采用miRNA 抑制物沉默miR-1243 后，可促進PTC 細胞的增殖，并增強PTC 細胞遷移能力，呈現(xiàn)出促癌作用［8］。既往研究已明確，絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶1（Akt1）和絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶2（Akt2）可通過影響甲狀腺癌細胞的自噬行為，而調(diào)控其增殖、侵襲及凋亡行為產(chǎn)生［9］。而轉(zhuǎn)染miR-1243 模擬物可抑制Akt1 和Akt2 表達，減少PTC 細胞的遷移數(shù)，轉(zhuǎn)染miR-1243 抑制劑則可促進Akt1 和Akt2 表達，增加PTC 細胞的遷移數(shù)，提示miR-1243 是通過靶向抑制Akt1 和Akt2 表達而調(diào)節(jié)PTC 細胞惡性生物學(xué)行為的［10］?？梢姴捎胢iR 技術(shù)調(diào)控miR-1243 表達可影響PTC 細胞的惡性生物學(xué)特征，為PTC 的靶向性防治和細胞侵襲行為評估提供了一個新思路。但miR-1243 是否還能通過其他途徑調(diào)控PTC 腫瘤惡性生物學(xué)特征尚不明確，仍需后續(xù)更多報道的論證。

表2 不同病理特征患者癌組織miR-1243、miR-146a 比較（±s）Table 2 Comparison of miR-1243 and miR-146a in cancer tissues of patients with different pathological characteristics（±s）

表2 不同病理特征患者癌組織miR-1243、miR-146a 比較（±s）Table 2 Comparison of miR-1243 and miR-146a in cancer tissues of patients with different pathological characteristics（±s）

資料年齡（歲）t/F 值1.019 P 值0.311 t/F 值1.465 P 值0.146體質(zhì)量指數(shù)（kg/m2）＜65 歲≥65 歲正常超重肥胖0.80 0.562 2.180 0.118性別男女1.389 0.168 0.626 0.533腫瘤直徑1.897 0.063 1.725 0.088分化程度1.174 0.313 1.176 0.313 T 分期＜2 cm≥2 cm低分化中分化高分化T1 T2 T3 T4 135.239＜0.001 92.026＜0.001淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無有例數(shù)89 15 45 33 26 17 87 38 66 18 30 56 21 39 28 16 74 30 miR-1243 1.30±0.25 1.37±0.22 1.29±0.26 1.35±0.24 1.29±0.30 1.39±0.28 1.29±0.27 1.24±0.30 1.35±0.28 1.23±0.29 1.30±0.25 1.34±0.27 1.78±0.15 1.42±0.17 1.05±0.16 0.88±0.12 1.52±0.25 0.79±0.19 14.382＜0.001 miR-146a 1.26±0.35 1.12±0.29 1.25±0.32 1.31±0.37 1.13±0.30 1.19±0.31 1.25±0.37 1.31±0.35 1.20±0.29 1.19±0.27 1.21±0.25 1.27±0.20 0.71±0.24 1.02±0.29 1.36±0.31 2.26±0.37 0.97±0.24 2.15±0.37 19.258＜0.001

表3 不同病理特征患者癌組織LGR5 比較［n（%）］Table 3 Comparison of LGR5 in cancer tissues of patients with different pathological characteristics［n（%）］

LGR5 基因定位于染色體12q21.1，是G 蛋白偶聯(lián)受體家族成員之一［11］。本研究顯示，癌組織LGR5 陽性率高于癌旁組織，與徐寧等［12］報道相似，佐證了LGR5 與PTC 有關(guān)。同時在以上研究基礎(chǔ)上，本研究還發(fā)現(xiàn)，LGR5 與T 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，表明LGR5 對PTC 侵襲行為具有正向促進作用。PTC 細胞增殖過程中，微環(huán)境中干細胞生長因子分泌增多，結(jié)合LGR5 受體后，激活了Wnt 信號通路，促進上皮間質(zhì)化進程和細胞增殖、存活，持續(xù)性的激活Wnt 信號可導(dǎo)致“遺傳調(diào)控門控基因”缺失，從而促進腫瘤的發(fā)生和進展［13］。且LGR5 還能介導(dǎo)血管內(nèi)皮生長因子表達，促進血管新生，增加腫瘤微血管密度，為腫瘤細胞生長和侵襲提供養(yǎng)分［14］。因此臨床上對LGR5 表達水平較高的患者，應(yīng)警惕病情進展的風(fēng)險，必要時采用相關(guān)措施與強化治療，以改善患者預(yù)后。

miR-146a 定位于第5 號染色體LOC285628 基因的第二個外顯子上，與miR 家族其他成員部分功能相似，具有調(diào)控細胞增殖、凋亡的作用［15］。但目前關(guān)于miR-146a 在甲狀腺癌中的表達尚存在爭議，李文祥等［16］報道，與甲狀腺良性疾病相比，PTC 組織miR-146a 表達顯著升高，本研究觀點與之相似。且miR-146a 與T 分期呈正相關(guān)，并與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，可作為評估PTC 惡性生物學(xué)行為的分子標(biāo)志物。由于本研究T1+T2 較多，T3+T4 較少，在早期機體適應(yīng)性和應(yīng)激性反饋刺激下，miR-146a 較癌旁組織升高，以抵抗癌癥，至晚期時，機體這種調(diào)控機制失代償，從而出現(xiàn)miR-146a 的降低，但這一觀點的可靠性仍有待后續(xù)研究的進一步論證。另miR-1243、LGR5、miR-146a 之間具有顯著的相關(guān)性，表明各指標(biāo)可相互影響，共同參與PTC 的發(fā)病和進展。

綜上，組織miR-1243、LGR5、miR-146a 可作為評估PTC 腫瘤惡性生物學(xué)特征的分子標(biāo)志物，為PTC 靶向治療、臨床決策等提供重要參考信息。