SOD、TGF-β1、Vasohibin-1在口腔鱗狀細胞癌診斷及預后評估中的價值

班晨 王鐘華 安峰

口腔鱗狀細胞癌死亡率較高，是威脅人類健康的惡性腫瘤之一。該病發(fā)病機制尚未明確，較多學者研究指出口腔癌的發(fā)生多與患者不良飲食習慣有關［1］。目前口腔鱗狀細胞癌的發(fā)生及病程中相關分子機制的認識尚不夠深入，導致臨床診斷率不理想，因此尋找新的生物標志物對提高口腔鱗狀細胞癌的診斷率，改善患者預后意義重大。已有研究證實，轉化生長因子（Transforming growth factor-β1，TGF-β1）參與了腫瘤復發(fā)、浸潤和轉移過程中的關鍵環(huán)節(jié)［2］。血管生成抑制蛋白-1（Vasohibin-1，VASH-1）在乳腺癌、胃癌等惡性腫瘤中呈高表達狀態(tài)已得到較多研究證實［3～4］，而VASH-1與口腔鱗狀細胞癌的關系研究報道較少。超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）是近年來受廣大學者關注的標志物之一，有研究指出SOD 與惡性腫瘤生物學行為存在顯著相關性［5］。本研究旨在探討SOD、TGF-β1 聯(lián)合VASH-1 檢測在口腔鱗狀細胞癌診斷、預后評估中的價值，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

對2015年5月至2018年5月本院收治的口腔黏膜鱗狀細胞癌患者的臨床資料進行整理、分析。納入標準：①所有患者均經手術或穿刺活檢結合影像學檢查（顯微鏡下可見增生的上皮突破基膜向深層浸潤形成不規(guī)則條索形癌巢），證實為口腔鱗狀細胞癌［6］；②影像資料、臨床資料完整；③納入研究前未進行過放、化療治療。排除標準：①合并其他惡性腫瘤及重要器官嚴重疾病者；②阿爾茲海默癥者、精神障礙者。

根據納入排除標準納入70 例患者（70 份口腔黏膜鱗狀細胞癌標本，設為觀察組）。其中男40 例，女30 例；平均年齡（55.73±3.51）歲；根據TNM 分期［7］分為Ⅰ～Ⅱ期42 例，Ⅲ～Ⅵ期28 例；組織學分化程度：中-高分化33 例，低分化37 例。同時選取上述患者的癌旁正常組織（距癌組織3 cm 處）設為對照組。

1.2 方法

1.2.1 SOD、TGF-β1 檢測方法

納入研究的對象均在次日清晨空腹抽取靜脈血3 mL，離心10 min，分離血清及血漿，樣本置于-20℃下保存待檢。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測SOD、TGF-β1 水平。相關試劑盒采購于北京中杉金橋生物技術有限公司。SOD 參考范圍值：242～620 U/L，＞620 U/L 視為高表達［8］；TGF-β1 參考范圍值：140～183 pg/mL，＞183 pg/mL 視為高表達［9］。

1.2.2 VASH-1 檢測方法

采用S-P 免疫組化染色，將口腔黏膜鱗狀細胞癌標本和癌旁正常組織標本經常規(guī)石蠟切片、脫水，對VASH-1 進行檢測，整個實驗操作過程嚴格按照說明進行，檢測完成后由2 位高年資醫(yī)師采用雙盲法閱片。兔抗人VASH-1 多克隆抗體采購自圣克魯生物技術（上海）有限公司。

1.3 VASH-1 陽性判定標準

VASH-1 陽性判斷標準［10］：腫瘤細胞胞質或細胞核中出現棕黃色或棕褐色顆粒。染色強度評分：0 分（無色）、1 分（淡黃色）、2 分（棕黃色）、3 分（棕褐色）；根據兩者相乘結果進行評判：小于3 分（-）、3 分（+）、4 分（++）、5 分（+++）。陽性率=陽性例數/總例數×100%。

1.4 隨訪

本研究隨訪從患者術后開始，以患者死亡或本研究的隨訪時間結束（截止時間：2020年5月）。隨訪時間分布在5～48 個月，平均隨訪時間（20.12±2.55）個月（方式：來院復查及電話隨訪）。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 22.0 軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料采用（±s）描述，采用t檢驗；計數資料通過n（%）表示，采用χ2檢驗；采用多元Logistic 回歸分析影響口腔鱗狀細胞癌患者2年預后生存的相關危險因素；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 SOD、TGF-β1、VASH-1在不同組織中的表達情況

觀察組SOD 低表達率、TGF-β1 高表達率、Vasohibin-1 陽性表達率均明顯高于對照組差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1、圖1。

2.2 SOD、TGF-β1、VASH-1 與口腔鱗狀細胞癌病情進展的關系

SOD、TGF-β1、VASH-1 表達水平與口腔鱗狀細胞癌患者年齡、性別無相關性（P＞0.05），與口腔鱗狀細胞癌患者臨床分期、淋巴結轉移、分化程度、腫瘤大小呈正相關（P＜0.05）。見表2。

圖1 免疫組化染色圖（SP，×500）Figure 1 immunohistochemical staining（SP，×500）

2.3 口腔鱗狀細胞癌患者不同SOD、TGF-β1、VASH-1 表達的預后情況

隨訪結果顯示：70 例口腔鱗狀細胞癌患者2年生存率為35.71%（25/70），SOD 低表達、TGF-β1高表達及VASH-1 表達陽性的患者死亡率更高（P＜0.05）。見表3。

表2 SOD、TGF-β1、VASH-1 與口腔鱗狀細胞癌病情進展的關系Table 2 Relationship between SOD，TGF-β 1，vash-1 and progression of oral squamous cell carcinoma［n（%）］

2.4 影響口腔鱗狀細胞癌2年預后生存的單多因素

TNM（Ⅲ～Ⅵ期）、有淋巴結轉移、分化程度（中-低分化）、腫瘤大?。ā? cm）、SOD（低表達）、TGF-β1（高表達）、VASH-1（陽性表達）為影響口腔鱗狀細胞癌患者2年預后生存的獨立危險因素（P＜0.05）。見表4。

表3 口腔鱗狀細胞癌患者不同SOD、TGF-β1、Vasohibin-1 表達的預后情況［n（%）］Table 3 prognosis of patients with oral squamous cell carcinoma with different expressions of SOD，TGF-β1 and vasohibin-1［n（%）］

表4 影響口腔鱗狀細胞癌2年預后生存的單多因素Table 4 single and multiple factors influencing 2-year prognosis and survival of oral squamous cell carcinoma

3 討論

提高口腔鱗狀細胞癌的早期診斷率，對改善患者預后，延長其生存期至關重要。而尋找口腔鱗狀細胞癌發(fā)生、發(fā)展中的重要基因及相互作用蛋白，是防治腫瘤生長及增殖的重點和熱點之一。本研究結果顯示：在口腔鱗狀細胞癌組織中，SOD 表達水平要明顯低于癌旁正常組織。由此可知，在口腔鱗狀細胞癌發(fā)生、發(fā)展的過程中SOD 表達量發(fā)生顯著變化。研究結果顯示，SOD 表達水平低的患者預后死亡率更高，這一研究結果與Madhuresh K 等［11］學者報道結果一致。

TGF-β1 是由Treg 細胞分泌產生的細胞因子，它通過參與多種免疫細胞的調控作用下調機體免疫應答反應。既往研究表明，TGF-β1 在宮頸癌、乳腺癌等惡性腫瘤中均呈高表達狀態(tài)［12］。國外較多文獻證實［13］，上皮間質轉化為上皮來源腫瘤的侵襲、轉移提供了條件。本研究發(fā)現，在有淋巴結轉移、TNM（Ⅲ～Ⅵ期）、分化程度（中-低分化）、腫瘤大?。ā? cm）的口腔鱗狀細胞癌患者中，TGF-β1 呈高表達狀態(tài)，這一研究結果與既往文獻報道結果一致［14］。

隨著廣大學者對腫瘤抗血管治療方面的基礎及相關研究逐漸重視，發(fā)現VASH-1 參與調控腫瘤內皮細胞血管生成因子的生成和釋放，對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉移起重要作用［15］。本研究結果顯示，口腔鱗狀細胞癌組織中VASH-1 陽性表達率顯著高于癌旁正常組織，且發(fā)現VASH-1 的表達與患者病理特征密切相關。通過對口腔鱗狀細胞癌患者進行術后隨訪，結果發(fā)現VASH-1 陽性表達的患者生存率要明顯低于陰性表達的患者，因此推斷VASH-1 可作為檢測口腔鱗狀細胞癌發(fā)生、發(fā)展的潛在標志物，并可作為評估患者病情發(fā)展、術后轉歸的重要指標。

綜上所述，聯(lián)合SOD、TGF-β1、Vasohibin-1 三者檢測，可顯著提高口腔鱗狀細胞癌診斷率，三者可作為了解患者病情發(fā)展、評估術后轉歸的重要指標，為早發(fā)現、早診斷、早治療口腔鱗狀細胞癌開辟新思路。后續(xù)將完善研究方法，擴大病例樣本、延長研究時間，以了解SOD、TGF-β1、Vasohibin-1 不同表達對口腔鱗狀細胞癌患者遠期生存率的影響。