肥胖患者外周血miR-155表達(dá)與非酒精性脂肪肝病發(fā)病的關(guān)系

萬紅 燕樹勛 閆詔 張勝威 王嫻

隨著我國經(jīng)濟(jì)發(fā)展及國民生活水平提高，肥胖的發(fā)病率呈逐年升高趨勢。肥胖會增加糖尿病、高血壓病、脂代謝紊亂、非酒精性脂肪肝病（Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）等疾病的發(fā)病率，對患者的健康造成危害［1-2］。目前的研究認(rèn)為，NAFLD 與肥胖具有高度共病率，胰島素抵抗是兩者共同的病理生理特征［3-4］，但造成肥胖患者發(fā)生NAFLD 的機(jī)制尚未完全闡明。微小RNA（microRNA，miR）是一族具有廣泛生物學(xué)功能的非編碼RNA，對胰島素敏感性、脂代謝、炎癥反應(yīng)等均具有調(diào)控作用。一項NAFLD 相關(guān)的動物實驗發(fā)現(xiàn)miR-155 在NAFLD 的發(fā)病過程中參與炎癥反應(yīng)的激活及胰島素抵抗的加?。?］；另有一項肥胖相關(guān)的臨床研究發(fā)現(xiàn)肥胖患者外周血中miR-155 的表達(dá)增加［6］。但miR-155 在肥胖患者發(fā)生NAFLD 中的作用尚不明確。因此，本研究將以肥胖患者為對象，分析外周血中miR-155 表達(dá)水平與NAFLD 發(fā)病的關(guān)系。

1 對象與方法

1.1 對象

選擇2017年10月至2020年6月期間本院收治的單純性肥胖患者共94 例作為肥胖組，包括男性52 例、靶向42 例，平均年齡（29.39±6.92）歲；超重組共50 例，包括男性28 例、女性22 例，平均年齡（31.91±8.28）歲，納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥18 歲；②符合《中國成人肥胖癥防治專家共識》［7］中單純性肥胖的診斷；③完成肝臟瞬時彈性掃描儀（Fibroscan）檢查；④留取外周靜脈血標(biāo)本；排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并病毒性肝炎、酒精性肝病、藥物性肝損傷；②合并惡性腫瘤、自身免疫性疾??；③接受降脂、降壓、降糖治療的患者。另取同期在本院體檢的健康者共50 例，包括男性30 例、女性20 例，平均年齡（30.39±9.14）歲作為對照組。3 組一般資料的比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。所有患者及家屬均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 外周血miR-155、SOCS1、NF-κB 表達(dá)水平的檢測

取3 組外周靜脈血，EDTA 抗凝后采用全血RNA 提取試劑盒（賽默飛世爾公司）提取RNA。采用一步加A 法miR 反轉(zhuǎn)錄試劑盒（哈爾濱?；锟萍脊荆⑦M(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，得到cDNA 后采用熒光定量PCR 檢測，分別擴(kuò)增miR-155 及U6，以U6 為內(nèi)參、計算miR-155 的表達(dá)水平；采用RT-PCR 反轉(zhuǎn)錄試劑盒（哈爾濱?；锟萍脊荆⑦M(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，得到cDNA 后采用熒光定量PCR 檢測，分別擴(kuò)增SOCS1、NF-κB 及β-actin，以β-actin 為內(nèi)參、計算SOCS1 及NF-κB 的表達(dá)水平。

1.2.2 NAFLD 的評估及診斷

參照《脂肪性肝病診療規(guī)范化的專家建議（2019 修訂版）》［8］中NAFLD 的診斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合實驗室檢查、Fibroscan 檢查對NAFLD 進(jìn)行評估和診斷。

1.3 生化指標(biāo)的檢測

采用全自動生化分析儀檢測丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）、空腹胰島素（F-INS）、空腹血糖（FBG），按照公式F-INS×FBG/22.5 計算胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，計量資料以（±s）表示，多組間比較采用方差分析、組內(nèi)用LSD-t 進(jìn)行比較，兩組間比較采用t檢驗；相關(guān)性分析采用Pearson 檢驗；miR-155 對NAFLD 的診斷價值采用ROC 曲線分析。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3 組外周血miR-155、SOCS1、NF-κB 表達(dá)水平的比較

3 組外周血中miR-155、NF-κB 的表達(dá)水平比較：肥胖組＞超重組＞對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。SOCS1 表達(dá)水平比較：肥胖組＜超重組＜對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 3 組外周血miR-155、SOCS1、NF-κB 表達(dá)水平的比較（±s）Table 1 Comparison of expression levels of miR-155，SOCS1 and NF-κB in peripheral blood of three groups（±s）

表1 3 組外周血miR-155、SOCS1、NF-κB 表達(dá)水平的比較（±s）Table 1 Comparison of expression levels of miR-155，SOCS1 and NF-κB in peripheral blood of three groups（±s）

注：與對照組比較，aP＜0.05；與超重組比較，bP＜0.05。

組別肥胖組超重組對照組F 值P 值n 94 50 50 miR-155 1.68±0.70ab 1.27±0.32a 1.00±0.21 29.356＜0.001 SOCS1 0.62±0.15ab 0.85±0.19a 1.00±0.25 69.928＜0.001 NF-κB 1.77±0.47ab 1.32±0.35a 1.00±0.22 67.996＜0.001

2.2 肥胖組中NAFLD 患者和非NAFLD 患者外周血miR-155、SOCS1、NF-κB 表達(dá)水平的比較

肥胖組中NAFLD患者外周血中miR-155、NF-κB的表達(dá)水平顯著高于非NAFLD 患者，SOCS1 的表達(dá)水平顯著低于非NAFLD 患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 肥胖組中NAFLD 患者和非NAFLD 患者外周血miR-155、SOCS1、NF-κB 表達(dá)水平的比較（±s）Table 2 Comparison of expression levels of miR-155，SOCS1 and NF-κ B in peripheral blood between NAFLD patients and non NAFLD patients in obesity group（±s）

表2 肥胖組中NAFLD 患者和非NAFLD 患者外周血miR-155、SOCS1、NF-κB 表達(dá)水平的比較（±s）Table 2 Comparison of expression levels of miR-155，SOCS1 and NF-κ B in peripheral blood between NAFLD patients and non NAFLD patients in obesity group（±s）

組別NAFLD 患者非NAFLD 患者t 值P 值n 52 42 miR-155 1.93±0.83 1.38±0.28 4.106＜0.001 SOCS1 0.49±0.12 0.78±0.20 8.701＜0.001 NF-κB 1.98±0.39 1.51±0.62 4.481＜0.001

2.3 外周血miR-155 表達(dá)水平對肥胖組患者NAFLD 的診斷價值

ROC 曲線下面積為0.6575（P=0.008）。根據(jù)約登指數(shù)最大值確定最佳截斷值為1.606，該截斷值診斷NALFD 的靈敏度為78.57%、特異性為50.00%。見圖1。

2.4 肥胖組中不同miR-155 表達(dá)水平患者生化指標(biāo)的比較

圖1 外周血miR-155 表達(dá)水平診斷肥胖組患者NAFLD 的ROC 曲線Figure 1 ROC curve of peripheral blood miR-155 expression level in diagnosis of NAFLD in obese patients

肥胖組中miR-155 表達(dá)水平≥中位數(shù)患者的ALT、AST、TC、TG、LDL-C、hs-CRP、F-INS、HOMA-IR 水平均高于miR-155 表達(dá)水平＜中位數(shù)患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；miR-155 表達(dá)水平≥中位數(shù)患者的HDL-C 水平與miR-155 表達(dá)水平＜中位數(shù)患者比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表3。

表3 肥胖組中不同miR-155 表達(dá)水平患者生化指標(biāo)的比較Table 3 Comparison of biochemical indexes of patients with different miR-155 expression levels in obesity group

3 討論

肥胖與NAFLD 具有較高的共病率，胰島素抵抗是兩種疾病共同的病理生理特征，但造成肥胖患者發(fā)生NAFLD 的機(jī)制尚未完全闡明。MiR 能夠在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)基因表達(dá)并產(chǎn)生相應(yīng)的生物學(xué)效應(yīng)，多種miR 表達(dá)改變與肥胖和NAFLD 的發(fā)病有關(guān)。Tryggestad JB 的臨床研究證實，肥胖患者外周血中miR-155 的表達(dá)水平明顯增加［6］；王媛媛等的動物實驗證實，NAFLD 小鼠肝臟中miR-155的表達(dá)水平明顯增加［5］。本研究對肥胖組、超重組、對照組的外周血miR-155 表達(dá)水平進(jìn)行了檢測及比較，與超重組及對照組比較，肥胖組患者外周血中miR-155 的表達(dá)水平明顯增加，與Tryggestad JB 的研究結(jié)果一致。

炎癥反應(yīng)激活是影響胰島素生物信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要因素，在肥胖及NAFLD 的發(fā)病過程中均涉及機(jī)體微炎癥反應(yīng)的激活［9-10］。核因子-κB（NF-κB）是調(diào)控炎癥反應(yīng)的核心轉(zhuǎn)錄因子，能夠促進(jìn)多種炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)并介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的級聯(lián)放大激活［11］。根據(jù)王媛媛等［5］的報道，miR-155 靶向抑制細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制物1（suppressor of cytokine signaling，SOCS1）的表達(dá)、削弱SOCS1 對NF-κB 的抑制功能，進(jìn)而增加NF-κB 表達(dá)并引起炎癥反應(yīng)。MiR-155/SOCS1/NF-κB 的炎癥反應(yīng)調(diào)控軸類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、氣道上皮炎癥等模型中得到證實［12］。本研究在肥胖患者中發(fā)現(xiàn)外周血SOCS1 的表達(dá)水平降低且與miR-155 呈負(fù)相關(guān)、NF-κB 的表達(dá)水平增加且與miR-155 呈正相關(guān)，另外肥胖組中NAFLD 患者SOCS1 的表達(dá)水平低于非NAFLD 患者、NF-κB 的表達(dá)水平高于非NAFLD 患者。由此推斷miR-155 在肥胖發(fā)病過程中參與SOCS1/NF-κB 的調(diào)控，通過調(diào)控SOCS1/NF-κB 能夠進(jìn)一步參與NAFLD 的發(fā)病。

炎癥反應(yīng)激活引起胰島素抵抗后，機(jī)體會代償性出現(xiàn)高胰島素血癥，進(jìn)而引起脂代謝紊亂、促進(jìn)肝臟內(nèi)脂肪沉積并發(fā)生NAFLD［13］。本研究已經(jīng)證實肥胖組中NAFLD 患者外周血中miR-155表達(dá)水平更高，進(jìn)一步通過ROC 曲線分析發(fā)現(xiàn)miR-155 對肥胖患者NAFLD 具有診斷價值，但診斷的靈敏度和特異性較弱，仍需今后繼續(xù)擴(kuò)大樣本量來探究更優(yōu)的診斷截斷值。

在此基礎(chǔ)上，本研究結(jié)果顯示：隨著miR-155表達(dá)增加，肥胖患者ALT、AST、TC、TG、LDL-C、hs-CRP、F-INS、HOMA-IR 水平均明顯增加，表明miR-155 的高表達(dá)能夠引起肝功能異常、脂代謝紊亂、炎癥激活及高胰島素血癥，均與NAFLD 的發(fā)病密切相關(guān)，這也與miR-155 表達(dá)增加參與肥胖患者NAFLD 發(fā)病的結(jié)果吻合。

綜上所述，肥胖患者外周血中miR-155 表達(dá)增加與NAFLD 發(fā)病有關(guān)，miR-155 的高表達(dá)與肝功能異常、脂代謝紊亂、炎癥激活及高胰島素血癥均存在相關(guān)關(guān)系，并且調(diào)控SOCS1 及NF-κB 是miR-155 參與NAFLD 發(fā)病的可能機(jī)制。但本研究的研究數(shù)據(jù)均停留在臨床樣本檢測的階段，尚缺乏動物實驗和細(xì)胞實驗進(jìn)行驗證，今后應(yīng)完善相應(yīng)的動物實驗和細(xì)胞實驗，并為闡明肥胖患者發(fā)生NAFLD 的分子機(jī)制提供依據(jù)。