白癜風(fēng)患者外周血CD4+T細(xì)胞與性激素水平的關(guān)系

康樂(lè)，耿菁

寶雞市中心醫(yī)院皮膚科，陜西 寶雞 721000

白癜風(fēng)屬于后天獲得性皮膚病，主要以色素脫失斑為主要臨床表現(xiàn)，目前該病發(fā)病機(jī)制與病因仍不明確。有學(xué)者認(rèn)為，白癜風(fēng)患者通常伴有其他免疫性疾病，認(rèn)為白癜風(fēng)的發(fā)病與患者自身免疫功能有一定關(guān)系[1]。免疫性疾病與人體T細(xì)胞功能失衡有著一定關(guān)系，T細(xì)胞在人體中主要起到識(shí)別、傳遞及處理抗原的作用，讓人體各類細(xì)胞因子之間維持平衡，保持生理功能的正常運(yùn)轉(zhuǎn)維持自身免疫功能。有研究指出，T細(xì)胞與白癜風(fēng)患者皮膚黑色素的破壞有著密切關(guān)系，且細(xì)胞免疫因素在白癜風(fēng)的發(fā)病中可能起到相關(guān)作用，主要表現(xiàn)為患者外周血T 淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量的變化，如比例失調(diào)等[2]。有研究指出，CD4+T在白癜風(fēng)疾病中扮演重要角色，患者發(fā)病后該細(xì)胞會(huì)發(fā)生明顯變化，而免疫性疾病患者自身性激素水平亦會(huì)因此顯著改變[3-4]。臨床有關(guān)CD4+T 及性激素與白癜風(fēng)的關(guān)系研究雖有，但關(guān)于兩者的相關(guān)性研究較少。本文旨在分析白癜風(fēng)患者外周血CD4+T 和性激素水平的變化及兩者間的相關(guān)性，以期為該病患者的診斷及治療提供幫助。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析寶雞市中心醫(yī)院皮膚科2016 年10 月至2019 年7 月收治的62 例白癜風(fēng)患者(觀察組)的臨床資料。 納入標(biāo)準(zhǔn)：①資料完整；②年齡已滿18 歲；③三個(gè)月內(nèi)未系統(tǒng)服用過(guò)糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑與免疫調(diào)節(jié)劑。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患有嚴(yán)重系統(tǒng)性疾病與其他免疫性疾病者；②心、肝、腎存在嚴(yán)重疾病或功能異常者；③患有精神抑郁類疾病者或長(zhǎng)期服用此類藥物者。另選取60 例同期體檢正常人群作為對(duì)照組。觀察組中男性32例，女性30例；年齡22～68 歲，中位年齡35.8 歲；病程1～11 年，中位病程4.3 年。按照中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)皮膚性病專業(yè)委員會(huì)色素病學(xué)組修定的《白癜風(fēng)診療共識(shí)(2018版)》中標(biāo)準(zhǔn)[5]，將觀察組患者分為進(jìn)展期28例，穩(wěn)定期34例；尋常型白癜風(fēng)48例(局限性16例、肢端性14 例、散發(fā)性15例、泛發(fā)性3例)，節(jié)段型14例。對(duì)照組中男性30 例，女性30 例；年齡23～69 歲，中位年齡36.2 歲。兩組受檢者的性別和年齡比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 觀察指標(biāo) (1)比較觀察組和對(duì)照組受檢者的CD4+T水平與性激素水平；(2)比較觀察組不同性別、不同疾病時(shí)期與疾病類型患者的外周血CD4+T細(xì)胞和性激素水平；(3)分析CD4+T與性激素各項(xiàng)指標(biāo)的相關(guān)性。

1.3 檢測(cè)方法 (1)樣本采集方法：采集所有入選對(duì)象清晨空腹靜脈血3.0～4.0 mL 于采血管后混勻，共抽取2管。(2)CD4+T細(xì)胞檢測(cè)方法：向樣本中加入20 μL的CD4+T抗體，完成后再度加入50 μL的抗凝全血，蓋上管蓋充分振蕩混勻，室溫環(huán)境下避光進(jìn)行孵育15 min。完成以上步驟后，向管中加入450 μL的溶血素，再度進(jìn)行振蕩混勻，完成后室溫避光孵育15 min待檢。使用流式細(xì)胞儀(品牌：美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特)與配套試劑盒檢測(cè)CD4+T細(xì)胞比例，操作時(shí)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行。(3)性激素檢測(cè)方法：常溫環(huán)境下自然凝固后離心分離，將分離獲得的血清，放置于-20℃的環(huán)境中保存，采用美國(guó)BECKMANCOULTER 公司的Uni CelDx I800 Access 免疫分析系統(tǒng)與配套試劑盒，以堿性磷酸酶標(biāo)記抗體于抗原，磁性微粒子作為載體，Lumi-Phos 530 作為發(fā)光底物，使用化學(xué)發(fā)光法對(duì)促黃體生成激素(luteinizing hormone，LH)、促卵泡激素(follicle stimulating hormone，F(xiàn)SH)、睪酮(testosterone，T)、泌乳素(prolactin，PRL)、孕 酮(progesterone，Pg)、雌二醇(estradiol，E2)進(jìn)行檢測(cè)，操作時(shí)均按照說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS22.0與GraphPad軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，CD4+T與性激素各項(xiàng)指標(biāo)相關(guān)性采用Pearson相關(guān)性分析，相關(guān)性散點(diǎn)圖采用GraphPad軟件繪制；以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組受檢者的CD4+T 水平比較 觀察組患者的CD4+T水平為(36.09±8.55)%，明顯低于對(duì)照組的(39.22±1.93)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.767，P＜0.05)。

2.2 觀察組不同疾病時(shí)期和不同疾病類型患者的CD4+T 水平比較 觀察組中進(jìn)展期患者的CD4+T水平為(27.68±2.77)%，明顯低于穩(wěn)定期的(43.02±4.41)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=15.985，P＜0.05)。尋常型白癜風(fēng)患者的CD4+T水平為(33.02±7.13)%，明顯低于節(jié)段型的(46.61±2.41)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.983，P＜0.05)。

2.3 兩組受檢者不同性別的性激素水平比較 觀察組與對(duì)照組男性的LH、FSH、T、PRL水平比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；但觀察組患者的Pg、E2水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表1。觀察組與對(duì)照組女性的LH、FSH、T、PRL水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；但觀察組患者的Pg、E2水平明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表2。

2.4 觀察組不同疾病時(shí)期和不同疾病類型男性和女性患者的性激素水平比較 觀察組男性患者中，進(jìn)展期13例，穩(wěn)定期19例；尋常型23例，節(jié)段型9例。進(jìn)展期和穩(wěn)定期，以及尋常型和節(jié)段型患者的各項(xiàng)性激素水平比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)表3。觀察組女性患者中進(jìn)展期15例，穩(wěn)定期15例；尋常型25例，節(jié)段型5例。進(jìn)展期和穩(wěn)定期患者的LH、FSH、T、PRL 水平比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但進(jìn)展期女性患者的Pg、E2 水平明顯高于穩(wěn)定期，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；尋常型和節(jié)段型女性患者的各項(xiàng)性激素水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)表4。

表1 兩組受檢者男性性激素水平比較()

表1 兩組受檢者男性性激素水平比較()

組別觀察組對(duì)照組t值P值例數(shù)32 30 LH(mIU/mL)4.42±1.03 4.09±0.86 1.365 0.177 FSH(mIU/mL)6.75±1.79 6.68±1.66 0.159 0.874 T(ng/mL)3.75±0.80 3.99±0.72 1.239 0.220 PRL(ng/mL)9.26±1.44 9.18±1.37 0.224 0.824 Pg(ng/mL)0.93±0.25 0.55±0.10 7.761 0.001 E2(pg/mL)45.67±7.09 33.82±6.73 6.740 0.001

表2 兩組受檢者女性性激素水平比較()

表2 兩組受檢者女性性激素水平比較()

組別觀察組對(duì)照組t值P值例數(shù)32 30 LH(mIU/mL)15.93±3.68 15.88±3.70 0.052 0.958 FSH(mIU/mL)46.93±8.74 47.13±8.82 0.088 0.93 T(ng/mL)0.40±0.09 0.43±0.10 1.221 0.227 PRL(ng/mL)10.22±3.05 10.15±2.82 0.092 0.927 Pg(ng/mL)10.28±1.82 7.02±1.05 8.498 0.001 E2(pg/mL)88.26±15.71 38.23±5.20 16.559 0.001

表3 觀察組不同疾病時(shí)期和不同疾病類型男性患者的性激素水平比較()

表3 觀察組不同疾病時(shí)期和不同疾病類型男性患者的性激素水平比較()

組別進(jìn)展期穩(wěn)定期t值P值尋常型節(jié)段型t值P值例數(shù)13 19 23 9 LH(mIU/mL)4.47±1.04 4.38±1.05 0.226 0.823 4.46±1.05 4.30±1.04 0.403 0.690 FSH(mIU/mL)6.67±1.79 6.81±1.83 0.208 0.837 6.67±1.81 6.96±1.83 0.401 0.691 T(ng/mL)3.73±0.79 3.76±0.83 0.111 0.912 3.78±0.80 3.67±0.83 0.364 0.718 PRL(ng/mL)9.32±1.43 9.22±1.48 0.204 0.840 9.22±1.44 9.67±1.57 0.260 0.797 Pg(ng/mL)0.92±0.56 0.94±0.25 0.296 0.769 0.94±0.25 0.90±0.26 0.442 0.662 E2(pg/mL)45.29±7.11 45.93±7.26 0.250 0.805 45.88±7.05 45.12±7.59 0.269 0.790

2.5 CD4+T 與性激素各項(xiàng)指標(biāo)的相關(guān)性 經(jīng)Pearson 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，CD4+T 與LH、FSH、T呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系，與PRL、Pg、E2 呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)關(guān)系，見(jiàn)圖1～圖6。

表4 觀察組不同疾病時(shí)期和不同疾病類型女性患者的性激素水平比較

表4 觀察組不同疾病時(shí)期和不同疾病類型女性患者的性激素水平比較

組別進(jìn)展期穩(wěn)定期t值P值尋常型節(jié)段型t值P值例數(shù)15 15 25 5 LH(mIU/mL)15.03±2.42 13.23±2.75 1.899 0.068 14.05±2.60 14.52±3.50 0.348 0.730 FSH(mIU/mL)46.62±3.14 42.95±6.32 2.013 0.054 45.42±4.27 41.64±8.68 1.501 0.144 T(ng/mL)0.41±0.08 0.39±0.96 0.413 0.683 0.40±0.09 0.40±0.10 0.000 1.000 PRL(ng/mL)11.94±2.51 10.10±2.54 1.997 0.056 10.66±2.74 12.84±1.03 1.740 0.093 Pg(ng/mL)11.23±1.62 9.33±1.51 3.341 0.002 10.26±1.69 10.36±2.61 0.106 0.916 E2(pg/mL)101.04±8.30 75.48±9.62 7.791 0.001 87.92±14.70 89.96±2.11 0.261 0.796

圖1 CD4+T與LH相關(guān)性散點(diǎn)圖

圖2 CD4+T與FSH相關(guān)性散點(diǎn)圖

圖3 CD4+T與T相關(guān)性散點(diǎn)圖

圖4 CD4+T與PRL相關(guān)性散點(diǎn)圖

圖5 CD4+T與Pg相關(guān)性散點(diǎn)圖

圖6 CD4+T與E2相關(guān)性散點(diǎn)圖

3 討論

白癜風(fēng)患者常見(jiàn)表現(xiàn)為后天色素脫失，受累于黏膜與毛發(fā)。根據(jù)統(tǒng)計(jì)，在全球范圍內(nèi)該病發(fā)病率為1%～2%，在我國(guó)發(fā)病率為0.1%～2.7%，患者通常在兒童或青少年時(shí)期發(fā)病[6-7]。白癜風(fēng)疾病雖不會(huì)對(duì)人體健康造成明顯影響，但患病后皮膚外觀會(huì)發(fā)生改變，對(duì)人的心理狀態(tài)造成影響，甚至影響患者正常的社會(huì)交往，所以在患病后多數(shù)患者希望疾病的發(fā)展得到減緩，甚至于將該病治愈[8-9]。白癜風(fēng)疾病病因至今仍不明確，無(wú)法做到針對(duì)性治療，臨床治愈率較低。目前關(guān)于白癜風(fēng)發(fā)病機(jī)制的研究討論較多，主要集中于人體免疫、黑色素細(xì)胞破壞、微量元素、遺傳、神經(jīng)化學(xué)因子等方面，但確切機(jī)制依舊不明。而近幾年有學(xué)者提出，性激素作為神經(jīng)內(nèi)分泌激素的一種，不僅對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)可造成影響與免疫性疾病也有著一定關(guān)系[10]。CD4+T 細(xì)胞作為人體免疫功能的代表性指標(biāo)，臨床中有關(guān)其與白癜風(fēng)的研究較多，可臨床中關(guān)于白癜風(fēng)患者CD4+T水平與性激素水平相關(guān)性研究較少，對(duì)此進(jìn)行研究可為臨床中該病患者的治療與發(fā)病機(jī)制的探討提供相應(yīng)幫助。

CD4+T 細(xì)胞主要以維持機(jī)體正常免疫功能為主，當(dāng)T 淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量與功能發(fā)生異常時(shí)，人體就可出現(xiàn)免疫功能紊亂及一系列病理變化[11]。目前國(guó)內(nèi)有關(guān)于白癜風(fēng)患者外周血CD4+T 細(xì)胞研究結(jié)果偏少。但國(guó)外研究分析顯示：白癜風(fēng)患者人體外周血CD4+T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)顯著低于正常人[12]。CD4+T是一類不均一的細(xì)胞體，具有促進(jìn)T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞增殖與分化的雙重作用。研究指出，白癜風(fēng)患者外周血中CD4+T 可出現(xiàn)明顯減少趨勢(shì)[13]。本研究中白癜風(fēng)患者CD4+T淋巴細(xì)胞明顯降低，表明白癜風(fēng)患者細(xì)胞免疫功能為抑制狀態(tài)，這主要是白癜風(fēng)疾病導(dǎo)致體內(nèi)T 淋巴細(xì)胞激活，進(jìn)而導(dǎo)致具有抗原與接受信號(hào)傳導(dǎo)能力的CD4+T 細(xì)胞被刺激分泌降低有關(guān)，這與CZARNOWICKI 等[12]研究結(jié)果相一致。本研究中觀察組性激素Pg、E2 指標(biāo)水平與健康人群存在顯著差異；男性白癜風(fēng)患者與正常對(duì)照組男性對(duì)象，進(jìn)展期與穩(wěn)定期女性性激素Pg、E2 指標(biāo)存在明顯差異。究其原因：性激素在人體中以游離狀態(tài)被動(dòng)擴(kuò)散進(jìn)入人體細(xì)胞中，在與特異性受體結(jié)合后，導(dǎo)致激素-受體復(fù)合物形成引起受體構(gòu)象改變。Pg、E2 不同性別者會(huì)存在明顯的不同，國(guó)外曾有報(bào)道白癜風(fēng)患者采用性激素藥物治療后有效的結(jié)論[14-15]。但本研究白癜風(fēng)患者男性、女性年齡分布幅度較大，且該研究為回顧性分析并未考慮患者是否患有其他會(huì)影響性激素水平的相關(guān)疾病，如生殖系統(tǒng)疾病、婦科疾病。所以該結(jié)果可能存在一定偏倚臨床中還需后續(xù)進(jìn)一步分析研究。本研究結(jié)果還顯示：CD4+T 與LH、FSH、T 呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系，表明CD4+T 的升高會(huì)導(dǎo)致LH、FSH、T 的升高；反之則下降；與PRL、Pg、E2 呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)關(guān)系，表明PRL、Pg、E2 會(huì)隨著CD4+T 的增高而下降，下降而增高。同時(shí)也表明CD4+T 與性激素之間可相互影響，作用于人體免疫與激素平衡功能。但CD4+T與性激素之間是何種相互機(jī)制下影響，且是否為導(dǎo)致白癜風(fēng)患者發(fā)病的因素臨床中并無(wú)研究，后續(xù)需進(jìn)一步分析研究。

綜上所述，白癜風(fēng)患者細(xì)胞免疫狀況存在明顯異常，且不同疾病程度患者免疫狀態(tài)亦不相同。白癜風(fēng)患者性激素指標(biāo)Pg、E2 之間存在明顯差異，其中不同疾病程度女性Pg、E2 水平存在明顯差異，CD4+T 與性激素各項(xiàng)指標(biāo)間存在顯著相關(guān)關(guān)系，但其是否相互影響以致白癜風(fēng)患者發(fā)病還需臨床進(jìn)一步研究證實(shí)。