右美托咪定介導(dǎo)Wnt通路對(duì)七氟醚誘導(dǎo)的新生大鼠認(rèn)知功能障礙的影響

楊 悅，楊 磊 ，吳 昱 ，袁 軍

1武漢市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 武漢市第一醫(yī)院麻醉科，武漢 430022 2華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院協(xié)和醫(yī)院麻醉科，武漢 430022

七氟醚無(wú)刺激性且對(duì)血液動(dòng)力學(xué)影響較小，是目前臨床上廣泛使用的嬰幼兒吸入性麻醉藥[1- 2]。但目前有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，七氟醚的吸入會(huì)導(dǎo)致新生動(dòng)物神經(jīng)元凋亡、認(rèn)知障礙等情況出現(xiàn)[3- 4]。因此，接受七氟醚麻醉后可能會(huì)對(duì)新生兒神經(jīng)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)以及功能造成損傷。探究降低七氟醚麻醉后對(duì)大腦認(rèn)知功能的影響的具體機(jī)制，對(duì)降低七氟醚不良反應(yīng)具有非常重要的作用。右美托咪定(dexmedetomidine，Dex)是一種有效的α2受體激動(dòng)劑，具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜和抗焦慮等作用[5]。目前Dex常用于重癥監(jiān)護(hù)室中作為全身麻醉的輔助藥物，從而減少麻醉劑量，并發(fā)揮鎮(zhèn)痛與鎮(zhèn)靜的效果[6- 7]。但目前Dex對(duì)大腦認(rèn)知功能障礙的改善機(jī)制尚未完全明確。Wnt信號(hào)通路是經(jīng)典的信號(hào)通路之一，其分為經(jīng)典Wnt信號(hào)通路和非經(jīng)典Wnt信號(hào)通路[8]。Wnt信號(hào)通路對(duì)機(jī)體的正常發(fā)育具有非常關(guān)鍵的作用。目前多項(xiàng)研究表明，Wnt信號(hào)通路對(duì)海馬可塑性以及記憶功能具有重要的調(diào)控作用[8- 11]。有研究表明七氟醚可通過(guò)有效抑制Wnt信號(hào)通路成員的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)海馬細(xì)胞凋亡[12]。前期研究中，筆者發(fā)現(xiàn)Dex處理大鼠后，Wnt信號(hào)通路成員β-鏈蛋白表達(dá)發(fā)生了明顯的變化，因此推測(cè)Dex可能會(huì)通過(guò)影響Wnt信號(hào)通路的表達(dá)，進(jìn)而影響大腦認(rèn)知功能。本研究對(duì)新生SD雄性幼鼠進(jìn)行七氟醚處理，構(gòu)建新生大鼠認(rèn)知功能障礙模型，并通過(guò)一系列處理，探究Dex對(duì)七氟醚誘導(dǎo)的新生大鼠認(rèn)知功能障礙的影響機(jī)制。

材料和方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)及模型制備60只出生7 d SD雄性幼鼠，約15g，購(gòu)于斯萊克景達(dá)動(dòng)物公司。置于恒溫恒濕環(huán)境中，分籠飼養(yǎng)，標(biāo)準(zhǔn)飼料無(wú)菌水飼養(yǎng)1周適應(yīng)環(huán)境。動(dòng)物應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字法分為5組，每組12只：正常對(duì)照組、七氟醚處理組、Dex處理組、七氟醚+Dex處理組、七氟醚+Dex處理+Wnt抑制劑組。

模型制備：Dex處理組、七氟醚+Dex處理組腹腔注射25 μg/kg的Dex，七氟醚+Dex處理+Wnt抑制劑組腹腔注射25 μg/kg的Dex及2 kg/ml的Wnt抑制劑XAV393 100 μl，其余組注射等體積的生理鹽水。30 min后將大鼠放入封閉的塑料箱內(nèi)，七氟醚處理組、七氟醚+Dex處理組、七氟醚+Dex處理+Wnt抑制劑組吸入3%的七氟醚加21%的O2(2 L/min)持續(xù)4 h。Dex處理組和正常對(duì)照組暴露在新鮮的空氣下同樣時(shí)間，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后所有大鼠放回籠子常規(guī)飼養(yǎng)。

行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，腹腔注射2%戊巴比妥鈉(80 mg/kg)，每組取6只，4%多聚甲醛進(jìn)行心臟灌注，取大腦組織，甲醛固定，用于組織切片。其余6只斷頭處死大鼠，取海馬組織，凍于液氮中，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)[13]。

熒光定量PCR 檢測(cè)相關(guān)基因表達(dá)凍存的海馬組織從液氮取出，磨成粉末狀，再加入1 ml Trizol(貨號(hào)：15596026；Invitrogen；USA)，按照說(shuō)明書(shū)指示提取總RNA，隨后測(cè)定儀測(cè)濃度。以2 μg RNA為模板進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄(TaKaRa，Japan)，按說(shuō)明逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA。采用SYBR?Premix Ex TaqTM(TliRNaseH Plus)試劑盒(TaKaRa，Japan)于ABI7500定量PCR儀(Thermo，USA)上進(jìn)行熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)，反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性5 min，95 ℃變性15 s，60 ℃退火20 s，72 ℃延伸40 s，40個(gè)PCR循環(huán)。測(cè)定擴(kuò)增條帶的吸光度值，并用其與GAPDH吸光度的比值表示產(chǎn)物mRNA的相對(duì)含量。反應(yīng)中所用的引物如表1所示，引物均由上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司提供。

蛋白質(zhì)免疫印跡檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)凍存的海馬組織從液氮取出，稱重后加入含有蛋白酶抑制劑的蛋白裂解液的環(huán)氧樹(shù)脂管內(nèi)，用電動(dòng)研磨棒磨成勻漿，離心取上清，重辛酸測(cè)蛋白濃度。進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳(80 V 30 mim，120 V 60 min)，電泳完成后轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯膜(Merck Millipore，USA)上，5%封閉液室溫封閉2 h，磷酸鹽吐溫緩沖液(phosphate Tween buffer solution，PBST)洗滌后，加入一抗：Wnt3a 兔單抗(1∶1000；ab219412，Abcam；UK)、β-鏈蛋白兔多抗(1∶2000；ab6302Abcam；UK)、P(ser9)-GSK- 3β兔多抗(1∶500；ab131097；Abcam；UK)、GSK- 3β鼠單抗(1∶500；ab93926；Abcam；UK)、Cleaved 半胱氨酸蛋白酶- 3兔多抗(1∶1000；9664；CST；USA)，Bax兔單抗(1∶1000；14796；CST；USA)，Bcl- 2鼠單抗(1∶2000；964495；Abcam；UK)，GAPDH兔單克隆抗體(1∶10 000；ab181602；Abcam；UK)，4 ℃孵育過(guò)夜后，PBST[含0.1% Tween- 20的磷酸鹽緩沖溶液(phosphate buffer saline，PBS)]緩沖液洗膜3次，每次15 min。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔、羊抗鼠(1∶10 000，Jackson，USA)室溫孵育1 h，PBST緩沖液洗膜3次，每次10 min。將膜浸入電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)液(美國(guó)Pierce公司)中，室溫1 min。機(jī)器顯影。利用ImageJ軟件進(jìn)行蛋白條帶灰度掃描，各實(shí)驗(yàn)組與內(nèi)參相比后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

神經(jīng)核免疫組織化學(xué)染色4%甲醛中固定，酒精脫水后石蠟包埋(5 μm)，確定海馬組織位置后采取冠狀位連續(xù)切片，進(jìn)行神經(jīng)核(neuronal nuclei，NeuN)染色：脫蠟、水化及抗原修復(fù)后，3%過(guò)氧化氫室溫孵育30 min，血清封閉30 min，加入小鼠抗NeuN(1∶100，Millipore，USA)，37 ℃孵育10 min，PBS洗滌3次，生物素化羊抗鼠IgG孵育1 h，PBS洗滌3次辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和卵白素孵育1 h(Jackson，USA)，PBS洗滌3次，二氨基聯(lián)苯胺顯色，光鏡觀察，在500 μm×300 μm區(qū)域統(tǒng)計(jì)各組海馬組織NeuN陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。

TdT介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記實(shí)驗(yàn)染色按照TdT介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記實(shí)驗(yàn)(TdT mediated dUTP nick end labeling，TUNEL)檢測(cè)試劑盒(C1088，碧云天)說(shuō)明，取大腦組織切片，60 ℃烘烤2 h，經(jīng)二甲苯、無(wú)水乙醇梯度浸泡脫蠟和水化。3%過(guò)氧化氫室溫孵育10 min。加入免疫染色液稀釋后的蛋白酶K，37 ℃消化30 min，PBS洗3次。在樣品上加50 μl TUNEL檢測(cè)液(TdT酶5 μl 、熒光標(biāo)記液45 μl、TUNEL染色液50 μl)，37 ℃避光孵育1 h，PBS清洗3次?？篃晒獯銣绶馄悍馄鬅晒怙@微鏡下觀察。每只鼠取3個(gè)切片，每個(gè)切片隨機(jī)取6個(gè)視野，平均法統(tǒng)計(jì)凋亡細(xì)胞，計(jì)算公式如下：細(xì)胞死亡率=死亡神經(jīng)元細(xì)胞總數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%。

表1 熒光定量PCR引物序列

認(rèn)知功能檢測(cè)(Morris水迷宮實(shí)驗(yàn))模型建立3周后進(jìn)行Morris水迷宮訓(xùn)練。水溫恒定實(shí)驗(yàn)前將大鼠放入無(wú)平臺(tái)水池自由游泳3 mim適應(yīng)環(huán)境。水池劃分為4個(gè)象限，在第4象限放置一直徑為12 cm的逃生平臺(tái)。定位航行實(shí)驗(yàn)：每天上午、下午各1次，連續(xù)6 d。隨機(jī)選取一象限為起始點(diǎn)，將大鼠面向池壁放入水池中，記錄大鼠到達(dá)平臺(tái)的時(shí)間(逃避潛伏期)。第7天撤去平臺(tái)，進(jìn)入空間探索實(shí)驗(yàn)，記錄大鼠在90 s內(nèi)穿越原始平臺(tái)的次數(shù)。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。組間比較采用t檢驗(yàn)，多組比較采用單因素方差分析(one way ANOVE)，聯(lián)合兩兩比較采用Bonferroni檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

Dex對(duì)七氟醚誘導(dǎo)的新生大鼠認(rèn)知障礙的影響各組大鼠水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)逃避潛伏期顯示，隨著訓(xùn)練時(shí)間的延長(zhǎng)，各組大鼠逃避潛伏期的時(shí)間逐漸縮短。第6天實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，Dex處理組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.304，P=0.768)；七氟醚處理組(t=5.823，P=0.002)、七氟醚+Dex處理組(t=3.188，P=0.010)及七氟醚+Dex處理+Wnt抑制劑組(t=5.784，P=0.002)逃避潛伏期時(shí)間延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與七氟醚處理組相比，七氟醚+Dex處理組逃避潛伏期時(shí)間減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.646，P=0.005)。與七氟醚+Dex處理組相比，七氟醚+Dex處理+Wnt抑制劑組逃避潛伏期時(shí)間增長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.296,P=0.008)。各組穿越平臺(tái)次數(shù)結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，七氟醚處理組(t=5.179，P=0.004)、七氟醚+Dex處理組(t=2.309，P=0.043)及七氟醚+Dex處理+Wnt抑制劑組(t=3.871，P=0.003)穿越平臺(tái)次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與七氟醚處理組比較，七氟醚+Dex處理組穿越平臺(tái)次數(shù)增加(t=3.296，P=0.008)；與七氟醚+Dex處理組比較，七氟醚+Dex處理+Wnt抑制劑組穿越平臺(tái)次數(shù)較少(t=2.361，P=0.041)(表2)。

Dex對(duì)七氟醚誘導(dǎo)的新生大鼠海馬CA1區(qū)TUNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)的影響TUNEL染色結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，Dex處理組凋亡細(xì)胞數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.920，P=0.127)，七氟醚處理組、七氟醚+Dex處理組及七氟醚+Dex處理+Wnt抑制劑組凋亡細(xì)胞數(shù)均有不同程度增加，其中七氟醚處理組增加16%(t=13.436，P=0.002)，七氟醚+Dex處理組增加5%(t=7.752，P=0.001)，七氟醚+Dex處理+Wnt抑制劑組增加11.5%(t=12.612，P=0.002)。與七氟醚處理組相比，七氟醚+Dex處理組細(xì)胞凋亡數(shù)降低11%(t=8.521，P=0.002)，七氟醚+Dex處理+Wnt抑制劑組降低5.5%(t=3.123，P=0.036)。與七氟醚+Dex處理組相比，七氟醚+Dex處理+Wnt抑制劑組細(xì)胞凋亡增加6.5%(t=6.250，P=0.003)(圖1)。

TUNEL：dUTP缺口末端標(biāo)記；與正常對(duì)照組比較，a P<0.05；與七氟醚處理組比較，b P<0.05；與七氟醚+Dex處理組比較，c P<0.05

Dex對(duì)七氟醚誘導(dǎo)的新生大鼠海馬CA1區(qū)NeuN染色陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)的影響NeuN染色結(jié)果顯示，在0.15 mm2區(qū)域內(nèi)，與正常對(duì)照組相比，Dex處理組(t=0.898，P=0.136)及七氟醚+Dex處理組(t=0.203，P=1.519)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，七氟醚處理組及七氟醚+Dex處理+Wnt抑制劑組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均有不同程度減少，其中七氟醚處理組、七氟醚+Dex處理+Wnt抑制劑組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分別減少31(t=4.702，P=0.009)及26個(gè)(t=3.948，P=0.014)。與七氟醚處理組相比，七氟醚+Dex處理組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增加17個(gè)(t=3.415，P=0.018)，七氟醚+Dex處理+Wnt抑制劑組增加5個(gè)(P=0.001)。與七氟醚+Dex處理組比較，七氟醚+Dex處理+Wnt抑制劑組陽(yáng)性細(xì)胞減少12個(gè)(t=3.010，P=0.039)(圖2)。

海馬神經(jīng)元細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白半胱氨酸蛋白酶3、Bax、Bcl- 2的表達(dá)蛋白質(zhì)免疫印跡檢測(cè)海馬組織中凋亡相關(guān)蛋白半胱氨酸蛋白酶3、Bax、Bcl- 2的灰度值，結(jié)果顯示與正常對(duì)照組比較，Dex處理組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.612，P=0.573；t=1.225，P=0.288；t=0.961，P=0.391)，七氟醚處理組、七氟醚+Dex處理組及七氟醚+Dex處理+Wnt抑制劑組Bax(t=13.440，P=0.002；t=8.520，P=0.001；t=13.320，P=0.002)及半胱氨酸蛋白酶3(t=9.860，P=0.001；t=6.120，P=0.004；t=11.620，P=0.003)均表達(dá)上調(diào)，Bcl- 2(t=7.671，P=0.002；t=2.880，P=0.045；t=6.280，P=0.003)表達(dá)下調(diào)。與七氟醚處理組相比，七氟醚+Dex處理組Bax(t=8.130，P=0.001)及半胱氨酸蛋白酶3(t=7.120，P=0.002)均表達(dá)下調(diào)，Bcl- 2(t=6.201，P=0.003)表達(dá)上調(diào)。與七氟醚+Dex處理組相比，七氟醚+Dex處理+Wnt抑制劑組Bax(t=7.310，P=0.002)及半胱氨酸蛋白酶3(t=7.750，P=0.002)均表達(dá)上調(diào)，Bcl- 2(t=4.206，P=0.013)表達(dá)下調(diào)(圖3)。

NeuN：神經(jīng)元核抗原；與正常對(duì)照組比較，a P<0.05；與七氟醚處理組比較，b P<0.05；與七氟醚+Dex處理組比較，c P<0.05

Wnt/β-鏈蛋白通路相關(guān)因子Wnt3a、GSK- 3β、β-鏈蛋白的mRNA表達(dá)熒光定量PCR檢測(cè)海馬組織Wnt/β-鏈蛋白信號(hào)通路相關(guān)分子Wnt3a、GSK- 3β、β-鏈蛋白mRNA的表達(dá)情況，結(jié)果顯示與正常對(duì)照組相比，Dex處理組Wnt3a、GSK- 3β及β-鏈蛋白(t=1.230，P=0.290；t=0.901，P=0.418；t=1.837，P=0.140)及七氟醚+Dex處理組Wnt3a、β-鏈蛋白(t=1.102，P=0.332；t=1.030，P=0.361)表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，七氟醚處理組(t=5.790，P=0.004；t=7.130，P=0.002)、七氟醚+Dex處理+Wnt抑制劑組(t=7.130，P=0.002；t=5.500，P=0.005)中Wnt3a、β-鏈蛋白均表達(dá)下調(diào)，七氟醚處理組(t=4.800，P=0.009)、七氟醚+Dex處理組(t=2.940，P=0.045)及七氟醚+Dex處理+Wnt抑制劑組(t=3.100，P=0.042)GSK- 3β表達(dá)上調(diào)。與七氟醚處理組相比，七氟醚+Dex處理組Wnt3a(t=4.460，P=0.011)及β-鏈蛋白(t=6.390，P=0.003)均表達(dá)上調(diào)，GSK- 3β(t=4.160，P=0.004)表達(dá)下調(diào)。與七氟醚+Dex處理組相比，七氟醚+Dex處理+Wnt抑制劑組Wnt3a(t=5.730,P=0.005)及β-鏈蛋白(t=4.640，P=0.010)均表達(dá)下調(diào)，GSK- 3β有表達(dá)上調(diào)趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.240，P=0.117)(圖4)。

與正常對(duì)照組比較，a P<0.05；與七氟醚處理組比較，b P<0.05；與七氟醚+Dex處理組比較，c P<0.05

與正常對(duì)照組比較，a P<0.05；與七氟醚處理組比較，b P<0.05；與七氟醚+Dex處理組比較，c P<0.05

Wnt/β-鏈蛋白通路相關(guān)因子Wnt3a、GSK- 3β、β-鏈蛋白的蛋白表達(dá)蛋白質(zhì)免疫印跡檢測(cè)海馬組織中Wnt/β-鏈蛋白信號(hào)通路相關(guān)分子Wnt3a、P(ser9)-GSK- 3β/GSK- 3β及β-鏈蛋白蛋白灰度值情況，結(jié)果顯示與正常對(duì)照組相比，Dex處理組(t=0.735，P=0.503；t=0.245，P=0.819)及七氟醚+Dex處理組(t=1.623，P=0.180；t=1.159，P=0.311)Wnt3a、β-鏈蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，七氟醚處理組(t=7.280，P=0.002；t=5.640，P=0.005)與七氟醚+Dex處理+Wnt抑制劑組(t=7.240，P=0.002；t=4.970，P=0.008)表達(dá)下調(diào)。與七氟醚處理組相比，七氟醚+Dex處理組Wnt3a(t=6.410，P=0.003)、β-鏈蛋白表達(dá)上調(diào)(t=4.640，P=0.015)。與七氟醚+Dex處理組相比，七氟醚+Dex處理+Wnt抑制劑組Wnt3a(t=6.360，P=0.003)、β-鏈蛋白表達(dá)下調(diào)(t=4.640，P=0.016)。蛋白質(zhì)免疫印跡檢測(cè)P(ser9)-GSK- 3β/GSK- 3β蛋白灰度值，結(jié)果顯示與正常對(duì)照組相比，七氟醚處理組(t=11.280，P=0.002)、七氟醚+Dex處理組(t=7.080，P=0.002)及七氟醚+Dex處理+Wnt抑制劑組(t=9.970，P=0.001)P(ser9)-GSK- 3β/GSK- 3β均表達(dá)下調(diào)。與七氟醚處理組相比，七氟醚+Dex處理組P(ser9)-GSK- 3β/GSK- 3β表達(dá)上調(diào)(t=8.310，P<0.001)。與七氟醚+Dex處理組相比，七氟醚+Dex處理+Wnt抑制劑組P(ser9)-GSK- 3β/GSK- 3β表達(dá)下調(diào)(t=5.510，P=0.005)(圖5)。

與正常對(duì)照組比較，a P<0.05；與七氟醚處理組比較，b P<0.05；與七氟醚+Dex處理組比較，c P<0.05

討 論

越來(lái)越多的研究表明七氟醚麻醉會(huì)造成新生大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡以及認(rèn)知功能障礙[14- 15]。這意味著使用七氟醚麻醉對(duì)新生兒具有神經(jīng)毒性，會(huì)對(duì)新生兒大腦認(rèn)知功能造成影響。

Dex常用于全身麻醉的輔助劑，由于其具有鎮(zhèn)靜和鎮(zhèn)痛的效果，目前Dex在兒科醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用越來(lái)越多[16]。有研究表明Dex可通過(guò)誘導(dǎo)自然睡眠，從而產(chǎn)生鎮(zhèn)靜效果[17]。研究表明，Dex的輔助用藥可改善新生大鼠認(rèn)知功能障礙[18]。更有研究表明Dex可減輕七氟醚誘導(dǎo)的新生大鼠神經(jīng)退行性病變和長(zhǎng)期記憶障礙[19]。本研究證實(shí)七氟醚處理后會(huì)導(dǎo)致大鼠神經(jīng)元凋亡和認(rèn)知功能障礙。而Dex可抑制七氟醚處理后大鼠神經(jīng)元凋亡，促進(jìn)神經(jīng)元存活，并改善大鼠認(rèn)知功能障礙。

前期研究顯示經(jīng)Dex處理后的大鼠，Wnt信號(hào)通路成員β-鏈蛋白表達(dá)發(fā)生明顯改變，因此筆者推測(cè)Dex對(duì)大鼠認(rèn)知功能的改善作用可能通過(guò)作用于Wnt信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)。Wnt信號(hào)通路對(duì)機(jī)體發(fā)育必不可少，Wnt信號(hào)通路對(duì)心臟發(fā)育、骨骼疾病、癌癥和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育均具有關(guān)鍵的調(diào)控作用[19- 21]。在神經(jīng)發(fā)育的調(diào)控中，Wnt信號(hào)通路是大腦中海馬神經(jīng)元的形成和可塑性所必需的。且Wnt信號(hào)通路可促進(jìn)海馬學(xué)習(xí)和記憶[22]。七氟醚麻醉后，會(huì)導(dǎo)致Wnt信號(hào)通路被抑制，進(jìn)而產(chǎn)生認(rèn)知功能障礙[23]。Wnt信號(hào)通路成員主要包括Wnt3a、GSK- 3β、β-鏈蛋白等[24- 25]。Wnt3a可特異性調(diào)控海馬神經(jīng)元的增殖。GSK- 3β磷酸化被激活后或β-鏈蛋白表達(dá)升高后，可促進(jìn)記憶鞏固，增強(qiáng)海馬學(xué)習(xí)能力[26- 28]。七氟醚可通過(guò)抑制Wnt/β-鏈蛋白活性，抑制其轉(zhuǎn)錄水平，進(jìn)而抑制細(xì)胞的增殖[29]。七氟醚對(duì)Wnt3a、GSK 3β和β-鏈蛋白的表達(dá)有影響，七氟醚可抑制Wnt/β-鏈蛋白的活性[30]。本研究證實(shí)Wnt信號(hào)通路被抑制后，神經(jīng)元凋亡升高，存活率降低，認(rèn)知功能障礙加重。七氟醚處理后大鼠Wnt信號(hào)通路表達(dá)被抑制，且進(jìn)一步研究證實(shí)Dex處理后，促進(jìn)Wnt信號(hào)的傳導(dǎo)，進(jìn)而改善新生大鼠認(rèn)知功能。因此，筆者推測(cè)Dex通過(guò)促進(jìn)Wnt信號(hào)通路活性，促進(jìn)信號(hào)通路下游基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，進(jìn)而改善七氟醚誘導(dǎo)的新生大鼠認(rèn)知功能障礙。

綜上，筆者探究Dex對(duì)七氟醚處理后新生大鼠認(rèn)知障礙的影響，完善Dex對(duì)新生大鼠認(rèn)知功能障礙的信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制。而β-鏈蛋白的過(guò)度表達(dá)則會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)前體細(xì)胞的增殖，進(jìn)而導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞過(guò)度增殖。因此，Dex可能會(huì)存在未知的不良反應(yīng)，導(dǎo)致機(jī)體毒性的積累，但目前對(duì)這一問(wèn)題尚未進(jìn)行深入探究。筆者發(fā)現(xiàn)Wnt信號(hào)通路抑制劑處理后，未能完全阻斷Dex對(duì)新生大鼠認(rèn)知功能障礙的改善作用，因此推斷Dex可通過(guò)多種途徑改善新生大鼠認(rèn)知功能障礙，仍需進(jìn)一步探究并完善Dex對(duì)新生大鼠認(rèn)知功能障礙的作用機(jī)制。