9種殺菌劑對(duì)桉樹(shù)輪斑病原菌室內(nèi)毒力測(cè)定

鄒東霞，鐘雅婷，廖旺姣，羅 輯

（廣西壯族自治區(qū)林業(yè)科學(xué)研究院 廣西優(yōu)良用材林資源培育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西南寧 530002）

桉樹(shù)（Eucalyptusspp.）是廣西重要的用材林速生樹(shù)種，隨著人工林的大面積種植，病蟲(chóng)害的危害日趨嚴(yán)重[1]。桉樹(shù)人工林病害種類多，危害程度嚴(yán)重。據(jù)統(tǒng)計(jì)，廣西桉樹(shù)病害的種類多達(dá)38 種，其中桉樹(shù)輪斑病原菌（Pilidiella eucalyptorum、P.diplodi?ella）是桉樹(shù)主要真菌性病害之一[2-3]。該病害主要危害葉片，感病初期，葉片出現(xiàn)針頭狀紫色斑點(diǎn)，之后斑點(diǎn)逐漸擴(kuò)大，中間呈淡黃褐色，葉片邊緣的病斑有褪綠赤色暈圈，條件適宜時(shí)病斑上可形成少量褐色至黑色子實(shí)體。病斑有明顯輪紋，每一輪紋上可形成一輪褐色至黑色子實(shí)體[3]。

目前，植物真菌性病害的防治主要為化學(xué)防治?；瘜W(xué)殺菌劑有很多類型，不同類型的殺菌劑作用機(jī)理不同，對(duì)植物病害的防治效果也不同。苯醚甲環(huán)唑、戊唑醇、丙環(huán)唑和腈菌唑是三唑類殺菌劑，其作用機(jī)理是通過(guò)抑制P450 酶（CYP51）抑制羊毛甾醇向麥角甾醇轉(zhuǎn)化，破壞病原菌細(xì)胞膜功能，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡，對(duì)擔(dān)子菌、子囊菌和半知菌等大多數(shù)真菌性病害均有效[4]。吡唑醚菌酯和嘧菌酯是甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，通過(guò)干擾敏感真菌病原體線粒體內(nèi)膜上復(fù)合物Ⅲ（細(xì)胞色素bc1 復(fù)合物）Qo位點(diǎn)的功能來(lái)抑制線粒體呼吸作用[5]。吡唑醚菌酯可用來(lái)防治香蕉大莖點(diǎn)菌（Macrophoma musae）引起的香蕉黑痣病[6]、立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）引起的水稻紋枯病[7]等，嘧菌酯被用在防治立枯絲核菌引起的馬鈴薯黑痣病[8]、古巴假霜霉（Pseudoperonos?pora cubensis）引起的霜霉病[9-10]等病害。甲基硫菌靈又名甲基托布津，是廣譜內(nèi)吸性苯并咪唑類殺菌劑，該藥劑主要是通過(guò)影響病原菌菌絲的形成、干擾病原菌的細(xì)胞分裂、使細(xì)胞壁中毒和使孢子萌發(fā)長(zhǎng)出的芽管畸形等作用殺死病原菌[11]。甲基硫菌靈對(duì)枸杞尾孢（Cercospora lycii）引起的枸杞白粉病、蘋果鏈格孢菌（Alternaria mali）引起的蘋果斑點(diǎn)落葉病及水稻紋枯病等具有很好的防治效果[12-14]。此外，一些植物源殺菌劑對(duì)一些植物病原菌有較好的抑制效果[15-18]。關(guān)于殺菌劑對(duì)桉樹(shù)輪斑病原菌的抑菌效果未見(jiàn)報(bào)道。本研究選取了文獻(xiàn)報(bào)道中對(duì)植物真菌性病害具有較好防治效果的殺菌劑，使用不同殺菌劑對(duì)桉樹(shù)輪斑病原菌進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，篩選出抑菌效果較好的殺菌劑，為該病害林間的化學(xué)防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試病原菌

于廣西壯族自治區(qū)國(guó)有東門林場(chǎng)實(shí)驗(yàn)基地（107°46'E，22°19'N）采集感病的桉樹(shù)葉片，采用組織分離法進(jìn)行病原菌分離培養(yǎng)。對(duì)經(jīng)過(guò)致病性測(cè)定的菌株進(jìn)行形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定。桉樹(shù)輪斑病原菌被鑒定為P.eucalyptorum和P.diplodiella，與黃翠流等[3]報(bào)道的結(jié)果一致。菌株保存于4 ℃冰箱備用。

1.2 供試培養(yǎng)基

采用PDA 培養(yǎng)基對(duì)病原菌進(jìn)行分離、純化、保存及活化等。

1.3 供試殺菌劑

供試殺菌劑的劑型、有效成分及生產(chǎn)廠家等信息見(jiàn)表1。

表1 供試殺菌劑劑型、有效成分及生產(chǎn)廠家Tab.1 Formulation,active ingredients and manufacturer of tested fungicides

1.4 方法

采用菌絲生長(zhǎng)速率法進(jìn)行測(cè)定[19]。分別將不同供試殺菌劑用無(wú)菌水稀釋成5 種不同濃度的藥液，濃度設(shè)置的原則為5 種濃度的抑制率控制在10%～90%。

用移液槍分別吸取不同濃度殺菌劑藥液1 mL，加入50 mL 溶解后冷卻至55 ℃左右的無(wú)菌PDA 培養(yǎng)基中，充分混勻，分裝至內(nèi)徑為90 mm的無(wú)菌培養(yǎng)皿中，待培養(yǎng)基冷卻凝固后備用。每個(gè)濃度設(shè)置3次重復(fù)，用無(wú)菌打孔器（D=6 mm）取培養(yǎng)好的病菌菌餅，接種至含殺菌劑的PDA 平板中央，以沒(méi)有殺菌劑的PDA平板為對(duì)照，置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7天后，采用十字交叉法測(cè)定菌落直徑，并計(jì)算菌絲生長(zhǎng)抑制率。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用DPS 13.01 軟件求出各殺菌劑對(duì)病原菌的毒力回歸方程、EC50值及R值。

2 結(jié)果與分析

不同濃度的殺菌劑對(duì)2種病原菌具有不同程度的抑制作用。9 種殺菌劑對(duì)桉樹(shù)輪斑病原菌（P.eu?calyptorum）的EC50值為80%乙蒜素EC > 70%甲基硫菌靈WP > 25%嘧菌酯SC > 0.3%丁子香酚SL >20%丙環(huán)唑ME＞25%腈菌唑EC＞43%戊唑醇SC＞25%吡唑醚菌酯SC＞10%苯醚甲環(huán)唑ME（表2）。其中，毒力最強(qiáng)的是10%苯醚甲環(huán)唑ME，EC50值為0.011 6 mg/L；其次是25%吡唑醚菌酯SC，EC50值為0.045 3 mg/L；毒力最弱的是80%乙蒜素EC，EC50值為6.839 3 mg/L。

表2 不同殺菌劑對(duì)桉樹(shù)輪斑病原菌（P.eucalyptorum）室內(nèi)毒力測(cè)定Tab.2 Determination of different fungicides'toxicity on P.eucalyptorum in laboratory

續(xù)表2Continued

9種殺菌劑對(duì)桉樹(shù)輪斑病原菌（P.diplodiella）的EC50值為80%乙蒜素EC＞70%甲基硫菌靈WP＞25%嘧菌酯SC＞0.3%丁子香酚SL＞25%腈菌唑EC＞25%吡唑醚菌酯SC＞10%苯醚甲環(huán)唑ME＞20%丙環(huán)唑ME＞43%戊唑醇SC（表3）。其中，毒力最強(qiáng)的是43%戊唑醇SC，EC50值為0.047 3 mg/L；其次是20%丙環(huán)唑ME，EC50值為0.085 7 mg/L；毒力最差的是80%乙蒜素EC，EC50值為2.809 9 mg/L。

表3 不同殺菌劑對(duì)桉樹(shù)輪斑病菌（P.diplodiella）室內(nèi)毒力測(cè)定Tab.3 Determination of different fungicides'toxicity on P.diplodiella in laboratory

續(xù)表3Continued

3 結(jié)論與討論

本研究結(jié)果表明，9種殺菌劑對(duì)2種桉樹(shù)輪斑病原菌具有不同程度的抑制作用。其中，對(duì)P.euca?lyptorum毒力最強(qiáng)的是10%苯醚甲環(huán)唑ME，其次是25%吡唑醚菌酯SC，毒力最弱的是80%乙蒜素EC；對(duì)P.diplodiella毒力最強(qiáng)的是43%戊唑醇SC，其次是20%丙環(huán)唑ME，毒力最弱的是80%乙蒜素EC。建議對(duì)這些殺菌劑進(jìn)行林間防治試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證其防治效果。

供試的殺菌劑中有2 種植物源藥劑（0.3%丁子香酚SL 和80%乙蒜素EC），其中，0.3%丁子香酚SL對(duì)桉樹(shù)輪斑病原菌具有很好的抑制效果，對(duì)病菌的毒力強(qiáng)于化學(xué)殺菌劑25%嘧菌酯SC 和70%甲基硫菌靈WP。丁子香酚是從百部（Stemona japonica）和丁香（Eugenia caryophyllata）等中藥材中提取溶菌性化合物研制而成的，是具有廣譜、高效和安全特性的植物源殺菌劑。該殺菌劑對(duì)白術(shù)葉斑病菌（Pho?ma herbarum）[15]、蘋果樹(shù)腐爛病菌（Valsa mail）[16]、人參灰霉病菌（Botrytis cinerea）[17]、櫻桃莖腐病菌（Phy?tophthora nicotianae）[18]等抑制作用顯著。由于植物源殺菌劑易降解且對(duì)環(huán)境友好，林間防治時(shí)可適當(dāng)選用。

本研究只對(duì)9種藥劑的單劑進(jìn)行了室內(nèi)毒力測(cè)定，關(guān)于化學(xué)藥劑之間的復(fù)配劑、化學(xué)藥劑與植物源藥劑復(fù)配劑是否具有增效作用以及在林間的防治效果等，還需進(jìn)一步研究。