β-連環(huán)蛋白和CD146在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義△

謝軍，周磊

復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院靜安分院消化內(nèi)科，上海 200040

胃癌起源于胃黏膜上皮，是消化道最常見的惡性腫瘤，為多種因素（如遺傳因素、飲食因素、幽門螺桿菌感染）作用于胃黏膜致使其病變并逐步演變而來，至2018年全球胃癌發(fā)病率居惡性腫瘤第5位，病死率為8.2%，僅次于肺癌、結(jié)直腸癌，國內(nèi)胃癌發(fā)病率高居第2位，僅次于肺癌，好發(fā)于50歲以上人群，以男性居多[1-3]。目前許多國家已建立胃癌早期篩查、診斷和治療制度，在一定程度上顯著延長了患者的生存期，但依然無法扭轉(zhuǎn)胃癌進展的趨勢，胃癌患者常因腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移而死亡[4-5]。探尋惡性腫瘤標(biāo)志物或治療靶點是目前醫(yī)學(xué)界研究的熱點，腫瘤標(biāo)志物或治療靶點在早期篩查、腫瘤進展評估和治療方法中發(fā)揮了重要作用[6-7]。β-連環(huán)蛋白（β-catenin）是一種多功能蛋白，主要介導(dǎo)細(xì)胞間黏附和參與基因的表達(dá)，廣泛分布于內(nèi)皮細(xì)胞、成骨細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等多種類型的細(xì)胞內(nèi)并參與這些細(xì)胞的增殖、分化和凋亡等過程[8]。CD146屬于免疫球蛋白超家族成員，是一種具有跨膜結(jié)構(gòu)的黏附分子，可參與腫瘤細(xì)胞的黏附、轉(zhuǎn)移和新生血管的形成[9]。本研究通過觀察β-catenin、CD146在胃癌組織中的表達(dá)情況，分析其與胃癌之間的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017年10月至2018年10月復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院靜安分院收治的胃癌患者的病歷資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合胃癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[10]；②術(shù)前未行放療、化療；③組織標(biāo)本保存完好；④臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他胃部疾??；②合并其他惡性腫瘤。根據(jù)納入、排除標(biāo)準(zhǔn)，共納入108例胃癌患者（胃癌組），男性68例，女性40例；年齡36～68歲，平均（51.97±8.86）歲；取108例胃癌組織標(biāo)本。另選取40例因胃部疾病就診的非胃癌患者（對照組），男性25例，女性15例；年齡35～69歲，平均（52.31±9.36）歲；取40例胃組織標(biāo)本。兩組患者年齡、性別比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 免疫組織化學(xué)法

采用免疫組織化學(xué)法檢測胃組織中β-catenin、CD146的表達(dá)情況。將篩選入組的石蠟包埋組織標(biāo)本連續(xù)4 μm切片，完成切片后經(jīng)二甲苯脫蠟處理，梯度酒精水化處理，使用3%過氧化氫消除內(nèi)源性過氧化酶活性，在檸檬酸鈉溶液（pH值為6.0）中進行微波抗原修復(fù)，封閉。加入兔抗人β-catenin單克隆抗體、CD146抗體，4℃過夜，磷酸鹽緩沖液沖洗2～3次，加入二抗，室溫孵育，二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色液顯色，蘇木素復(fù)染，脫水，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察結(jié)果。按照免疫組織化學(xué)SP法試劑盒說明書由同一病理科人員嚴(yán)格進行操作。

1.3 結(jié)果判定

隨機取10個高倍視野應(yīng)用半定量積分法對染色細(xì)胞進行判讀。β-catenin陽性為細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒。陽性細(xì)胞比例：1分，0%＜陽性細(xì)胞比例≤10%；2分，10%＜陽性細(xì)胞比例≤50%；3分，陽性細(xì)胞比例＞50%。染色強度：未著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將二者得分相乘計算總積分：0～4分為陰性，＞4分為陽性[11]。CD146為細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)彌漫性棕黃色顆粒。陽性細(xì)胞比例：0分，陽性細(xì)胞比例＜5%；1分，5%≤陽性細(xì)胞比例＜10%；2分，10%≤陽性細(xì)胞比例＜20%；3分，20%≤陽性細(xì)胞比例＜50%；4分，陽性細(xì)胞比例≥50%。染色強度：未著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分。二者相乘積分≥3分為陽性[12]。

1.4 病歷資料收集

收集入組患者臨床資料，包括性別、年齡、浸潤深度、TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等，由專人統(tǒng)計和錄入，并核查原始數(shù)據(jù)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料以例數(shù)及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；相關(guān)分析采用Spearman相關(guān)性分析；多因素分析采用Logistic多因素回歸分析；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 β-catenin、CD146表達(dá)情況的比較

胃癌組組織中β-catenin、CD146陽性表達(dá)率均明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

表1 兩組組織 β-catenin、CD146表達(dá)情況的比較[n（%）]

2.2 β-catenin、CD146陽性表達(dá)與胃癌的相關(guān)性

Spearman相關(guān)性分析顯示，β-catenin、CD146陽性表達(dá)與胃癌的發(fā)生均呈正相關(guān)（r=0.568、0.587，P＜0.01）。

2.3 不同臨床特征胃癌患者的胃癌組織中β-catenin、CD146表達(dá)情況的比較

不同分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況胃癌患者的胃癌組織中β-catenin陽性表達(dá)率比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=5.334、4.426、4.964，P＜0.05）；不同TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況胃癌患者的胃癌組織中CD146陽性表達(dá)率比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=5.939、5.791，P＜0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征胃癌患者的胃癌組織中 β-catenin、CD146的表達(dá)情況（n=108）

2.4 β-catenin、CD146陽性表達(dá)影響因素的Logistic多因素回歸分析

Logistic多因素回歸分析顯示，低分化，TNM分期為Ⅲ、Ⅳ期，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均是胃癌患者胃癌組織中β-catenin陽性表達(dá)的危險因素（P＜0.05）；TNM分期為Ⅲ、Ⅳ期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均是胃癌患者胃癌組織中CD146陽性表達(dá)的危險因素（P＜0.05）。（表3、表4）

表3 β-catenin陽性表達(dá)影響因素的Logistic多因素回歸分析

表4 CD146陽性表達(dá)影響因素的Logistic多因素回歸分析

3 討論

惡性腫瘤的分子生物學(xué)和基因診斷及治療是目前研究的熱點，并已取得了較大的進展，對臨床腫瘤早期診斷、進展評估和治療意義重大。近年來與胃癌相關(guān)的分子靶向治療研究也取得不少進展，包括表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）通路、抗血管生成、細(xì)胞周期素激酶等，與傳統(tǒng)手術(shù)及放化療相比，分子靶向治療具有分子特異性和高選擇性，能精準(zhǔn)殺傷腫瘤細(xì)胞，減少機體正常組織不必要的損傷[13]。在腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移的過程中，細(xì)胞黏附分子發(fā)揮了重要作用，該類細(xì)胞分子可以使細(xì)胞間及細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)發(fā)生黏附，并參與細(xì)胞識別、細(xì)胞活化、細(xì)胞增殖與分化、細(xì)胞伸展與移動、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等過程。β-catenin基因定位于3p22-3p21.3，含781個氨基酸，是WNT/β-catenin信號通路的關(guān)鍵蛋白，參與由鈣黏蛋白介導(dǎo)的上皮細(xì)胞黏附和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)功能，在正常狀態(tài)下起著維持機體生理平衡的作用，其異常表達(dá)、基因突變、轉(zhuǎn)位與多種腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)[14]。CD146是位于人11號染色體長臂的單拷貝基因，具有細(xì)胞骨架重組、局部粘連聚集、細(xì)胞形態(tài)維持、細(xì)胞游走和增殖調(diào)控的作用，參與腫瘤轉(zhuǎn)移和腫瘤血管的形成，是繼血管內(nèi)皮生長因子之后的又一種腫瘤血管新靶標(biāo)。

本文通過數(shù)據(jù)分析后發(fā)現(xiàn)胃癌組患者胃癌組織中β-catenin、CD146陽性表達(dá)率均明顯高于對照組，Spearman相關(guān)性分析顯示，β-catenin、CD146陽性表達(dá)與胃癌的發(fā)生均呈正相關(guān)，這表明β-catenin、CD146陽性表達(dá)與胃癌的發(fā)生密切相關(guān)。程玉等[15]研究中表明，β-catenin在正常胃組織中表達(dá)定位于細(xì)胞膜，被固定在粘合連接處，與α-catenin相互作用調(diào)節(jié)激動蛋白細(xì)胞骨架，釋放后被破壞復(fù)合體磷酸化降解，但是部分β-catenin可在抗原呈遞細(xì)胞（antigen-presenting cell，APC）的保護下蓄積，出現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核或質(zhì)/核異位表達(dá)，在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)WNT信號能阻礙破壞復(fù)合體的激活導(dǎo)致β-catenin水平升高，到達(dá)細(xì)胞核后與轉(zhuǎn)錄因子T細(xì)胞因子/淋巴增強因子（T cell factor/lymphatic enhancement factor，TCF/LEF）家族結(jié)合驅(qū)動 WNT/β-catenin 信號通過靶基因轉(zhuǎn)錄，該信號通路異?？蓪?dǎo)致腫瘤的發(fā)生。CD146可同時表達(dá)于正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞，在腫瘤組織中參與新生血管的形成，為腫瘤血管形成和轉(zhuǎn)移提供必要的營養(yǎng)，其機制可能與激活基質(zhì)金屬蛋白酶2有關(guān)。胃癌患者胃癌組織中β-catenin陽性表達(dá)與胃癌的分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，CD146陽性表達(dá)與胃癌的TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。Logistic多因素回歸分析顯示，低分化，TNM分期為Ⅲ、Ⅳ期，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均是胃癌患者胃癌組織中β-catenin陽性表達(dá)的危險因素；TNM分期為Ⅲ、Ⅳ期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均是胃癌患者胃癌組織中CD146陽性表達(dá)的危險因素。這與劉婷和齊然[16]、戚紅霞和潘曉燕[17]研究結(jié)果類似。在尹磊等[18]研究中認(rèn)為，WNT/β-catenin信號通路活化可促進腫瘤細(xì)胞增殖和遷移，導(dǎo)致胃癌進展。CD146能促進腫瘤細(xì)胞同型黏附，使腫瘤細(xì)胞聚集成簇，利于腫瘤生長，同時還可與表達(dá)CD146的腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合，使內(nèi)皮細(xì)胞活化，上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞其他黏附分子表達(dá)，產(chǎn)生黏附分子介導(dǎo)的級聯(lián)反應(yīng)，隨后腫瘤細(xì)胞通過損傷的血管外滲進而發(fā)生轉(zhuǎn)移[19]。

綜上所述，β-catenin、CD146陽性表達(dá)與胃癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，可作為胃癌篩查、評估胃癌進展和治療的靶點。