circPUM1通過調(diào)控miR-524-5p表達(dá)對結(jié)腸癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響

李順樂，張 迪，常 帥，李 華，趙 耀，吳 濤，陳 熹

西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院普外科，陜西 西安 710004

結(jié)腸癌是臨床常見惡性腫瘤之一，近年來，我國結(jié)腸癌發(fā)病率與死亡率逐年增加，但結(jié)腸癌的發(fā)生機(jī)制尚未闡明[1]。研究表明，環(huán)狀RNA(circular RNA，circRNA)是一種非編碼RNA，由于其具有閉合環(huán)狀分子導(dǎo)致其具有高度穩(wěn)定性，研究表明，circRNA可通過充當(dāng)微小RNA(microRNA，miRNA)的海綿分子而抑制其表達(dá)從而調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、遷移等生物學(xué)過程[2-3]。但circRNA在結(jié)腸癌中的研究相對較少。環(huán)狀RNA PUM1(circular RNA PUM1，circPUM1)在肺癌、卵巢癌等腫瘤中呈高表達(dá)，并可促進(jìn)腫瘤發(fā)生、發(fā)展[4-5]。StarBase預(yù)測顯示，circPUM1與miR-524-5p存在結(jié)合位點(diǎn)，研究表明miR-524-5p在胃癌細(xì)胞中呈低表達(dá)并可影響細(xì)胞對順鉑的敏感性[6]。相關(guān)報(bào)道指出，miR-524-5p可抑制胃癌細(xì)胞增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡[7]。但circPUM1是否通過靶向調(diào)控miR-524-5p的表達(dá)影響結(jié)腸癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為尚未可知。因此，本研究主要探討circPUM1和miR-524-5p在結(jié)腸癌中的表達(dá)并分析其對細(xì)胞增殖、凋亡、遷移、侵襲的影響，以期為揭示結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑人結(jié)腸癌細(xì)胞株SW620購自美國ATCC公司；杜氏改良培養(yǎng)基(DMEM)、胎牛血清購自美國Gibco公司；Lipofectamine2000購自美國Invitrogen公司；circPUM1小干擾RNA(si-circPUM1)、亂序無意義陰性序列(si-NC)購自上海漢恒生物科技有限公司；circPUM1過表達(dá)質(zhì)粒(pcDNA-circPUM1)和對照質(zhì)粒(pcDNA)購自廣州吉賽生物科技股份有限公司；miR-524-5p寡核苷酸模擬物(miR-524-5p mimics)及陰性對照mimic NC序列(miR-NC)、miR-524-5p特異性寡核苷酸抑制劑(anti-miR-524-5p)及陰性對照(anti-miR-NC)購自廣州銳博生物科技有限公司；Trizol、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、熒光定量PCR試劑盒購自北京天根生化科技有限公司；甲基噻唑基四唑(methylthiazolyl tetrazolium，MTT)購自北京富龍康泰生物技術(shù)有限公司；細(xì)胞凋亡檢測試劑盒、RIPA裂解液、二喹啉甲酸(bicinchoninicacid，BCA)蛋白定量檢測試劑盒購自北京全式金生物技術(shù)有限公司；Transwell小室購自北京優(yōu)尼康生物科技有限公司；Matrigel基質(zhì)膠購自美國BD公司；兔抗人細(xì)胞周期蛋白1(Cyclin D1)、p21、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2，MMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9，MMP-9)抗體購自美國CST公司；兔抗人B淋巴細(xì)胞瘤-2(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)、B淋巴細(xì)胞瘤-2相關(guān)蛋白(Bcl-2-associated X protein，Bax)抗體購自美國Santa Cruz公司；辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的山羊抗兔二抗購自美國Abcam公司。

結(jié)腸癌組織及癌旁組織標(biāo)本來源：收集2017年10月至2018年12月本院收治的25例結(jié)腸癌患者為研究對象，所有患者均經(jīng)病理證實(shí)為結(jié)腸癌，男18例，女7例，年齡(63.57±6.59)歲(50～72歲)。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤患者；術(shù)前接受放療或化療患者。術(shù)中切除結(jié)腸癌組織及癌旁組織(≥5 cm)，置于-80 ℃超低溫冰箱保存。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及分組：結(jié)腸癌細(xì)胞SW620置于含質(zhì)量濃度為100 g/L胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：37 ℃、體積分?jǐn)?shù)為5%的CO2，待細(xì)胞生長至80%融合度時(shí)進(jìn)行傳代培養(yǎng)。取對數(shù)期SW620細(xì)胞，質(zhì)量濃度為2.5 g/L胰蛋白酶消化，制備細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度為1×104個/ml，接種于6孔板(100 μl/孔)，待細(xì)胞生長至80%融合度時(shí)將培養(yǎng)基更換為不含血清的培養(yǎng)基，參照Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑說明書分別將si-NC、si-circPUM1、miR-NC、miR-524-5p mimics、si-circPUM1與anti-miR-NC、si-circPUM1與anti-miR-524-5p轉(zhuǎn)染至SW620細(xì)胞，分別記作si-NC組、si-circPUM1組、miR-NC組、miR-524-5p組、si-circPUM1+anti-miR-NC組、si-circPUM1+anti-miR-524-5p組。轉(zhuǎn)染6 h后將培養(yǎng)基更換為含質(zhì)量濃度為100 g/L胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48 h后收集細(xì)胞。

1.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)檢測circPUM1、miR-524-5p的表達(dá)水平：采用Trizol法提取結(jié)腸癌組織、癌旁組織及各組SW620細(xì)胞中的總RNA，應(yīng)用Nanodrop2000c超微量分光光度計(jì)檢測RNA濃度。按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書操作將總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。circPUM1正向引物：5′-ATGGGAGCAGCTCTTTGACT-3′，反向引物：5′-GACTCTCTCCTTGTGGCACT-3′；miR-524-5p正向引物：5′-CCAAAGGAAAAGAAGGCGCT-3′，反向引物：5′-AGCATCGATCCAGCCTAGTC-3′；6正向引物：5′-ATTGGAACGATACAGAGAAGATT-3′， 反向引物：5′-GGAA-CGCTTCACGAATTTG-3′；GAPDH正向引物：5′-AACGGATTTGGTCGTATTG-3′，反向引物：5′-GGAAGATGGTGATGGGATT-3′，引物由上海生工生物工程股份有限公司設(shè)計(jì)合成。按照熒光定量PCR試劑盒說明書進(jìn)行qRT-PCR檢測，反應(yīng)條件：95 ℃ 2 min，95 ℃ 15 s，65 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，共40次循環(huán)。circPUM1以GAPDH為內(nèi)參，miR-524-5p以U6為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計(jì)算circPUM1、miR-524-5p相對表達(dá)量。

1.2.3 MTT檢測細(xì)胞增殖：收集各組對數(shù)期SW620細(xì)胞接種于96孔板(3×104個/孔)，每組設(shè)置3個復(fù)孔，轉(zhuǎn)染24、48、72 h時(shí)向每孔加入20 μl MTT溶液，37 ℃培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)4 h，經(jīng)1 300 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min，棄上清，向每孔加入150 μl二甲基亞砜(dimethylsulfoxide，DMSO)，室溫避光孵育5 min，應(yīng)用酶標(biāo)儀檢測各孔吸光度值(OD490 nm)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率：收集各組對數(shù)期SW620細(xì)胞，加入預(yù)冷PBS，4 ℃條件下經(jīng)1 000 r/min離心6 min(離心半徑10 cm)，棄上清，加入預(yù)冷PBS，再次離心，棄上清，加入500 μl結(jié)合緩沖液懸浮細(xì)胞，依次加入5 μl 膜聯(lián)蛋白V(Annexin V)-異硫氰酸熒光素(FITC)與5 μl碘化丙啶(PI)，室溫振蕩孵育10 min，于1 h內(nèi)置于FACS Calibur流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞凋亡率。

1.2.5 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移、侵襲：細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)：收集各組對數(shù)期SW620細(xì)胞加入Transwell小室的上室(3×104個/孔)，含質(zhì)量濃度為100 g/L胎牛血清的培養(yǎng)液加入Transwell小室的下室(600 μl/孔)，37 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h，PBS洗滌，采用多聚甲醛固定20 min，PBS洗滌，0.1%結(jié)晶紫染液染色10 min，顯微鏡下觀察遷移細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)：預(yù)冷培養(yǎng)液按照1∶8比例稀釋Matrigel基質(zhì)膠，加入Transwell小室的上室(40 μl/孔)，37 ℃培養(yǎng)箱孵育5 h，取各組對數(shù)期SW620細(xì)胞加入Transwell小室的上室(3×104個/孔)，后續(xù)實(shí)驗(yàn)步驟同細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)，顯微鏡下觀察侵襲細(xì)胞數(shù)。

1.2.6 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測circPUM1的靶基因：StarBase預(yù)測顯示，circPUM1與miR-524-5p存在結(jié)合位點(diǎn)，將含有結(jié)合位點(diǎn)的片段克隆至pmirGLO載體得到野生型載體WT-circPUM1，采用基因定點(diǎn)突變技術(shù)突變結(jié)合位點(diǎn)構(gòu)建突變型載體MUT-circPUM1，分別將WT-circPUM1、MUT-circPUM1與miR-NC、miR-524-5p mimics共轉(zhuǎn)染至SW620細(xì)胞，轉(zhuǎn)染48 h，收集細(xì)胞，采用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測系統(tǒng)檢測各組細(xì)胞熒光素酶活性。分別將pcDNA、pcDNA-circPUM1、si-NC、si-circPUM1轉(zhuǎn)染至SW620細(xì)胞，qRT-PCR檢測各組細(xì)胞中miR-524-5p的表達(dá)水平。

1.2.7 蛋白免疫印跡(Western blotting)檢測Cyclin D1、p21、MMP-2、MMP-9、Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)：收集各組對數(shù)期SW620細(xì)胞，加入適量RIPA裂解液提取細(xì)胞總蛋白，根據(jù)BCA試劑盒說明書測定蛋白濃度。采用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分離蛋白，將分離的蛋白凝膠轉(zhuǎn)移至PVDF膜，質(zhì)量濃度為50 g/L脫脂奶粉封閉2 h，加入一抗稀釋液(1∶1 000)，4 ℃孵育過夜，TBST洗滌，孵育二抗稀釋液(1∶2 000)，室溫孵育1 h，暗室內(nèi)曝光顯影，應(yīng)用ImageJ軟件分析各條帶灰度值。

2 結(jié)果

2.1 circPUM1和miR-524-5p在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)與癌旁組織相比，結(jié)腸癌組織circPUM1的表達(dá)顯著升高(P<0.05)，miR-524-5p的表達(dá)顯著降低(P<0.05)(見表1)。

表1 circPUM1和miR-524-5p在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)Tab 1 Expressions of circPUM1 and miR-524-5p in colon

2.2 干擾circPUM1表達(dá)對結(jié)腸癌SW620細(xì)胞增殖的影響與si-NC組相比，si-circPUM1組細(xì)胞活力顯著降低(P<0.05)，Cyclin D1蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.05)，p21蛋白表達(dá)顯著升高(P<0.05)(見圖1、表2)。

圖1 增殖相關(guān)蛋白表達(dá)Fig 1 The expression of proliferation-related protein

表2 干擾circPUM1表達(dá)對結(jié)腸癌SW620細(xì)胞增殖的影響Tab 2 The effect of interference with circPUM1 expression on the proliferation of colon cancer SW620 cells n=9)

2.3 干擾circPUM1表達(dá)對結(jié)腸癌SW620細(xì)胞遷移、侵襲的影響與si-NC組相比，si-circPUM1組遷移細(xì)胞數(shù)和侵襲細(xì)胞數(shù)顯著減少(P<0.05)，MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.05)(見圖2、表3)。

圖2 干擾circPUM1表達(dá)對結(jié)腸癌SW620細(xì)胞遷移、侵襲的影響 A：結(jié)腸癌SW620細(xì)胞的遷移、侵襲(200×)；B：遷移侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)Fig 2 The effect of interference with circPUM1 expression on migration and invasion of colon cancer SW620 cells A: migration and invasion of colon cancer SW620 cells(200×); B: expression of migration and invasion-related proteins

表3 干擾circPUM1表達(dá)對結(jié)腸癌SW620細(xì)胞遷移、侵襲的影響Tab 3 The effect of interference with circPUM1 expression on the migration and invasion of colon cancer SW620 cells n=9)

2.4 干擾circPUM1表達(dá)對結(jié)腸癌SW620細(xì)胞凋亡的影響與si-NC組相比，si-circPUM1組細(xì)胞凋亡率顯著升高(P<0.05)，Bcl-2蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.05)，Bax蛋白表達(dá)顯著升高(P<0.05)(見圖3、表4)。

圖3 干擾circPUM1表達(dá)對結(jié)腸癌SW620細(xì)胞凋亡的影響 A：細(xì)胞凋亡流式圖；B：凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)Fig 3 The effect of interference with circPUM1 expression on the apoptosis of colon cancer SW620 cells A: apoptosis flow cytometry; B: expression of apoptosis-related protein

表4 干擾circPUM1表達(dá)對結(jié)腸癌SW620細(xì)胞凋亡的影響Tab 4 The effect of interference with circPUM1 expression on the apoptosis of colon cancer SW620 cells n=9)

2.5 miR-524-5p過表達(dá)對結(jié)腸癌SW620細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響與miR-NC組相比，miR-524-5p組48 h、72 h細(xì)胞活力顯著降低(P<0.05)，細(xì)胞凋亡率顯著升高(P<0.05)，遷移細(xì)胞數(shù)和侵襲細(xì)胞數(shù)顯著減少(P<0.05)(見圖4、表5)。Western blotting檢測結(jié)果顯示，與miR-NC組相比，miR-524-5p組細(xì)胞中Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.05)，p21、Bax蛋白表達(dá)顯著升高(P<0.05)(見圖5、表6)。

圖4 miR-524-5p過表達(dá)對結(jié)腸癌SW620細(xì)胞遷移、侵襲和凋亡的影響 A：結(jié)腸癌SW620細(xì)胞的遷移、侵襲(200×)；B：細(xì)胞凋亡流式圖Fig 4 The effect of miR-524-5p overexpression on the migration, invasion and apoptosis of colon cancer SW620 cells A: migration and invasion of colon cancer SW620 cells (200×); B: flow cytometric diagram of cell apoptosis

表5 miR-524-5p過表達(dá)對結(jié)腸癌SW620細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和凋亡的影響Tab 5 Effects of miR-524-5p overexpression on the proliferation, migration, invasion and apoptosis of colon cancer SW620 cells

圖5 蛋白電泳圖Fig 5 Protein electrophoresis diagram

表6 miR-524-5p過表達(dá)對結(jié)腸癌SW620細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響Tab 6 The effect of miR-524-5p overexpression on the proliferation, migration, invasion and apoptosis-related protein expression of colon cancer SW620 cells

2.6 circPUM1靶向調(diào)控miR-524-5p的表達(dá)StarBase預(yù)測顯示，circPUM1的序列中含有與miR-524-5p互補(bǔ)的核苷酸序列(見圖6)。雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染野生型載體WT-circPUM1的細(xì)胞中，miR-524-5p組熒光素酶活性顯著低于miR-NC組(P<0.05)；轉(zhuǎn)染突變型載體MUT-circPUM1的細(xì)胞中，miR-524-5p組熒光素酶活性與miR-NC組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見表7)。qRT-PCR檢測結(jié)果顯示，與pcDNA組相比，pcDNA-circPUM1組細(xì)胞中miR-524-5p的表達(dá)水平顯著降低(P<0.05)；與si-NC組相比，si-circPUM1組細(xì)胞中miR-524-5p的表達(dá)水平顯著升高(P<0.05)(見表8)。

圖6 circPUM1的序列中含有與miR-524-5p互補(bǔ)的核苷酸序列Fig 6 The sequence of circPUM1 contained a nucleotide sequence complementary to miR-524-5p

表7 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)Tab 7 Dual-luciferase reporter assay n=9)

表8 circPUM1調(diào)控miR-524-5p的表達(dá)Tab 8 circPUM1 regulated the expression of miR-524-5p

2.7 抑制miR-524-5p表達(dá)逆轉(zhuǎn)了干擾circPUM1表達(dá)對結(jié)腸癌SW620細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的作用與si-circPUM1+anti-miR-NC組相比，si-circPUM1+anti-miR-524-5p組細(xì)胞活力顯著升高(P<0.05)，細(xì)胞凋亡率顯著降低(P<0.05)，遷移細(xì)胞數(shù)和侵襲細(xì)胞數(shù)顯著增加(P<0.05)，Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白水平顯著升高(P<0.05)，p21、Bax蛋白水平顯著降低(P<0.05)(見圖7～8、表9～10)。

圖7 抑制miR-524-5p表達(dá)逆轉(zhuǎn)了干擾circPUM1表達(dá)對結(jié)腸癌SW620細(xì)胞遷移、侵襲和凋亡的作用 A：結(jié)腸癌SW620細(xì)胞的遷移侵襲(200×)；B：細(xì)胞凋亡流式圖

of cell apoptosis

圖8 蛋白電泳圖Fig 8 Protein electrophoresis diagram

表10 抑制miR-524-5p表達(dá)逆轉(zhuǎn)了干擾circPUM1表達(dá)對結(jié)腸癌SW620細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的作用Tab 10 Inhibition of miR-524-5p expression reversed the effect of interfering with circPUM1 expression on the proliferation, migration, invasion and apoptosis-related protein expression of colon cancer SW620 cells n=9)

3 討論

circRNA在多種腫瘤中表達(dá)量異常且與腫瘤細(xì)胞惡性生物學(xué)行為有關(guān)，其基因序列中含有miRNA的反應(yīng)元件，并可通過堿基互補(bǔ)配對原則吸附相關(guān)miRNA從而調(diào)控下游基因表達(dá)進(jìn)而參與結(jié)腸癌等多種腫瘤發(fā)生過程[8-9]。既往研究顯示，circRNA在結(jié)腸癌組織或細(xì)胞中異常表達(dá)并可能發(fā)揮抑癌作用或促癌作用[10-11]。但仍有部分circRNA在結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展過程中的調(diào)控機(jī)制尚未闡明。因此，本研究積極探尋新型circRNA并分析其對結(jié)腸癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響，為結(jié)腸癌的靶向治療提供潛在靶點(diǎn)。

circPUM1在肺腺癌中表達(dá)水平升高，并可通過競爭性結(jié)合miR-326從而促進(jìn)肺腺癌發(fā)生、發(fā)展[12]。但circPUM1對結(jié)腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響尚未可知。本研究結(jié)果顯示，circPUM1在結(jié)腸癌組織中呈高表達(dá)，與上述研究結(jié)果相似。提示circPUM1在結(jié)腸癌發(fā)生過程中可能發(fā)揮癌基因作用。本研究通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明，干擾circPUM1表達(dá)可明顯抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖，提示circPUM1表達(dá)量升高可促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖。研究表明，Cyclin D1在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)并可促進(jìn)細(xì)胞周期由G1期進(jìn)入S期，促進(jìn)細(xì)胞增殖，而p21可抑制細(xì)胞周期進(jìn)程從而誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯于G1期，抑制細(xì)胞增殖[13]。本研究結(jié)果顯示，干擾circPUM1表達(dá)可明顯抑制Cyclin D1表達(dá)，促進(jìn)p21表達(dá)，提示干擾circPUM1表達(dá)可能通過調(diào)控細(xì)胞周期相關(guān)蛋白表達(dá)從而抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖?；|(zhì)金屬蛋白酶在腫瘤細(xì)胞遷移、侵襲過程中發(fā)揮重要作用，研究表明MMP-2、MMP-9屬于基質(zhì)金屬蛋白酶類，其在腫瘤中表達(dá)量升高并可降解胞外基質(zhì)沉積從而促進(jìn)細(xì)胞遷移及侵襲[14]。本研究結(jié)果顯示，干擾circPUM1表達(dá)后結(jié)腸癌細(xì)胞的遷移、侵襲能力明顯降低，并可抑制MMP-2、MMP-9表達(dá)，提示干擾circPUM1表達(dá)可能通過下調(diào)MMP-2、MMP-9表達(dá)從而抑制結(jié)腸癌細(xì)胞遷移、侵襲。細(xì)胞凋亡在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，研究表明，Bcl-2屬于抗細(xì)胞凋亡蛋白，Bax屬于促細(xì)胞凋亡蛋白，Bax表達(dá)量升高可促進(jìn)細(xì)胞色素C轉(zhuǎn)移至線粒體從而激活caspase級聯(lián)反應(yīng)最終誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[15]。本研究結(jié)果顯示，干擾circPUM1表達(dá)后，結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡率顯著增加，Bax表達(dá)量升高，Bcl-2表達(dá)量降低，提示干擾circPUM1表達(dá)可能通過調(diào)控線粒體途徑從而促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡。

miR-524-5p可抑制胃癌細(xì)胞增殖及侵襲[16]。研究表明，lncRNA TUG1可通過競爭性結(jié)合miR-524-5p從而促進(jìn)口腔鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生及發(fā)展[17]。相關(guān)報(bào)道指出，miR-524-5p在甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)，上調(diào)miR-524-5p表達(dá)可抑制腫瘤發(fā)展進(jìn)程[18]。與上述研究結(jié)果相似，本研究結(jié)果顯示，miR-524-5p在結(jié)腸癌組織中表達(dá)量降低，進(jìn)一步研究顯示，miR-524-5p過表達(dá)可明顯抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲，并可促進(jìn)細(xì)胞凋亡，提示miR-524-5p在結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展過程中可能發(fā)揮抑癌基因作用。為驗(yàn)證miR-524-5p調(diào)控結(jié)腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的機(jī)制，通過Western blotting實(shí)驗(yàn)分析顯示，Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2的表達(dá)量明顯降低，p21、Bax的表達(dá)量明顯升高，提示miR-524-5p過表達(dá)可通過調(diào)控細(xì)胞增殖、凋亡、遷移、侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)從而發(fā)揮作用。本研究結(jié)果顯示，circPUM1可結(jié)合miR-524-5p從而調(diào)控其表達(dá)，進(jìn)一步分析顯示，抑制miR-524-5p表達(dá)可明顯減弱干擾circPUM1表達(dá)對結(jié)腸癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的作用，提示干擾circPUM1表達(dá)可通過上調(diào)miR-524-5p表達(dá)從而抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲，并可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

綜上所述，circPUM1在結(jié)腸癌中表達(dá)量升高，miR-524-5p在結(jié)腸癌中表達(dá)量降低，干擾circPUM1表達(dá)或miR-524-5p過表達(dá)可明顯降低結(jié)腸癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲能力，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，本研究證實(shí)circPUM1可競爭性吸附miR-524-5p從而負(fù)向調(diào)控miR-524-5p的表達(dá)，circPUM1可作為結(jié)腸癌診斷及治療的分子靶標(biāo)。