氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定曼陀羅藥酒中莨菪堿的含量

張秋萍 王春民 馬曉艷

摘 要：本試驗(yàn)采用氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定曼陀羅藥酒中莨菪堿的含量，樣品經(jīng)濃度為2mol/L的鹽酸溶液提取后超聲處理，上清液以濃氨水調(diào)至pH=9后用三氯甲烷液-液萃取后氮吹至近干，殘?jiān)萌燃淄槿芙?，然后用氣質(zhì)聯(lián)用儀分離測(cè)定;采用電子電離源（EI）模式電離，單離子選擇（SIR）監(jiān)測(cè)方式檢測(cè)。結(jié)果顯示，該方法的線性范圍為100～1000μg/L，線性回歸方程為Y=85.6X-4.638，r=0.999，樣品最低定量濃度（LOQ）為0.01mg/kg，在0.05～5.0mg/kg添加水平下回收率為82%～94%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為4.9%～7.4%。故得出結(jié)論，本方法準(zhǔn)確度高且重復(fù)性好，能夠用于曼陀羅藥酒中莨菪堿含量的快速測(cè)定。

關(guān)鍵詞：氣相色譜質(zhì)譜儀? 莨菪堿? 曼陀羅

曼陀羅又名洋金花、風(fēng)茄兒，系一年生茄科草本植物，我國(guó)各省區(qū)均產(chǎn)，其根葉果實(shí)皆可入藥。曼陀羅全株都有毒，且以果實(shí)毒性最大（主要成分為莨菪堿、東莨菪堿等），中毒的臨床表現(xiàn)類似阿托品中毒。曼陀羅中毒的潛伏期短則20分鐘、長(zhǎng)則3小時(shí)，多為1小時(shí)左右病發(fā)，癥狀先有唇干口渴、嗓子發(fā)苦、吞咽困難、聲音嘶啞、皮膚干燥潮紅、發(fā)熱等，繼而有頭暈、瞳孔散大、視力模糊等，甚至出現(xiàn)幻聽(tīng)幻視，嚴(yán)重者心率加快、躁動(dòng)不安、血壓不穩(wěn)、驚厥、昏迷，更有甚者會(huì)因呼吸衰竭而死亡[1]。

現(xiàn)行藥典規(guī)定了莨菪堿的液相色譜法（HPLC）[2]，但該方法僅適用于藥材，尚不能滿足食品基質(zhì)中莨菪堿的檢測(cè)。本文采用氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定曼陀羅藥酒中莨菪堿的含量，以期開(kāi)發(fā)誤食曼陀羅藥酒引起中毒的快速定性定量檢測(cè)方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

氣相色譜質(zhì)譜儀：TRACE GC ULTRA/ISQ，Thermo公司，臺(tái)式離心機(jī)。

1.1.2 試劑

濃氨水，分析純;鹽酸，優(yōu)級(jí)純;甲醇，色譜純;三氯甲烷，色譜純。

1.1.3 標(biāo)準(zhǔn)品

莨菪堿，莨菪堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1000mg/L）：精確稱取10.0mg（精確到0.1mg）莨菪堿標(biāo)準(zhǔn)品置于10mL容量瓶中，用甲醇作溶劑溶解，定容，混勻，于4℃避光保存。

1.2 方法

1.2.1 提取與凈化

稱取1g（精確至0.01g）樣品試樣置于50mL離心管中，加入濃度為2mol/L的鹽酸溶液10mL，超聲處理30min，冷卻，高速離心，倒出上清液。用濃度為2mol/L的鹽酸溶液10mL洗滌殘?jiān)?，高速離心，合并上清液。用濃氨水將上清液調(diào)至pH=9，倒入分液漏斗，用三氯甲烷振蕩提取3次，每次10mL，合并三氯甲烷并氮吹至近干，殘?jiān)萌燃淄槿芙獠⒍ㄈ?，然后上機(jī)測(cè)定。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)條件

色譜柱：HP-5MS柱，60m×0.250mm×0.25Micro。

柱溫：80℃、保持1min，以20℃/min的速度升到220℃、保持1min，然后以10℃/min的速度升到270℃、保持10min，總體運(yùn)行時(shí)間為24分鐘。進(jìn)樣口溫度：250℃;流量：1.0/min;進(jìn)樣量：1.0μL。

質(zhì)譜條件：Full scan質(zhì)譜掃描范圍：50～650m/z，離子源溫度：280℃，接口溫度：250℃，SIM模式：定量離子124m/z;定性離子82，94m/z。

2 結(jié)果

2.1 分析方法

目前，測(cè)定曼陀羅中莨菪堿含量的方法主要有高效液相色譜法、薄層色譜法、氣相色譜法、毛細(xì)管電泳法、離子對(duì)色譜法等。近年來(lái)，醫(yī)藥行業(yè)主要采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定曼陀中莨菪堿的含量[3]，但是該方法靈敏度較差，對(duì)流動(dòng)相的要求比較繁瑣。本研究建立GC-MS方法用于測(cè)定曼陀羅藥酒中莨菪堿的含量。由于莨菪堿為典型的生物堿類，如按照傳統(tǒng)生物堿的提取方法，色譜圖會(huì)出現(xiàn)較多雜峰且分離度并不理想。本實(shí)驗(yàn)采用酸提取，上清液氨化后進(jìn)行三氯甲烷液-液萃取，不僅提取回收率高，色譜圖也比較簡(jiǎn)單，故該方法適合用于曼陀羅藥酒中莨菪堿的提取與分離。

2.2 方法學(xué)評(píng)價(jià)

2.2.1 線性范圍及檢出限實(shí)驗(yàn)

將莨菪堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋得到濃度分別為100、250、500、750、1000μg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液，濃度由低到高進(jìn)樣檢測(cè)，以定量子離子峰面積-濃度作圖，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程，外標(biāo)法定量。待測(cè)樣液中莨菪堿的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，超過(guò)線性范圍則應(yīng)稀釋后再進(jìn)樣分析。由此得出結(jié)論，該方法的線性范圍為100～1000μg/L，線性回歸方程為Y=85.6X-4.638，r=0.999，以信噪比（S/N）為3時(shí)對(duì)應(yīng)的含量作方法的檢出限（LOD），以S/N=10對(duì)應(yīng)的含量作方法的定量限（LOQ）為0.01mg/kg。在50～5000μg/kg添加水平下回收率為82%～94%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為4.9%～7.4%。

2.3 樣品測(cè)定結(jié)果

某地發(fā)生一起5人突發(fā)中毒事件，主要癥狀均為譫妄、狂躁、惡心嘔吐等，部分中毒患者處于昏迷和意識(shí)不清狀態(tài)。食物暴露調(diào)查顯示，5人與其他參加喪宴人員的食譜均相同，僅在就餐時(shí)飲用了存放在2樓的自制藥酒。據(jù)觀察，泡藥酒的草藥中有些與曼陀羅的果實(shí)十分相似，流調(diào)人員從后院菜地收割的曼陀羅植株中采集2枚果實(shí)，從剩余的藥酒罐中采集200mL左右的藥酒，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)發(fā)現(xiàn)果實(shí)中的莨菪堿含量為650mg/kg;藥酒中的莨菪堿含量為300mg/L。依據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，結(jié)合中毒患者的臨床表現(xiàn)與流行病學(xué)調(diào)查以及檢驗(yàn)結(jié)果，判斷該起中毒事件是一起喪宴中誤服藥酒導(dǎo)致的5人曼陀羅（莨菪堿）中毒事件，陽(yáng)性樣品圖譜見(jiàn)圖1。

3 結(jié)論

本文采用氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定曼陀羅藥酒中莨菪堿的含量，方法的準(zhǔn)確度及精密度均符合分析要求，可適用于固體、液體食品中莨菪堿的定性確證與定量測(cè)定。

參考文獻(xiàn)：

[1] 陳靜，張鳳，張銳，李卿，等.LC-MS/MS法測(cè)定毛曼陀羅中莨菪堿、東莨菪堿和山莨菪堿的含量[J].井岡山大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）2019，40（4）：92-95.

[2] 崔雅慧，金志國(guó)等.高效液相色譜法測(cè)定止喘靈注射液中鹽酸麻黃堿、丁溴東莨菪堿和苦杏仁苷含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2020，29（13）：71-73.

[3] 李紅紅，陳朋朋，付傳香，吳澤宇，惠愛(ài)玲，許坤，張文成，等.HPLC法同步測(cè)定洋金花中東莨菪堿和莨菪堿的含量[J].安徽化工，2018，44（5）：92-94.

作者簡(jiǎn)介：張秋萍（1979.10-），女，漢族，學(xué)士學(xué)位，高級(jí)工程師，主要從事食品理化分析工作。