肝素結合蛋白在腦膜炎患者中的表達及其臨床意義

劉美玲，李瑩瑩，鄭鎧軍，馮淑芳，曹建偉 （廣東中山市人民醫(yī)院普通兒科，廣東中山 528400）

腦膜炎是最為常見的感染性中樞神經系統(tǒng)綜合癥，兒童以急性細菌性腦膜炎和病毒性腦膜炎較為常見[1-2]。其中，急性細菌性腦膜炎是導致兒童感染相關性死亡的重要病因之一[3]，在抗生素和重癥監(jiān)護干預下，患兒的病死率仍可達10%，而幸存者出現永久性神經后遺癥的概率高達30%[4]。病毒性腦膜炎和細菌性腦膜炎在急性期的臨床癥狀具有相似性，給疾病的鑒別帶來一定的困難[5]。肝素結合蛋白(HBP)又稱氮唑蛋白或陽離子抗菌蛋白，是人類中性粒細胞先天防御的一部分[6-7]。我們觀察了HBP 在細菌性和病毒性腦膜炎中的表達差異，以期為疾病的早期診斷和鑒別提供輔助依據。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選擇我院2018 年5 月至2019 年5 月收治的急性細菌性腦膜炎患兒27 例、毒性腦膜炎患兒22 病，以及20 例需取腦脊液檢查的非腦膜炎疾病患兒作對照。細菌性腦膜炎患者中男16 例，女11 例，平均年齡(9.1±3.0)歲；病毒性腦膜炎患者男10 例，女12 例，平均年齡(8.2±2.8)歲；非腦膜炎疾病患者男10 例，女10 例，平均年齡(8.6±3.2)歲。3 組間性別、年齡差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。腦膜炎的診斷參照《諸福棠實用兒科學》第8 版腦膜炎診斷標準[8]。排除:(1)顱腦外傷、醫(yī)源性等因素造成的中樞神經系統(tǒng)感染者；(2)合并中樞神經系統(tǒng)腫瘤性疾病者；(3)合并免疫系統(tǒng)缺陷型疾病者；(4)合并血液系統(tǒng)疾病者；(5)入院前已經接受抗生素治療的患者；(6)隨訪期間自動要求退出的患者。本研究已通過醫(yī)學倫理委員會審查。

1.2 方法

腦膜炎患兒在入院后第1 天(抗生素治療前)收集腦脊液5 mL，外周血5 mL,常溫靜置30 min，12 000 r/min離心10 min，收集上清液，樣本于-80 ℃冰箱中保存。采用酶聯免疫吸附法對樣本中的HBP 進行定量檢測，人HBPELISA 試劑盒(#ZN2034，百奧萊博生物)檢測范圍為62.5～4 000.0 μg/L。測定步驟參照試劑盒說明書進行。

1.3 研究指標

1.3.1 HBP 的表達 比較血清和腦脊液中HBP 在各組研究對象間的水平差異，以及評估血清和腦脊液中HBP 的相關關系。

1.3.2 疾病診斷的效率評估 將血清和腦脊液中HBP 水平作為患者早期診斷的因素，繪制受試者工作特征曲線(ROC 曲線)，分析上述指標對疾病早期診斷的價值。診斷金標準為病理學診斷(腦脊液培養(yǎng))。

1.4 統(tǒng)計學處理

2 結果

2.1 血清和腦脊液中HBP 表達水平的變化及相關性

細菌性腦膜炎患者血清、腦脊液的HBP 水平顯著高于病毒性腦膜炎和非腦膜炎患者，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，見表1。細菌性腦膜炎患者血清HBP的表達與腦脊液中HBP 的表達呈正相關(r=0.468，P＜0.05)，病毒性腦膜炎患者血清HBP 的表達與腦脊液中HBP 的表達無明顯相關性(r=0.264，P＞0.05)。

表1 血清和腦脊液中HBP 的表達水平 (±s，μg/L)

表1 血清和腦脊液中HBP 的表達水平 (±s，μg/L)

與非腦膜炎疾病比較:aP＜0.01；與病毒性腦膜炎比較:bP＜0.01

2.2 HBP 對腦膜炎早期診斷和鑒別診斷的效果

血清、腦脊液HBP 用于細菌性腦膜炎早期診斷的ROC 曲線下面積分別為0.933 和0.884，切割值分別為118.13、99.89 μg/L，靈敏度分別為0.943 和0.875，特異度分別為0.797 和0.764；而用于病毒性腦膜炎早期診斷的ROC 曲線下面積分別為0.463 和0.461，診斷價值較差。見圖1。

圖1 血清、腦脊液HBP 用于腦膜炎早期診斷和鑒別的ROC 曲線

3 討論

腦膜炎是兒童常見的重癥感染性疾病，以病毒性和急性細菌性腦膜炎較為常見[9]。疾病早期臨床癥狀的相似性導致鑒別診斷困難[5]。目前，對疾病早期診斷和鑒別的輔助生化指標較多，如腦脊液乳酸、腦脊液蛋白、腦脊液葡萄糖、腦脊液白細胞、外周血降鈣素原、腺苷脫氨酶及C 反應蛋白等[10-14]，這為臨床醫(yī)師早期診斷和鑒別腦膜炎的病理類型提供了有力的幫助。

二代測序等檢驗技術的進步讓我們發(fā)現了越來越多的生化指標可用于腦膜炎的早期診斷和鑒別，HBP 就是其中的一個敏感指標。Linder 等[15]的研究指出，與非感染性危重癥患者的血HBP 水平及其他指標相比，嚴重膿毒癥和膿毒癥休克患者血HBP水平升高具有顯著的預測價值，80%的患者HBP水平升高(30 mg/L)，59%的患者降鈣素原水平升高(0.5 mg/L)，10.5 h 后發(fā)展為嚴重膿毒癥。Bentzer等[16-18]亦發(fā)現，HBP 可作為急性細菌性腦膜炎的一個預測指標，其在急性化膿性腦膜炎患兒腦脊液中的表達水平急劇升高，且作為化膿性腦膜炎診斷指標的敏感度和特異度均接近100%。我們的研究發(fā)現，HBP在急性細菌性腦膜炎中的增高水平相對病毒性腦膜炎更為顯著，與黃彩芝等[18]研究相似。Kandil 等[17]結果顯示細菌性腦膜炎患兒中HBP 升高近200 倍，但黃彩芝等[18]研究指出，化膿性腦膜炎患者HBP 增高倍數僅約10 倍。目前對這一數據差異的原因我們尚不明確，分析可能與患兒采樣時的病情程度有關。值得注意的是，雖然細菌性和病毒性腦膜炎患者的HBP水平同樣增高，但僅細菌性腦膜炎患者血清HBP 的表達與腦脊液中HBP 的表達呈正相關，而病毒性腦膜炎患者血清HBP 的表達與腦脊液中HBP 的表達無明顯相關性。因此我們認為腦脊液中HBP 的升高很可能是由炎癥瀑布引發(fā)循環(huán)白細胞的遷移所造成。本研究還發(fā)現，血清、腦脊液HBP 用于急性細菌性腦膜炎早期診斷的ROC 曲線下面積高達0.933 和0.884，而用于病毒性腦膜炎早期診斷的ROC 曲線下面積分別為0.463 和0.461，提示HBP 是細菌性腦膜炎早期診斷的良好指標，而其對病毒性腦膜炎的早期診斷意義不大。