傳統(tǒng)及趁鮮加工工藝對(duì)桔梗飲片質(zhì)量的影響

王 斌，梁偉龍，林欽賢*，郭長(zhǎng)達(dá)，郝建新

(1.廣州市香雪制藥股份有限公司，廣東 廣州 510663；2.亳州市滬譙藥業(yè)有限公司，安徽 亳州 236800；3.寧夏隆德縣六盤(pán)山中藥資源開(kāi)發(fā)有限公司，寧夏 固原 756300)

桔梗為桔?？浦参锝酃latycodongrandiflorum(Jacq.)A.DC.的干燥根[1]，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》[2]，列為下品。桔梗在我國(guó)大部分地區(qū)均有分布，主要分布于安徽、河南、湖北、云南、吉林、四川等地[3]，其味苦、辛，性平，具有宣肺、利咽、祛痰、排膿的功效，主要有效成分為三萜皂苷[4-5]，現(xiàn)代藥理研究表明桔梗皂苷D為主要的鎮(zhèn)咳成分[6]。

目前桔梗飲片仍沿用傳統(tǒng)加工方式，即鮮品干燥成藥材后，再軟化切制成飲片。該加工模式耗時(shí)耗力，且在軟化過(guò)程中容易導(dǎo)致有效成分的損失，影響飲片的質(zhì)量。2019年7月26日，河北省藥品監(jiān)督管理局印發(fā)《關(guān)于支持醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)高質(zhì)量發(fā)展的若干政策措施》提到“允許企業(yè)采購(gòu)趁鮮切制的中藥材”[7]，但關(guān)于桔梗趁鮮切制加工工藝的研究較少，難以保證中藥飲片質(zhì)量安全穩(wěn)定，本文就桔梗趁鮮加工工藝進(jìn)行研究，以桔梗皂苷D、浸出物含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，比較傳統(tǒng)加工工藝及趁鮮加工工藝，探討桔梗趁鮮切片的可行性。

1 儀器、試藥及材料

1.1 儀器

QWZL-150D型直線(xiàn)往復(fù)式切藥機(jī)(臺(tái)州博大制藥機(jī)械科技有限公司)，RHP-100型高速多功能粉碎機(jī)(浙江永康市榮浩工貿(mào)有限公司)，DHG-9245A型電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)，HWS26型電熱恒溫水浴鍋(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)，XS204型電子天平(d=0.1 mg，Mettler Toledo)，MS603S型電子天平(d=1 mg，Mettler Toledo)，KQ-500DA型數(shù)控超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，DIONEX Ultimate 3000高效液相色譜儀(ELSD檢測(cè)器)。

1.2 試藥

桔梗皂苷D(111851-201607，中國(guó)食品藥品檢定研究院，純度94.0%)，乙腈(色譜純，merck)，甲醇、正丁醇、乙醇等均為分析純，超純水。

1.3 材料

桔梗藥材于2019年7月30日采于云南省德欽縣，經(jīng)廣州香雪制藥股份有限公司康志英高級(jí)工程師鑒定為桔?？浦参锝酃latycodongrandiflorum(Jacq.)A.DC.干燥根。

2 方法與結(jié)果

2.1 傳統(tǒng)加工工藝制備飲片

將采集的桔梗鮮品洗凈，除去須根，60 ℃干燥處理加工成藥材，再按《中國(guó)藥典》方法處理：洗凈，潤(rùn)透，切厚片(4 mm)，60 ℃烘至水分合適。

2.2 趁鮮加工工藝制備飲片

將采集的桔梗鮮藥材除去須根及泥土等雜質(zhì)，平均分成2份，剝?nèi)ネ馄せ虿蝗ネ馄?，切厚?4 mm)，60 ℃烘至水分合適。

2.3 浸出物含量的測(cè)定

取各桔梗樣品粗粉約2 g，精密稱(chēng)定，置150 mL的錐形瓶中，精密加乙醇50 mL，密塞，稱(chēng)定重量，靜置1 h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱(chēng)定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取濾液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱(chēng)定重量，計(jì)算樣品中浸出物的含量(%)。

2.4 桔梗皂苷D含量的測(cè)定

2.4.1 色譜條件 依利特SinoChrom ODS-BP(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相：乙腈-水(25∶75)，檢測(cè)器：ELSD檢測(cè)器，流速：1 mL/min，柱溫：30 ℃，進(jìn)樣量：5 μL、10 μL。在此條件下，桔梗皂苷D分離較好，HPLC色譜見(jiàn)圖1。

A：對(duì)照品；B：供試品；C：空白對(duì)照；1：桔梗皂苷D

2.4.2 對(duì)照品溶液的制備 取桔梗皂苷D對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，即得。

2.4.3 供試品溶液的制備 取本品粉末(過(guò)二號(hào)篩)約2 g，精密稱(chēng)定，精密加入50%甲醇50 mL，稱(chēng)定重量，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)30 min，放冷，再稱(chēng)定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25 mL，置水浴上蒸干，殘?jiān)铀?0 mL，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，用氨試液50 mL洗滌，棄去氨液，再用正丁醇飽和的水50 mL洗滌，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，加硅膠0.5 g拌勻，置水浴上蒸干，加于硅膠柱100～120目，10 g，內(nèi)徑為2 cm，用三氯甲烷-甲醇(9∶1)混合溶液濕法裝柱上，以三氯甲烷-甲醇(9∶1)混合溶液50 mL洗脫，棄去洗脫液，再用三氯甲烷-甲醇-水(60∶20∶3)混合溶液100 mL洗脫，棄去洗脫液，繼用三氯甲烷-甲醇-水(60∶29∶6)混合溶液100 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。

2.4.4 線(xiàn)性關(guān)系考察 將標(biāo)準(zhǔn)溶液分別進(jìn)樣1、3、5、7、10、15 μL檢測(cè)，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行回歸分析，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程：Y=1.547X+1.3419，r=0.999 3，說(shuō)明桔梗皂苷D在0.022 1～2.535 μg之間有較好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.4.5 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果：桔梗皂苷D的峰面積RSD為0.7%，說(shuō)明儀器精密度良好。

2.4.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12、24 h進(jìn)樣檢測(cè)，測(cè)定桔梗皂苷D峰面積，結(jié)果：峰面積RSD為1.4%，說(shuō)明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批藥材，制備供試品溶液6份，按色譜條件項(xiàng)進(jìn)樣分析，測(cè)定峰面積，結(jié)果：峰面積的RSD為1.0%，說(shuō)明方法重復(fù)性良好。

2.4.8 加樣回收試驗(yàn) 精密稱(chēng)取同一批次已知含量的樣品1 g，共6份，按1∶1加入桔梗皂苷D對(duì)照品適量，按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 桔梗皂苷D回收率試驗(yàn)

2.5 樣品測(cè)定

按照上述實(shí)驗(yàn)方法，測(cè)定兩種加工工藝所得的桔梗飲片中浸出物及桔梗皂苷D的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件，對(duì)浸出物及桔梗皂苷D含量進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果表明，趁鮮與傳統(tǒng)加工工藝所得的桔梗飲片中浸出物及桔梗皂苷D含量的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，趁鮮加工工藝所制得的飲片中浸出物及桔梗皂苷D含量均明顯高于傳統(tǒng)加工工藝所得的飲片，且趁鮮加工工藝省時(shí)省力。結(jié)果提示，趁鮮加工工藝優(yōu)于傳統(tǒng)加工工藝，這也在一定程度上證實(shí)了桔梗趁鮮切片的可行性。

表2 含量測(cè)定結(jié)果 (%)

3 結(jié)論與討論

本研究說(shuō)明，趁鮮加工工藝制得的飲片中浸出物及桔梗皂苷D的含量均高于傳統(tǒng)加工工藝所得的飲片，且兩種工藝所制得的飲片浸出物及桔梗皂苷D的含量均符合《中國(guó)藥典》的要求，此外，趁鮮加工工藝省去了桔梗由鮮品加工成藥材及藥材再軟化的步驟，省時(shí)省力且降低了有效成分的損失，因此，趁鮮加工工藝具有一定的可行性及優(yōu)越性。

同時(shí)，桔梗是否刮皮是規(guī)范炮制工藝的一個(gè)關(guān)鍵性的問(wèn)題，研究中發(fā)現(xiàn)，去皮桔梗浸出物及桔梗皂苷D的含量均高于帶皮桔梗，這與石俊英、許傳蓮等人[8-9]研究的結(jié)論一致，因此建議桔梗趁新鮮除去栓皮，除去栓皮后不但有效成分較高，且易于干燥，藥材及飲片色澤潔白、美觀(guān)。