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    Yes相關(guān)蛋白及碳酸酐酶Ⅸ蛋白的表達(dá)與鼻咽癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系

    2021-04-22 11:37:28楊,露,丹,
    實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志 2021年6期
    關(guān)鍵詞:碳酸酐酶鼻咽癌病理學(xué)

    岳 楊, 鄭 露, 雍 丹, 許 海

    (1. 湖北省公安縣人民醫(yī)院 耳鼻咽喉科, 湖北 荊州, 434300;2. 湖北中醫(yī)藥大學(xué)黃家湖醫(yī)院 醫(yī)務(wù)科, 湖北 武漢, 430070)

    鼻咽癌是一種低分化腫瘤,起源于鼻咽黏膜,具有高度侵襲性和易轉(zhuǎn)移的特點(diǎn),鼻咽的位置隱蔽,不易被檢查發(fā)現(xiàn),早期臨床癥狀也不明顯,容易延誤診斷和治療[1]。鼻咽癌的主要臨床癥狀有頭痛、出血和頸部淋巴結(jié)腫大。相較于T1~2期鼻咽癌患者, T4期患者的5年局部控制率較差,患者預(yù)后不良[2]。Yes相關(guān)蛋白(YAP)基因位于11q22, 并在人體內(nèi)幾乎所有組織中均有表達(dá)[3],特別是在胎盤(pán)組織、前列腺組織、睪丸組織、卵巢組織中表達(dá)水平較高,但在外周血白細(xì)胞中檢測(cè)不到[4]。碳酸酐酶Ⅸ是一種跨膜蛋白,是與腫瘤相關(guān)的蛋白,主要在正常的上消化道和胰腺、膽囊、肝臟等相關(guān)器官中表達(dá),在許多實(shí)體瘤中也高度表達(dá)[5]。本研究分析鼻咽癌組織中YAP、碳酸酐酶Ⅸ蛋白的表達(dá)與腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系,現(xiàn)報(bào)告如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    選取2016年2月—2019年4月本院經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)的鼻咽癌組織標(biāo)本80例(鼻咽癌組)、鼻咽黏膜慢性炎癥組織標(biāo)本80例(對(duì)照組)。納入標(biāo)準(zhǔn): ① 鼻咽癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《外科學(xué)(第8版)》[6]中的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn); ② 所有患者均經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí); ③ 在獲取本研究相關(guān)標(biāo)本前,患者均未接受放化療; ④ 患者年齡、性別及病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果完整。排除標(biāo)準(zhǔn): ① 伴有其他部位惡性腫瘤者; ② 合并免疫系統(tǒng)疾病患者; ③ 長(zhǎng)期使用免疫調(diào)節(jié)劑、糖皮質(zhì)激素者; ④ 合并造血系統(tǒng)疾病者; ⑤ 合并其他類型的鼻咽部疾病者。

    鼻咽癌組年齡44~77歲,平均(63.70±8.00)歲; 男52例,女28例; 病理學(xué)分化程度包括分化型29例,未分化型51例; 鼻咽癌病理學(xué)分期包括Ⅰ期12例, Ⅱ期23例, Ⅲ期37例, Ⅳ期8例; 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移45例; 病灶最大徑>2.0 cm者45例, ≤2.0 cm者35例。對(duì)照組年齡38~75歲,平均(62.50±11.30)歲。2組患者年齡、性別對(duì)比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

    1.2 方法

    應(yīng)用抗生物素蛋白免疫組織檢測(cè)法。主要步驟: 石蠟切片4.0 mm, 60 ℃烘烤3 h, 常規(guī)脫蠟,加3%過(guò)氧化氫(H2O2)處理10 min; 在室溫下孵育, PBS洗滌3次, 3 min/次; 檸檬酸溶液修復(fù), PBS洗滌3次, 3 min/次; 加一抗孵育過(guò)夜, PBS洗滌3次, 3 min/次; 添加聚合物增強(qiáng)劑,在室溫下孵育20 min, PBS洗滌3次, 3 min/次,添加酶標(biāo)記的抗小鼠聚合物(二抗),在室溫下孵育30 min, PBS洗滌3次, 3 min/次,用水沖洗,用蘇木精染色,封片。試劑盒購(gòu)自北京中山生物制品有限公司。

    1.3 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

    YAP蛋白陽(yáng)性染色表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核,碳酸酐酶Ⅸ蛋白的陽(yáng)性染色表達(dá)于細(xì)胞核, YAP蛋白與碳酸酐酶Ⅸ蛋白的陽(yáng)性染色呈黃色、棕黃色、褐色表達(dá),依據(jù)染色的程度計(jì)分,未染色計(jì)0分,淡黃色染色計(jì)1分,棕黃色染色計(jì)2分,褐色、黑色染色計(jì)3分。根據(jù)染色的細(xì)胞比率計(jì)分,染色細(xì)胞比率≤10%計(jì)1分, >10%~50%計(jì)2分, >50%~75%計(jì)3分, >75%計(jì)4分。染色程度與陽(yáng)性細(xì)胞的計(jì)分乘積<3分為陰性, ≥3分為陽(yáng)性。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    2 結(jié) 果

    2.1 2組標(biāo)本中YAP蛋白、碳酸酐酶Ⅸ蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較

    免疫組化染色后,鼻咽癌組標(biāo)本中YAP蛋白、碳酸酐酶Ⅸ蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為76.25%、58.75%, 對(duì)照組標(biāo)本中YAP蛋白、碳酸酐酶Ⅸ蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為36.25%、20.00%, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見(jiàn)表1、圖1。

    表1 2組標(biāo)本中YAP蛋白、碳酸酐酶Ⅸ蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較[n(%)]

    A: 對(duì)照組YAP蛋白表現(xiàn); B: 鼻咽癌組YAP蛋白表現(xiàn); C: 對(duì)照組碳酸酐酶Ⅸ蛋白表現(xiàn); D: 鼻咽癌組碳酸酐酶Ⅸ蛋白表現(xiàn)。

    2.2 鼻咽癌組不同臨床病理學(xué)特征下YAP蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較

    在不同年齡、性別、病灶最大徑、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的鼻咽癌組織中, YAP蛋白陽(yáng)性表達(dá)率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05); 在未分化及病理學(xué)分期Ⅲ、Ⅳ期的鼻咽癌組織中, YAP蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于分化型及病理學(xué)分期Ⅰ、Ⅱ期的鼻咽癌組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

    表2 鼻咽癌組不同臨床病理學(xué)特征下YAP蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較[n(%)]

    2.3 鼻咽癌組不同臨床病理學(xué)特征下碳酸酐酶Ⅸ蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較

    在不同年齡、性別、病灶最大徑、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理學(xué)分化程度、病理學(xué)分期的鼻咽癌組織中,碳酸酐酶Ⅸ蛋白陽(yáng)性表達(dá)率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

    表3 鼻咽癌組不同臨床病理學(xué)特征下碳酸酐酶Ⅸ蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較[n(%)]

    3 討 論

    鼻咽癌在中國(guó)的發(fā)病率較高,發(fā)病年齡為30~50歲[7], 發(fā)病隱匿,診斷時(shí)約75%的患者處于中晚期,5年生存率低于50%[8]。鼻咽癌的發(fā)生是一個(gè)多階段、多路徑、多機(jī)制的過(guò)程,發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜,與遺傳和環(huán)境因素有關(guān)[9]。治療后復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是影響患者預(yù)后的主要因素,但其發(fā)生機(jī)制尚不清楚[10]。因此,研究鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制,對(duì)鼻咽癌患者的診斷、治療和預(yù)后評(píng)估具有重要的意義。

    YAP分子量約65 kD, 富含脯氨酸,是Hippo信號(hào)通路中的主要效應(yīng)子,其過(guò)表達(dá)與腫瘤發(fā)生有關(guān)[11]。Hippo通路在遺傳上高度保守,其主要功能是調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和凋亡之間的平衡,并參與調(diào)節(jié)胚胎的生長(zhǎng)發(fā)育和細(xì)胞接觸性抑制,該途徑發(fā)生異常時(shí)可引發(fā)多種疾病[12]。Hippo-YAP信號(hào)通路一旦發(fā)生異常,細(xì)胞增殖與凋亡間的平衡將被破壞,導(dǎo)致腫瘤形成[13]。本研究結(jié)果顯示,鼻咽癌組織中的YAP蛋白陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于對(duì)照組,推測(cè)YAP在鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要的作用,是鼻咽癌靶向治療新的分子標(biāo)記和靶標(biāo),可能是因哺乳動(dòng)物不育系中20樣激酶的表達(dá)降低或缺失所致,但具體機(jī)制仍不清楚。在未分化及Ⅲ、Ⅳ期鼻咽癌組織中, YAP蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于分化型及Ⅰ、Ⅱ期鼻咽癌組織,與患者年齡、性別、病灶最大徑、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等無(wú)關(guān),這可能與組織器官特異性有關(guān)。

    碳酸酐酶是與缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)調(diào)控系統(tǒng)內(nèi)缺氧相關(guān)的靶基因[14]。研究[15]證實(shí)實(shí)體瘤中缺氧微環(huán)境的存在是影響腫瘤生物學(xué)行為以及放療和化療效果的重要因素。碳酸酐酶Ⅸ蛋白是一種由酸性氨基酸組成的跨膜糖蛋白,主要表達(dá)于細(xì)胞膜基底的外側(cè),促使腫瘤細(xì)胞“內(nèi)堿外酸”,利于腫瘤細(xì)胞耐缺氧[16]。碳酸酐酶Ⅸ蛋白的表達(dá)強(qiáng)度與癌細(xì)胞的分化、侵襲深度和復(fù)發(fā)頻率有關(guān),表達(dá)水平越高提示預(yù)后越差[17]。研究[18]表明,碳酸酐酶Ⅸ蛋白活性抑制劑可用于治療缺氧性腫瘤,表明碳酸酐酶Ⅸ蛋白參與了腫瘤的形成。本研究結(jié)果顯示,鼻咽癌組織中的碳酸酐酶Ⅸ蛋白陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于對(duì)照組,但其表達(dá)水平與腫瘤的臨床病理特征無(wú)顯著相關(guān)性,可能是快速生長(zhǎng)的腫瘤細(xì)胞促進(jìn)了氧化磷酸化和無(wú)氧酵解,從而改變了腫瘤的微環(huán)境。碳酸酐酶Ⅸ蛋白參與了與腫瘤轉(zhuǎn)化有關(guān)的葡萄糖代謝的轉(zhuǎn)移,并促使腫瘤細(xì)胞中的堿變成外源酸,從而為腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和侵襲創(chuàng)造了條件。

    綜上所述,鼻咽癌組織中YAP蛋白、碳酸酐酶Ⅸ蛋白表達(dá)顯著上調(diào),其中YAP蛋白表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切,但YAP、碳酸酐酶Ⅸ蛋白的分子調(diào)節(jié)機(jī)制尚不明確,仍需進(jìn)一步的研究。

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