生物活性玻璃對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖及成血管的作用

黃麗東，宮瑋玉，董艷梅

(北京大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院·口腔醫(yī)院，牙體牙髓科 國家口腔疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心 口腔數(shù)字化醫(yī)療技術(shù)和材料國家工程實(shí)驗(yàn)室 口腔數(shù)字醫(yī)學(xué)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 北京 100081)

生物材料具有生物活性和生物降解性，能夠刺激骨細(xì)胞產(chǎn)生應(yīng)答反應(yīng)，在誘導(dǎo)骨組織再生的同時(shí)被機(jī)體吸收，使缺損部位為新骨取代，因而作為植骨材料廣泛應(yīng)用于骨組織工程中[1-4]。然而，當(dāng)用生物材料修復(fù)較大范圍骨缺損時(shí)，常會(huì)出現(xiàn)新生組織的形成在外周區(qū)域多而中心區(qū)域缺乏的現(xiàn)象，究其原因主要是由于材料內(nèi)部新生血管不足、中心部位缺血、組織無法獲得持續(xù)的養(yǎng)分和氧氣供給，使得新生組織無法形成或發(fā)生壞死[5]。在生物材料上植入血管內(nèi)皮細(xì)胞、載荷促血管生長因子等方式可促進(jìn)血管形成，但存在內(nèi)皮細(xì)胞取材、培養(yǎng)和擴(kuò)增周期長，生長因子在體內(nèi)半衰期短等問題，無法達(dá)到理想的效果，因此，有必要尋找一種生物活性材料，具有良好的成骨作用，同時(shí)能夠誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞向骨缺損區(qū)域和材料內(nèi)部遷移，在骨缺損愈合過程中形成同步的再血管化。

生物活性玻璃具有良好的生物活性和骨誘導(dǎo)性，在臨床應(yīng)用中取得了較好的治療效果[3, 6-9]。與羥基磷灰石、磷酸三鈣等材料相比，生物活性玻璃具有骨誘導(dǎo)作用，能夠刺激周圍的間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化，不僅支持新骨在骨-材料界面生長，還能誘導(dǎo)骨組織在材料內(nèi)部、遠(yuǎn)離骨-材料界面的部位生長[10]。在成血管方面，生物活性玻璃及其離子溶出物能夠促進(jìn)成纖維細(xì)胞分泌血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)等血管源性生長因子[11]，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞向骨缺損區(qū)域和材料內(nèi)部遷移、增殖[12-13]，形成脈管系統(tǒng)。體內(nèi)研究[14-17]也表明，生物活性玻璃涂層復(fù)合材料具有促進(jìn)血管生成的能力，但在一些研究中，生物活性玻璃未能表現(xiàn)出促進(jìn)血管生成的作用，可能與材料的制備工藝、形貌結(jié)構(gòu)及材料濃度等因素有關(guān)[18-20]。

隨著制備工藝的改進(jìn)與發(fā)展，生物活性玻璃的生物活性不斷提高。溶膠-凝膠法制備的生物活性玻璃，顆粒形態(tài)和大小可控，比表面積增大，較第一代熔融法制備的45S5生物活性玻璃具有更高的生物活性[21]。以植酸為前驅(qū)體制備的生物活性玻璃(phytic acid derived bioactive P2O5-SiO2-CaO gel-glasses, PSC)，是一種采用溶膠-凝膠法制備、具有我國自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的的新型生物活性玻璃，由中國科學(xué)院化學(xué)研究所制備[22]。植酸(分子式C6H18O24P6)是一種從植物種籽中提取的有機(jī)磷酸化合物，較傳統(tǒng)的磷前驅(qū)體毒性小，且可使玻璃的制備過程不再需要400～600 ℃煅燒，提高了材料的生物相容性和生物活性。用PSC制備的可注射型復(fù)合骨水泥應(yīng)用于兔股骨缺損修復(fù)，能夠顯著促進(jìn)骨組織再生[23]，顯示PSC在骨組織修復(fù)領(lǐng)域具有較好的應(yīng)用前景。然而，PSC在成血管方面是否具有良好的作用尚未得到證實(shí)，因此，本研究旨在觀察PSC對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)增殖、血管生長因子表達(dá)及體外成血管作用的影響，為PSC進(jìn)一步應(yīng)用于骨組織工程奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

主要試劑與材料：HUVECs購自美國ScienCell公司，達(dá)爾伯克氏改良伊格爾培養(yǎng)基(Dulbecco’s modified eagle medium, DMEM)、胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)、青霉素/鏈霉素混合液、內(nèi)皮細(xì)胞生長因子購自美國ScienCell公司，胰蛋白酶購自美國Gibco公司，甲基噻唑基四唑溶液[(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT]購自美國Sigma公司，Trizol購自美國Invitrogen公司，F(xiàn)astStart Universal SYBR Green Master反轉(zhuǎn)錄試劑盒購自美國Roche公司，二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)購自美國Ameresco公司，Matrigel基質(zhì)膠購自美國BD公司，活細(xì)胞染色試劑盒購自美國Sigma公司，細(xì)胞培養(yǎng)皿等耗材購自美國Corning公司。

主要設(shè)備：酶標(biāo)儀(ELX808)購自美國BioTek公司，實(shí)時(shí)定量PCR儀(StepOne Plus)購自美國ABI公司，倒置相差顯微鏡(Ts100)購自日本Nikon公司。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)

原代HUVECs培養(yǎng)于內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基(endothelial cell medium, ECM)， 培養(yǎng)基成分(體積分?jǐn)?shù))為DMEM(93%)+FBS(5%)+內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(1%)+青霉素/鏈霉素(1%)， 置于37 ℃、5%(體積分?jǐn)?shù))CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每2～3天換一次培養(yǎng)基，待細(xì)胞達(dá)80%～90%融合時(shí)消化傳代，取5～7代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.3 PSC浸提液的制備

PSC由中國科學(xué)院化學(xué)所邱東教授實(shí)驗(yàn)室制備[22]，化學(xué)組成(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為P2O5(22.7%)、SiO2(48.2%)、CaO(29.1%)，顆粒為無規(guī)則形態(tài)，平均粒徑為(21±12) μm，比表面積為53.5 m2/g。

PSC浸提液的制備是將PSC粉末置于180 ℃恒溫箱中高溫干熱滅菌4 h后，加入ECM，在37 ℃水平搖床中以100 r/m浸提24 h，用0.22 μm濾器過濾除菌，再加入5%FBS、1%內(nèi)皮細(xì)胞生長因子和1%青霉素/鏈霉素制備成含有不同濃度(0.01、0.1、1和2 g/L)PSC浸提液的ECM[23]。

1.4 MTT檢測HUVECs的增殖

用含有不同濃度(0、0.01、0.1、1和2 g/L)PSC浸提液的ECM培養(yǎng)HUVECs，采用MTT法比較其對(duì)HUVECs的增殖作用。細(xì)胞按密度3×103個(gè)/孔等量接種于96孔板中，每組5個(gè)復(fù)孔，37 ℃、5%CO2細(xì)胞孵育箱中孵育貼壁。24 h后，分別加入100 μL含不同濃度PSC浸提液的ECM，記為第0天，隔天換液。第1、3、5、7、10天，待測培養(yǎng)孔內(nèi)加入180 μL新鮮ECM、20 μL 5 g/L MTT溶液，培養(yǎng)4 h后，每孔加入150 μL DMSO，置37 ℃搖床上振蕩10 min至結(jié)晶物充分溶解。各孔溶液轉(zhuǎn)移入新的96孔板，置于酶標(biāo)儀內(nèi)，以波長490 nm測定光密度值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，平均光密度值為縱坐標(biāo)繪制細(xì)胞增殖曲線。

1.5 實(shí)時(shí)反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(real-time reverse transcription-polymerase chain reaction, real-time RT-PCR)檢測HUVECs成血管基因VEGF、bFGF的表達(dá)

根據(jù)第1.4小節(jié)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇最適于細(xì)胞生長的PSC浸提液濃度用于觀察PSC對(duì)HUVECs分化的作用。采用real-time RT-PCR法檢測血管生長因子VEGF、bFGF的基因表達(dá)情況。細(xì)胞分別按密度1×105、0.8×105、0.5×105個(gè)/孔接種于6孔板中，37 ℃、5%CO2細(xì)胞孵育箱中孵育貼壁。24 h后，按實(shí)驗(yàn)分組分別加入1 mL PSC浸提液或ECM，記為第0天，隔天換液。第2、4、7天用Trizol裂解細(xì)胞，提取總RNA。使用FastStart Universal SYBR Green Master反轉(zhuǎn)錄試劑盒，各組均用2.0 g總RNA在20 μL反應(yīng)體系中進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。目的基因?yàn)閂EGF、bFGF，將管家基因GAPDH作為內(nèi)參，引物序列見表1。Real-time RT-PCR為每管20 μL的擴(kuò)增反應(yīng)體系，95 ℃ 3 min預(yù)變性同時(shí)激活DNA聚合物，95 ℃變性3 s，60 ℃退火及延伸20 s，共40個(gè)循環(huán)。數(shù)據(jù)分析采用2-ΔΔCt法，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

表1 Real-time RT-PCR中成血管基因的引物序列Table 1 Primers of target genes for real-time RT-PCR

1.6 體外小管形成實(shí)驗(yàn)檢測HUVECs的血管形成能力

根據(jù)第1.4小節(jié)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇最適于細(xì)胞生長的PSC浸提液濃度，采用體外小管形成實(shí)驗(yàn)檢測HUVECs形成血管的能力。將Matrigel基質(zhì)膠4 ℃溶解，96孔板置于冰盒上，每孔加入50 μL基質(zhì)膠。在37 ℃、5%CO2孵箱中放置30 min后，HUVECs分別重懸于PSC浸提液或ECM中，按每孔3 000個(gè)接種于基質(zhì)膠上，避免產(chǎn)生氣泡。第4、10小時(shí)使用活細(xì)胞染色試劑盒進(jìn)行細(xì)胞染色，倒置相差顯微鏡下觀察小管形成情況。每孔選取9個(gè)視野進(jìn)行小管計(jì)數(shù)，應(yīng)用Image J軟件對(duì)小管數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 24.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用單因素方差分析(ANOVA)分別對(duì)各組別細(xì)胞的增殖情況、血管生長因子基因表達(dá)情況、小管形成實(shí)驗(yàn)的成管數(shù)目進(jìn)行總體分析，組間比較采用LSD檢驗(yàn)，如果數(shù)據(jù)方差不齊則采用秩和檢驗(yàn)(Kruskal-WallisHtest)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PSC對(duì)HUVECs增殖的作用

用MTT法檢測HUVECs在不同濃度PSC浸提液作用下的增殖情況(圖1)， 結(jié)果顯示，含有0.1 g/L PSC浸提液組對(duì)細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用最為顯著，其光密度值在第5、7天時(shí)高于ECM組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001，P<0.001)；含有1 g/L PSC浸提液組對(duì)細(xì)胞增殖也有一定的促進(jìn)作用，光密度值在第5、7天高于ECM組，其中第5天的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)， 但第7天時(shí)光密度值仍低于0.1 g/L組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.033)；含有2 g/L PSC浸提液組對(duì)細(xì)胞的增殖呈現(xiàn)出一定的抑制作用，其第10天光密度值低于ECM組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001)； 0.01 g/L組在各時(shí)間點(diǎn)與ECM組的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

ECM, endothelial cell medium; PSC, phytic acid derived bioactive P2O5-SiO2-CaO gel-glasses; HUVECs, human umbilical vein endothelial cells. *P<0.05, 0.1g/L vs. ECM; #P<0.05, 1 g/L vs. ECM; & P<0.05, 2 g/L vs. ECM.圖1 PSC對(duì)HUVECs增殖的作用Figure 1 Effect of PSC on HUVECs proliferation

2.2 PSC對(duì)HUVECs成血管基因VEGF、bFGF表達(dá)的作用

根據(jù)第2.1小節(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇含0.1 g/L PSC浸提液對(duì)HUVECs進(jìn)行培養(yǎng)，采用real-time RT-PCR法檢測HUVECs成血管基因VEGF、bFGF的表達(dá)情況，結(jié)果顯示第4天時(shí)，PSC組VEGF、bFGF的基因表達(dá)量分別是ECM組的 1.59倍(P=0.011)和1.45倍(P=0.020)；第7天時(shí)，PSC組VEGF、bFGF的基因表達(dá)量分別是ECM組的 1.98倍(P=0.021)和1.37倍(P=0.018)， 與ECM組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖2)。

ECM, endothelial cell medium; PSC, phytic acid derived bioactive P2O5-SiO2-CaO gel-glasses; VEGF, vascular endothelial growth factor; bFGF, basic fibroblast growth factor; HUVECs, human umbilical vein endothelial cells.圖2 PSC對(duì)HUVECs成血管基因VEGF、bFGF表達(dá)的作用Figure 2 Effect of PSC on the mRNA expression of VEGF and bFGF

2.3 PSC對(duì)HUVECs體外形成小管能力的作用

選擇含0.1 g/L PSC浸提液的ECM對(duì)HUVECs進(jìn)行培養(yǎng)，用體外小管形成實(shí)驗(yàn)檢測PSC對(duì)HUVECs血管形成能力的作用。結(jié)果顯示第4小時(shí)PSC組、ECM組均以細(xì)胞堆疊及出芽形成分支結(jié)構(gòu)為主，完整的小管數(shù)量較少(圖3A、B)。鏡下計(jì)數(shù)及Image J軟件分析顯示，PSC組的小管數(shù)目(12.33±2.18)多于ECM組(10.33±3.82)，但兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖3C)。在第10小時(shí)，PSC組、ECM組均形成了大量小管結(jié)構(gòu)，PSC組的小管結(jié)構(gòu)相對(duì)完整且分布密集，而ECM組仍見到一些未連成管的分支結(jié)構(gòu)(圖3D、E)， 計(jì)數(shù)結(jié)果顯示PSC組的小管數(shù)目(29.63±2.29)顯著高于ECM組(20.13±2.36)， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.033,圖3F)。

3 討論

血管再生在創(chuàng)傷愈合、組織修復(fù)再生中具有重要意義，伴行的血管可以為細(xì)胞及新生組織提供氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，清除代謝產(chǎn)物，同時(shí)發(fā)揮引導(dǎo)和蓄積細(xì)胞、生長因子等作用，為骨代謝提供關(guān)鍵信號(hào)[24]。在組織工程化骨內(nèi)，周圍來源的組織營養(yǎng)液彌散范圍僅1 mm，因此血管生成不足將導(dǎo)致新生組織無法獲得持續(xù)的養(yǎng)分和氧氣供給，新生組織周圍微環(huán)境和生化信號(hào)改變，非正常細(xì)胞募集，最終導(dǎo)致生物材料與機(jī)體的融合替代失敗，無法實(shí)現(xiàn)組織的新生和長期維持[5]。

ECM, endothelial cell medium; PSC, phytic acid derived bioactive P2O5-SiO2-CaO gel-glasses; HUVECs, human umbilical vein endothelial cells. A, HUVECs tubule formation of PSC group on the 4th hour; B, HUVECs tubule formation of ECM group on the 4th hour; C, the number of tubules on 4th hour; D, HUVECs tubule formation of PSC group on the 10th hour; E, HUVECs tubule formation of ECM group on the 10th hour; F, the number of tubules on 10th hour.圖3 PSC對(duì)HUVECs形成小管的作用Figure 3 Effect of PSC on HUVECs tubule formation

在骨組織工程中應(yīng)用具有良好成骨、成血管作用的生物材料，在骨組織愈合的同時(shí)形成相伴行的血管，有利于解決新生組織營養(yǎng)供給不足的問題，從而更好地實(shí)現(xiàn)骨缺損修復(fù)?；仡櫼酝芯縖11-17]，生物活性玻璃能夠促進(jìn)血管生長因子基因表達(dá)與蛋白合成，刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，進(jìn)而促進(jìn)小管結(jié)構(gòu)形成與成熟。Day等[11]在含有45S5生物活性玻璃的培養(yǎng)基里培養(yǎng)成纖維細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)低濃度(0.01%～0.2%)生物活性玻璃能夠促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖，0.01%生物活性玻璃能夠顯著促進(jìn)成纖維細(xì)胞分泌VEGF。Mao等[25]用58S、80S生物活性玻璃溶出物培養(yǎng)HUVECs，發(fā)現(xiàn)能夠激活VEGF、bFGF及其受體基因，促進(jìn)VEGF、bFGF蛋白合成，進(jìn)而刺激HUVECs增殖，加速細(xì)胞遷移，發(fā)揮促進(jìn)血管形成的作用。但也有研究發(fā)現(xiàn)，生物活性玻璃未能表現(xiàn)出促進(jìn)血管形成的作用[18-20]，傳統(tǒng)45S5生物活性玻璃在體液中溶解后釋放大量陽離子，導(dǎo)致溶液pH值明顯升高，隨濃度變化可達(dá)8.8～9.0[26]，高堿性環(huán)境不利于血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，影響其形成血管的作用[27]。此外，Leu等[28]用含有45S5生物活性玻璃(0.6、1.2、6和12 mg)涂層的膠原海綿材料培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)1.2 mg組能夠顯著促進(jìn)細(xì)胞增殖、VEGF基因表達(dá)及血管形成，0.6和6 mg組對(duì)細(xì)胞增殖和基因表達(dá)的促進(jìn)作用弱于1.2 mg組，而12 mg組則對(duì)細(xì)胞增殖、基因表達(dá)產(chǎn)生抑制作用，提示生物活性玻璃對(duì)細(xì)胞的生物刺激作用具有濃度依賴性，選擇適宜濃度的生物活性玻璃也是實(shí)現(xiàn)血管再生的關(guān)鍵因素之一。

本研究中，0.1、1 g/L PSC浸提液對(duì)HUVECs增殖具有促進(jìn)作用，其中以0.1 g/L增殖促進(jìn)作用最為顯著，較低濃度0.01 g/L對(duì)HUVECs的增殖無明顯促進(jìn)作用，而較高濃度2 g/L的濃度對(duì)HUVECs的增殖具有抑制作用。生物活性玻璃對(duì)細(xì)胞的增殖、分化等行為的調(diào)控具有濃度依賴性，且Si、Ca離子的濃度對(duì)細(xì)胞的增殖、分化等產(chǎn)生重要影響。Shie等[31]研究發(fā)現(xiàn)，適宜濃度(4 mmol/L)的Si離子通過刺激細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期S、G2期促進(jìn)細(xì)胞增殖，而較高濃度(6 mmol/L)的Si離子會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞增殖顯著下降。Maeno等[32]則發(fā)現(xiàn)2～8 mmol/L Ca離子有利于成骨細(xì)胞增殖、分化及礦化，濃度高于10 mmol/L的Ca離子則具有成骨細(xì)胞毒性。由此可見，生物活性玻璃釋放的離子濃度與其生物刺激作用呈現(xiàn)一種“雙向”關(guān)系，其離子濃度在適宜范圍內(nèi)發(fā)揮正向生物刺激作用，而當(dāng)離子濃度過低或過高時(shí)，細(xì)胞的活性將受到抑制。本研究中，0.1 g/L PSC浸提液最適于HUVECs增殖，可能與其釋放適宜濃度的Si、Ca等離子有關(guān)；而2 g/L PSC浸提液可能釋放過高濃度的Si、Ca離子，對(duì)細(xì)胞的生理活動(dòng)產(chǎn)生抑制作用，因此，篩選適宜的生物活性玻璃濃度有利于細(xì)胞更好的生長，對(duì)觀察其生物學(xué)作用具有重要意義。

本研究顯示，0.1 g/L PSC浸提液在第4、7天能夠顯著上調(diào)HUVECs內(nèi)VEGF、bFGF的基因水平；在小管形成實(shí)驗(yàn)第10小時(shí)，即血管形成中期，PSC組小管的成熟度及密度顯著優(yōu)于ECM組。上述結(jié)果提示PSC具有良好的促血管形成作用，這與以往許多生物活性玻璃成血管的研究結(jié)果一致[11-17]。同時(shí)，研究表明生物活性玻璃釋放Si離子在其促血管化過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[33-34]。生物材料釋放高濃度的Si離子能夠顯著上調(diào)VEGF、bFGF等促血管生成因子及其受體表達(dá)，刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞合成血管源性一氧化氮合酶，增加一氧化氮表達(dá)，而一氧化氮作為調(diào)節(jié)因子及VEGFR-2反應(yīng)的下游介質(zhì)，進(jìn)一步調(diào)節(jié)血管細(xì)胞遷移與血管形成[33-34]。此外，Si主要分布于骨組織中的鈣化活躍區(qū)，通過在組織修復(fù)早期誘導(dǎo)血管化及骨基質(zhì)礦化，加速骨組織再生[35]。本課題組在前期研究中，將PSC、45S5生物活性玻璃溶于DMEM浸提24 h配制成0.1 g/L浸提液，采用離子體發(fā)射光譜法檢測Si、Ca、P離子釋放情況，發(fā)現(xiàn)PSC、45S5生物活性玻璃能夠顯著升高溶液中Si濃度[DMEM中Si (0.70±0.23)×10-3g/L]，且PSC釋放的Si、P離子濃度[Si (19.43±0.33)×10-3g/L，P (31.59±3.76)×10-3g/L]顯著高于45S5生物活性玻璃[Si (13.96±0.65)×10-3g/L，P (27.78±2.66)×10-3g/L][26]，因此，PSC對(duì)HUVECs增殖及血管形成有良好的促進(jìn)作用，與其釋放較高的Si離子密切相關(guān)。除此之外，PSC磷含量的增加使其在溶解過程中具有更窄的pH值變化范圍，由此可以避免形成高堿環(huán)境影響細(xì)胞的活性，更有利于促進(jìn)血管再生。

綜上所述，PSC能夠促進(jìn)HUVECs增殖、VEGF和bFGF基因表達(dá)以及血管形成。PSC的上述作用具有濃度依賴性，因此為發(fā)揮最大的生物學(xué)效應(yīng)，在制備成臨床應(yīng)用材料時(shí)選取適宜的材料配比至關(guān)重要。