烏金口服液對兔離體小腸平滑肌收縮的影響及機制研究

王君君，朱 莉，宋予震，李月勤

(河南牧業(yè)經(jīng)濟學院 動物醫(yī)藥學院，河南 鄭州 450046)

《本草綱目》記載：烏金石又名石炭，可用于治療“誤吞金銀在腹中不下者”、“腹中積滯”。烏金口服液，是從烏金石內(nèi)提煉出來的經(jīng)現(xiàn)代工藝加工制成的中藥制品，黃腐酸是烏金石有效成份中能溶于水、分子量最小的部分[1]。1998年，我國衛(wèi)生部批準了中藥成方制劑——烏金口服液，該產(chǎn)品中含0.1%黃腐酸，是我國首次經(jīng)國家認可的藥用黃腐酸制劑[2]。烏金口服液屬于處方合劑，具有溫陽散寒、健脾益胃、活血化瘀等功效，臨床一般用于治療胃寒疼痛，脾虛泄瀉及脾不統(tǒng)血所致的出血，胃及十二指腸潰瘍、出血，氣血瘀滯所引起的高血壓等癥[3]。

中醫(yī)藥是我國的文化瑰寶，其防治疾病具有獨特的優(yōu)勢，目前眾多研究者都青睞于從中藥中尋找防治疾病的新藥。研究發(fā)現(xiàn)，機體小腸運動異常是脾氣虛的常見癥狀[4]，烏金口服液具有調(diào)節(jié)脾胃的功效，但烏金口服液對動物腸道機能的影響研究甚少。本實驗以家兔離體小腸平滑肌為研究對象，以平滑肌收縮張力和幅度為指標，觀察烏金口服液對兔離體小腸平滑肌收縮的影響，以初步探討其作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

健康家兔9只，體重2～2.5 kg，雌雄不限，由河南牧業(yè)經(jīng)濟學院實驗動物中心提供。

1.2 藥品及試劑

烏金口服液(江蘇平光制藥有限公司)；鹽酸腎上腺素注射液和阿托品注射液(吉林省華牧動物保健有限公司)；臺氏液，配制方法：NaCl 8.0 g、KCl 0.2 g、CaCl20.2 g、NaHCO31.0 g、NaH2PO4·2H2O 0.07 g、MgSO40.13 g、葡萄糖 1.0 g，加蒸餾水至1000 mL，攪拌至充分溶解，4 ℃存放。

1.3 實驗儀器

BL-420型生物信號采集處理系統(tǒng)、FT-100型張力傳感器和HW-400E恒溫平滑肌試驗系統(tǒng)購自成都泰盟科技有限公司，DK-98-Ⅱ型電熱恒溫水浴鍋購自天津市泰斯特儀器有限公司。

1.4 實驗方法

1.4.1 離體小腸平滑肌制備

試驗前將家兔禁食24 h，用鈍器敲擊頭部，快速處死家兔，迅速剖開腹腔，在胰腺導管開口處附近，剪取十二指腸約1.5 cm，用臺氏液沖洗去除腸內(nèi)容物后，放入38 ℃新鮮臺氏液中通氣備用。

1.4.2 實驗裝置連接

取兩端均用線結(jié)扎過的離體腸管，一端固定于通氣鉤上，另一端用線固定于張力換能器。在(38±0.5)℃條件下，調(diào)節(jié)平滑肌浴槽中氣泡大小，不斷往臺氏液中通氣，以保持腸管活性。用BL-420生物信號采集處理系統(tǒng)記錄腸管的收縮曲線，觀察在正常情況下離體腸管的收縮情況。

1.4.3 實驗處理

待離體腸管的自動節(jié)律性收縮曲線穩(wěn)定后，加入劑量分別為0.35 mL、0.7 mL、1.4 mL的烏金口服液，使平滑肌水浴槽溶液中其終濃度分別為0.0172 mg/mL、0.0338 mg/mL、0.0654 mg/mL，做好加樣標記，分別觀察2 min，以收縮張力(g)、舒張張力(g)、收縮振幅(g，收縮張力-舒張張力)為指標，觀察記錄十二指腸的收縮變化情況。每種濃度藥液試驗結(jié)果記錄完畢，用等溫的臺氏液沖洗腸管3次，每次2 min，待十二指腸運動恢復正常后再做下一項。

待離體腸管的自動節(jié)律性收縮曲線穩(wěn)定后，在平滑肌水浴槽中分別加入腎上腺素0.1mL(終濃度為0.0050 mg/mL)和阿托品0.1 mL(終濃度為0.0050 mg/mL)預處理2 min，記錄離體小腸平滑肌的收縮張力(g)、舒張張力(g)、收縮振幅(g，收縮張力-舒張張力)的變化情況。待收縮穩(wěn)定后，再加入烏金口服液0.7 mL(終濃度為0.0338 mg/mL)，處理2 min，以收縮張力(g)、舒張張力(g)、收縮振幅(g，收縮張力-舒張張力)為指標，觀察記錄小腸收縮變化情況。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標準差(X±SD)表示，組間數(shù)據(jù)采用t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 不同濃度的烏金口服液對離體小腸平滑肌收縮作用的影響

在離體小腸平滑肌恒溫水浴槽中添加不同劑量的烏金口服液，使其終濃度分別為0.0172 mg/mL、0.0338 mg/mL、0.0654 mg/mL，利用BL-420生物信號采集系統(tǒng)記錄離體小腸平滑肌的收縮張力和振幅的變化情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同濃度的烏金口服液對兔離體小腸平滑肌的收縮張力和振幅均有影響。其中烏金口服液終濃度0.0172 mg/mL處理組與給藥前相比，收縮張力、振幅差異極顯著(P<0.01)；烏金口服液終濃度0.0338 mg/mL處理組與給藥前相比，收縮張力、振幅差異極顯著(P<0.01)；烏金口服液終濃度0.0654 mg/mL處理組與給藥前相比，收縮張力、振幅差異極顯著(P<0.01)，實驗結(jié)果見表1和圖1。由此可見烏金口服液能顯著增強兔離體小腸平滑肌的收縮功能。

圖1 不同濃度烏金口服液對家兔離體小腸收縮的影響

2.2 烏金口服液對經(jīng)鹽酸腎上腺素預處理后的兔離體小腸平滑肌收縮的影響

在離體小腸平滑肌恒溫水浴槽中添加0.1 mL鹽酸腎上腺素溶液(終濃度為0.005 mg/mL)預處理2 min，然后再添加0.7 mL烏金口服液，使其終濃度為0.0338 mg/mL，觀察2 min，利用BL-420生物信號采集系統(tǒng)記錄離體小腸平滑肌的收縮張力和振幅的變化情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腎上腺素的預處理使兔離體小腸平滑肌的收縮張力、振幅顯著減小(P<0.01)，表明腎上腺素能夠顯著抑制兔離體小腸平滑肌的運動。再加入烏金口服液后，兔離體小腸平滑肌的收縮張力、振幅顯著增強(P<0.01),結(jié)果見表2和圖2。實驗結(jié)果表明，烏金口服液能顯著改善腎上腺素抑制家兔離體小腸平滑肌的收縮，提高腸管收縮張力和振幅，恢復腸管運動。

表2 腎上腺素與烏金口服液作用對家兔離體小腸運動的影響(X±SD)

圖2 腎上腺素與烏金口服液作用對家兔離體小腸運動的影響

2.3 烏金口服液對阿托品預處理后的兔離體小腸平滑肌收縮的影響

在離體小腸平滑肌恒溫水浴槽中添加0.1 mL阿托品(終濃度為0.0050 mg/mL)預處理2 min，然后再添加0.7 mL烏金口服液，使其終濃度為0.0338 mg/mL，觀察2 min，利用BL-420生物信號采集系統(tǒng)記錄離體小腸平滑肌的收縮張力和振幅的變化情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)阿托品的預處理使兔離體小腸平滑肌的收縮張力、振幅顯著減小(P<0.01)，表明阿托品能顯著抑制兔離體小腸平滑肌的收縮，再加入烏金口服液處理后，兔離體小腸平滑肌的收縮張力、振幅顯著增強(P<0.01),實驗結(jié)果見表3和圖3。結(jié)果表明，烏金口服液能顯著改善阿托品抑制家兔離體小腸平滑肌的收縮，提高腸管收縮張力和振幅，恢復腸管運動。

表3 阿托品與烏金口服液對家兔離體小腸運動的影響(X±SD)

圖3 阿托品與烏金口服液對家兔離體小腸運動的影響

3 討論

烏金口服液是從烏金石中提取的有效成份黃腐酸鈉制成，亦稱黃腐酸鈉口服液，具有止血、活血、保護胃腸粘膜等功效[5]。有研究表明黃腐植酸能提高小龍蝦的生產(chǎn)性能[6]。本研究發(fā)現(xiàn)，不同濃度的烏金口服液能極顯著增強家兔離體小腸平滑肌的收縮張力、運動振幅，從而增強兔離體小腸的運動，表明烏金口服液具有促進小腸運動，推動腸內(nèi)容物向下運動，改善腹瀉、腹痛等的功效。這與《本草綱目》中所記載的用于治療“誤吞金銀在腹中不下者”“腹中積滯”的功效相一致。

胃腸道平滑肌痙攣性收縮引起的腹痛、腹瀉在臨床上很常見，因此胃腸道平滑肌的研究具有非常重要的生物學意義。哺乳動物小腸平滑肌的運動受神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)，分別是外來神經(jīng)叢(自主神經(jīng)交感和副交感神經(jīng))和內(nèi)在神經(jīng)叢(又稱為壁內(nèi)神經(jīng)叢)，其中壁內(nèi)神經(jīng)叢對小腸運動起主要作用，當機械或化學刺激作用于腸壁感受器時，通過局部反射可引起平滑肌蠕動，切斷外來神經(jīng)，小腸的蠕動仍可進行[7]。小腸平滑肌在離體情況下仍可以保持活性，因此，在本實驗中采用平滑肌水浴槽恒溫孵育家兔離體小腸平滑肌，以研究烏金口服液對動物小腸運動的影響及其機制。

研究發(fā)現(xiàn)，哺乳動物胃腸道平滑肌中存在M膽堿能受體、HA受體、5-HT受體等多種受體，且利用Ach、HA處理均能引起腸管平滑肌痙攣性收縮[8]。此外，張琨茹等[9]研究發(fā)現(xiàn)，哺乳動物消化道平滑肌中還存在α腎上腺素能受體。乙酰膽堿可通過激活消化道平滑肌上的M膽堿能受體，引起平滑肌收縮，而腎上腺素可激動α腎上腺素能受體，降低平滑肌收縮的興奮性[10,11]。本實驗研究烏金口服液對家兔離體小腸運動的影響，并利用腎上腺素(α腎上腺素能受體激動劑)和阿托品(M膽堿能受體阻斷劑)預處理來研究烏金口服液影響小腸平滑肌運動的機制。實驗結(jié)果表明，離體小腸平滑肌浴槽中分別加入一定量的腎上腺素和阿托品，離體小腸平滑肌的運動振幅和收縮張力均受到明顯的抑制，再添加烏金口服液進行處理時，離體小腸平滑肌的運動振幅、收縮張力均明顯增強，說明烏金口服液可以明顯改善腎上腺素、阿托品對離體小腸運動收縮張力及振幅的抑制作用。由此推測，烏金口服液具有拮抗腎上腺素對α腎上腺素能受體的激動作用、抑制阿托品對M膽堿能受體的阻斷作用，從而促進小腸運動。但目前烏金口服液對離體小腸運動影響的研究較少，仍需進一步研究其作用機制。

綜上所述，烏金口服液具有促進家兔離體小腸平滑肌運動的作用，其作用機制可能與小腸平滑肌上的α腎上腺素能受體、M膽堿能受體有關(guān)。